Để tiến hành phương pháp ELISA phát hiện kháng nguyên sán lá gan ở bò cần chuẩn bị những nguyên liệu gì?

Nội dung chính

• Muốn xét nghiệm kháng nguyên để chấn đoán bệnh sán lá gan ở bò thì có thể dùng những mẫu bệnh phẩm nào?
• Để tiến hành phương pháp ELISA phát hiện kháng nguyên sán lá gan ở bò cần chuẩn bị những nguyên liệu gì?
• Phương pháp ELISA được thực hiện như thế nào để có thế phát hiện kháng nguyên sán lá gan ở bò như thế nào?

Muốn xét nghiệm kháng nguyên để chấn đoán bệnh sán lá gan ở bò thì có thể dùng những mẫu bệnh phẩm nào?

Theo tiết 5.2.1 tiểu mục 5.1 Mục 5 Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 8400-27:2014 về Bệnh động vật - Quy trình chẩn đoán - Phần 27: Bệnh sán lá gan quy định về việc lẫy mẫu bệnh phẩm như sau:

Cách tiến hành

...

5.2. Chẩn đoán trong phòng thí nghiệm

5.2.1. Lấy mẫu

5.2.1.1. Lấy mẫu cho xét nghiệm kháng thể

- Mẫu huyết thanh: sử dụng xy lanh vô trùng để lấy 1 ml đến 5 ml máu ở tĩnh mạch cổ hoặc động mạch đuôi của trâu, bò, dê, cừu nghi mắc bệnh chưa tiêm vắc xin phòng bệnh sán lá gan. Máu lấy ra được chứa trong bơm tiêm, rút pit tông tạo khoảng trống (hoặc bơm máu vào ống nghiệm vô trùng), ghi ký hiệu mẫu trên bơm tiêm hoặc ống nghiệm rồi đặt nằm nghiêng 45° trong hộp đựng mẫu, để đông máu trong 1 h đến 2 h ở nhiệt độ bình thường, tránh ánh nắng trực tiếp. Sau đó, chất huyết thanh sang ống nghiệm vô trùng khác (hoặc ống eppendorf) thực hiện xét nghiệm mô tả tại 5.2.3 - phát hiện kháng thể bằng phương pháp ELISA;

- Mẫu sữa: lấy sữa trực tiếp ngay từ con vật hoặc lấy sữa đã vắt cho vào ống vô trùng có nắp đậy để thực hiện xét nghiệm mô tả tại 5.2.3 - phát hiện kháng thể bằng phương pháp ELISA.

5.2.1.2. Lấy mẫu cho xét nghiệm kháng nguyên

- Mẫu phân: dùng túi nilon sạch, lộn ngược rồi đeo vào tay hoặc đeo găng tay bảo hộ, đưa tay vào trực tràng lấy phân trực tiếp trong trực tràng con vật hoặc lấy phân con vật vừa thải ra ngoài môi trường, đựng mẫu phân lấy được vào lọ miệng rộng hoặc túi nilon sạch thực hiện xét nghiệm mô tả tại 5.2.2.1 - phát hiện kháng nguyên bằng phương pháp lắng cặn; 5.2.1.2 - phát hiện kháng nguyên bằng phương pháp lắng cặn - phù nổi; và 5.2.2.3 - phát hiện kháng nguyên bằng phương pháp ELISA;

- Trứng sán: thu hồi trong phân của gia súc bằng phương pháp lắng cặn hoặc lắng cặn - phù nổi thực hiện xét nghiệm mô tả tại 5.2.2.4 - phát hiện kháng nguyên bằng phương pháp PCR;

- Con sán: cắt nhỏ từng nhu mô gan hay bộc lộ ống dẫn mật, túi mật để lấy sán thực hiện xét nghiệm mô tả tại 5.2.2.4 - phát hiện kháng nguyên bằng phương pháp PCR.

Như vậy, nếu muốn xét nghiệm kháng nguyên để chấn đoán bệnh sán lá gan ở bò thì có thể lấy những mẫu bệnh phẩm như mẫu phân; trứng sán hoặc con sán ở bò để xét nghiệm.

Để tiến hành phương pháp ELISA phát hiện kháng nguyên sán lá gan ở bò cần chuẩn bị những nguyên liệu gì?

Theo điểm B.1 Phục lục B Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 8400-27:2014 về Bệnh động vật - Quy trình chẩn đoán - Phần 27: Bệnh sán lá gan quy định về nguyên liệu cho phương pháp ELISA như sau:

PHỤ LỤC B

(Tham khảo)

Phương pháp ELISA phát hiện kháng nguyên sán lá gan

- Dung dịch đệm pha loãng mẫu (5 X): pha loãng dung dịch đệm với nước cất đã khử ion theo tỷ lệ 1/5 (cho 20 ml dung dịch đệm 5 X vào 80 ml nước cất đã khử ion);

- Dung dịch rửa (20 X): pha loãng dung dịch rửa với nước cất đã khử ion theo tỷ lệ 1/20 (cho 50 ml dung dịch rửa 20X vào 950 ml nước cất đã khử ion);

- Kháng thể gắn enzyme biotin (50 X): pha loãng kháng thể gắn erxzyme biotin với dung dịch đệm đã pha loãng theo tỷ lệ 1/50 (cho 20 μl kháng thể gắn enzyme biotin 50 X vào 980 μl dung dịch đệm đã pha loãng);

- Kháng thể gắn enzyme avidine - peroxidase (50 X): pha loãng kháng thể gắn enzyme avidine - peroxidase với dung dịch đệm đã pha loãng theo tỷ lệ 1/50 (cho 20 μl kháng thể gắn enzyme avidine - peroxidase 50 X vào 980 μl dung dịch đệm đã pha loãng);

- Pha loãng mẫu phân phân cần kiểm tra: dùng cân phân tích (4.5) cân 2 g phân, rồi cho 2 ml dung dịch đệm pha loãng sau khi đã pha loãng. Ly tâm với gia tốc 1 000 g trong 10 min (4.6). Thu lấy phần dịch nổi phía trên.

Theo đó, những nguyên liệu cần thiết cho phương pháp ELISA gồm dung dịch đệm pha loãng; dung dịch rửa (20 X); kháng thể gắn enzyme biotin (50 X); kháng thể gắn enzyme avidine - peroxidase (50 X); mẫu phân pha loãng.

Để tiến hành phương pháp ELISA phát hiện kháng nguyên sán lá gan ở bò cần chuẩn bị những nguyên liệu gì? (Hình từ Internet)

Phương pháp ELISA được thực hiện như thế nào để có thế phát hiện kháng nguyên sán lá gan ở bò như thế nào?

Theo điểm B.2 Phục lục B Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 8400-27:2014 về Bệnh động vật - Quy trình chẩn đoán - Phần 27: Bệnh sán lá gan thì để tiến hành phương pháp ELISA cần thực hiện các bước như sau:

- Nhỏ 100 μl mẫu phân đã pha loãng vào 2 giếng. Đối chứng dương cho vào 2 giếng- Nhỏ 100 μl mẫu phân đã pha loãng vào 2 giếng. Đối chứng dương cho vào 2 giếng (theo sơ đồ đĩa phản ứng ELISA phát hiện kháng nguyên). Phủ đĩa bằng giấy nhôm, giữ đĩa ở nhiệt độ phòng trong 2h;

- Rửa đĩa ba lần bằng dung dịch rửa đã pha loãng;

- Nhỏ 100 μl kháng thể gắn enzyme biotin đã pha loãng vào mỗi giếng, ủ đĩa ở nhiệt độ phòng trong 1 h;

- Rửa đĩa ba lần bằng dung dịch rửa đã pha loãng;

- Nhỏ 100 μl kháng thể gắn enzyme avidine - peroxidase đã pha loãng vào mỗi giếng, ủ dĩa ở nhiệt độ phòng trong 1 h;

- Rửa đĩa ba lần bằng dung dịch rửa đã pha loãng;

- Nhỏ 100 μl TMB vào mỗi giếng, tránh ánh sáng;

- Ủ đĩa 10 min ở nhiệt độ phòng;

- Nhỏ 50 μl dung dịch dừng phản ứng vào mỗi giếng;

- Đọc đĩa ở bước sóng 450 nm bằng máy đọc ELISA.