Phương pháp HA có tác dụng gì trong việc chẩn đoán bệnh cúm gia cầm H5N1? Để tiến hành phương pháp HA thì cần chuẩn bị những loại thuốc thử, thiết bị gì?

Nội dung chính

• Phương pháp HA có tác dụng gì trong việc chẩn đoán bệnh cúm gia cầm H5N1?
• Để tiến hành phương pháp HA thì cần chuẩn bị những loại thuốc thử, thiết bị gì?
• Cần tiến hành phương pháp Ha như thế nào để có thể xác định được vi rút gây bệnh cúm gà H5N1?

Phương pháp HA có tác dụng gì trong việc chẩn đoán bệnh cúm gia cầm H5N1?

Theo tiết 5.2.2.4 tiểu mục 5.2 Mục 5 Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 8400-26:2014 về Bệnh động vật - Quy trình chẩn đoán - Phần 26: Bệnh cúm gia cầm H5N1 quy định về phân lập trên trứng như sau:

Cách tiến hành

...

5.2. Chẩn đoán phòng thí nghiệm

....

5.2.2.4. Phân lập trên trứng

Tất cả các thao tác tiêm truyền trứng và thu hoạch nước trứng (dịch niệu mô) sau phân lập phải được thực hiện trong điều kiện an toàn sinh học cấp 3

...

c) Xác định

Trước khi tiến hành giám định, sử dụng phương pháp HA để xác định sự có mặt vi rút cúm gia cầm (Newcastle, vi rút gây hội chứng giảm đẻ) trong dịch niệu mô (xem phụ lục B) thông qua đặc tính gây ngưng kết hồng cầu. Nếu HA dương tính, dịch niệu mô có vi rút.

Giám định vi rút trong dịch niệu mô bằng phương pháp HI sử dụng kháng huyết thanh chuẩn H5 hoặc bằng phương pháp Realtime RT-PCR hoặc RT-PCR (xem 5.2.2.2 và 5.2.2.3).

...

Theo đó, khi thực hiện phân lập để chẩn đoán bệnh cúm gia cầm H5N1 thì cần thực áp dụng phương pháp HA (phương pháp ngưng kết hồng cầu gà) để xác định sự có mặt vi rút cúm gia cầm H5N1 trong dịch niệu mô thông qua đặc tính gây ngưng kết hồng cầu. Nếu HA dương tính, dịch niệu mô có vi rút.

Phương pháp HA có tác dụng gì trong việc chẩn đoán bệnh cúm gia cầm H5N1? (Hình từ Internet)

Để tiến hành phương pháp HA thì cần chuẩn bị những loại thuốc thử, thiết bị gì?

Theo điểm B.1 và điểm B.2 Phụ lục B Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 8400-26:2014 về Bệnh động vật - Quy trình chẩn đoán - Phần 26: Bệnh cúm gia cầm H5N1 quy định về thuốc thử, vật liệu thử và thiết bị dụng cụ dùng cho phương pháp HA như sau:

Phụ lục B

(Quy định)

Phản ứng ngưng kết hồng cầu gà (HA)

B.1. Thuốc thử và vật liệu thử

Hồng cầu gà 1 % (xem A4 phụ lục A).

Dịch môi trường sau khi phân lập trên tế bào hoặc dung dịch niệu mô sau khi phân lập trên trứng

Kháng nguyên chuẩn cúm gia cầm H5N1

Dung dịch PBS pH ~ 7,2 (xem A3 phụ lục A).

B.2. Thiết bị, dụng cụ

Sử dụng các đĩa ngưng kết 96 giếng, đáy chữ V, pipet các loại, đầu típ các cỡ (xem 4.2)

...

Như vậy, để có thể tiến hành phương pháp HA thì cần chuẩn bị những thứ như sau:

- Hồng cầu gà 1 % .

- Dịch môi trường sau khi phân lập trên tế bào hoặc dung dịch niệu mô sau khi phân lập trên trứng

- Kháng nguyên chuẩn cúm gia cầm H5N1

- Dung dịch PBS pH ~ 7,2.

- Sử dụng các đĩa ngưng kết 96 giếng, đáy chữ V, pipet các loại, đầu típ các cỡ 30 μl, 200 μl và 1000 μl sử dụng cho micropipet (có lọc và không lọc).

Cần tiến hành phương pháp Ha như thế nào để có thể xác định được vi rút gây bệnh cúm gà H5N1?

Theo điểm B.3 và điểm B.4 Phụ lục B Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 8400-26:2014 về Bệnh động vật - Quy trình chẩn đoán - Phần 26: Bệnh cúm gia cầm H5N1 quy định về cách tiến hành và kết quả của phương pháp HA như sau:

Phụ lục B

(Quy định)

Phản ứng ngưng kết hồng cầu gà (HA)

...

B.3. Cách tiến hành (xem sơ đồ bên dưới)

Cho 25 μl PBS pH ~ 7,2 vào các giếng từ giếng 1 đến giếng 12. Cho 25 μl dịch môi trường sau khi phân lập trên tế bào, dung dịch niệu mô sau khi phân lập trên trứng hoặc kháng nguyên chuẩn vào giếng 1.

Trộn đều huyễn dịch hoặc kháng nguyên với PBS ở giếng 1, hút 25 μl từ giếng 1 chuyển sang giếng 2 và trộn đều, hút 25 μl chuyển sang giếng 3 và trộn đều, tiếp tục làm như vậy đến giếng 11, hút bỏ 25 μl ở giếng 11. Giếng 12 chỉ có PBS để làm đối chứng hồng cầu.

Cho 25 μl hồng cầu gà 1 % vào mỗi giếng, lắc nhẹ trên máy lắc trong 1 min. Để đĩa phản ứng ở nhiệt độ phòng và đọc kết quả sau 30 min.

B.4. Đọc kết quả

Định tính:

Phản ứng HA dương tính khi có hạt ngưng kết hồng cầu lấm chấm.

Phản ứng HA âm tính khi không có ngưng kết hồng cầu

Những mẫu dương tính với phản ứng HA là những mẫu có chứa vi rút gây ngưng kết hồng cầu (một đặc tính của vi rút cúm).

Định lượng:

Phản ứng HA dương tính khi có hạt ngưng kết lấm chấm ở độ pha loãng (hiệu giá) ≥ 1/4.

Phản ứng HA âm tính khi không có ngưng kết hồng cầu hoặc có ngưng kết nhưng ở độ pha loãng < 1/4

Những mẫu dương tính với phản ứng HA là những mẫu có chứa vi rút gây ngưng kết hồng cầu

Hiệu giá HA của một mẫu được xác định tại nồng độ pha loãng cao nhất có ngưng kết hồng cầu. Ví dụ mẫu có phản ứng HA dương tính ở độ pha loãng 1/1024 thì hiệu giá HA của mẫu được xác định là 1/1024 hoặc 10 log2.

Sơ đồ các bước tiến hành phản ứng ngưng kết hồng cầu gà (HA)

Cho 25 μl PBS pH ~ 7,2 vào các giếng từ giếng 1 đến giếng 12. Cho 25 μl dịch môi trường sau khi phân lập trên tế bào, dung dịch niệu mô sau khi phân lập trên trứng hoặc kháng nguyên chuẩn vào giếng 1.

Trộn đều huyễn dịch hoặc kháng nguyên với PBS ở giếng 1, hút 25 μl từ giếng 1 chuyển sang giếng 2 và trộn đều, hút 25 μl chuyển sang giếng 3 và trộn đều, tiếp tục làm như vậy đến giếng 11, hút bỏ 25 μl ở giếng 11. Giếng 12 chỉ có PBS để làm đối chứng hồng cầu.

Cho 25 μl hồng cầu gà 1 % vào mỗi giếng, lắc nhẹ trên máy lắc trong 1 min. Để đĩa phản ứng ở nhiệt độ phòng và đọc kết quả theo tiêu chuẩn nêu trên sau sau 30 min.