TIÊU CHUẨN QUỐC GIA
TCVN 11934:2017
ISO 16578:2013
PHÂN TÍCH DẤU ẤN SINH HỌC PHÂN TỬ
- ĐỊNH NGHĨA VÀ CÁC YÊU CẦU CHUNG ĐỐI VỚI VIỆC PHÁT HIỆN CÁC TRÌNH TỰ AXIT
NUCLEIC ĐẶC HIỆU BẰNG MICROARRAY
Molecular biomarker
analysis - General definitions and requirements for microarray detection of specific
nucleic acid sequences
Lời nói đầu
TCVN 11934:2017 hoàn toàn tương đương ISO
16578:2013;
TCVN 11934:2017 do Ban kỹ thuật tiêu chuẩn
quốc gia TCVN/TC/F13 Phương pháp phân tích và lấy mẫu biên soạn, Tổng cục
Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng thẩm định, Bộ Khoa học và Công nghệ công bố.
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Lời giới thiệu
Trọng tâm chính của tiêu chuẩn này là các phương
pháp luận dựa trên ADN chip.
ADN chip là kỹ thuật sinh học phân tử có khả
năng phát hiện đồng thời nhiều trình tự axit nucleic và đặc biệt thích hợp để
xác định các trình tự axit nucleic cần quan tâm và để đo mức độ biểu hiện gen.
Kỹ thuật microarray đã được phát triển để sử dụng trong lĩnh vực phân tích thực
phẩm [phân tích sinh vật biến đổi gen (GMO), nhận biết dấu ấn sinh học...].
Mặc dù các tham số chuẩn hóa yêu cầu cho phương pháp dựa trên ADN chip
đang được nghiên cứu (như MAQC và MIAME), nhưng cần phải có các yêu cầu tối thiểu
để giải thích kết quả.
Do đó, mục đích của tiêu
chuẩn này là cung cấp hướng dẫn và các yêu cầu cho phép phát hiện các trình tự
axit nucleic quan tâm bằng kỹ thuật microarray. Thông tin này liên quan đến:
- việc thiết lập biện pháp xác nhận đối với
các phương pháp dựa trên ADN chip, và
- xác định các nguyên tắc chung được sử dụng
khi thực hiện các phép phân tích trong phòng thử nghiệm.
Kỹ thuật microarray được phát triển từ
phương pháp “Southern blot"; nguyên tắc chính là lai tạo giữa hai dải ADN,
bằng cách kết hợp chính xác các trình tự axit nucleic. ADN chip là một tập hợp
của các điểm ADN siêu nhỏ gắn vào cơ chất rắn hoặc các hạt đã mã hóa. Nói chung sự
phát triển của phép thử microarray cần để thiết kế các đoạn dò ADN, sắp xếp các
đoạn dò ADN vào cơ chất, đánh dấu các trình tự axit nucleic đích, lai các đích
với các đoạn dò ADN và xây dựng một hệ thống phát hiện phù hợp. Hiện có nhiều
kiểu array và có rất nhiều cách để tạo ra microarray. Tùy thuộc vào các kỹ thuật
đánh dấu đích được sử dụng, việc lai có thể phát hiện được bằng
tín hiệu điện, hiện màu và/hoặc huỳnh quang.
Vào thời điểm công bố ISO 16578, thực hành
tốt và các tiêu chuẩn thể hiện dữ liệu và thông tin tối thiểu đã được xây dựng
để so sánh và khả năng lặp lại dữ liệu microarray. Tuy nhiên, chỉ có một vài tài liệu
được xuất bản nhưng vẫn tập trung vào độ tin cậy và khả năng so sánh của các
phương pháp microarray đã nêu và trong trường hợp này việc đánh giá xác nhận của
một phòng thử nghiệm đơn lẻ chắc chắn sẽ không đủ. Thay vào đó, cần có đánh giá
xác nhận phương pháp liên phòng thử nghiệm, theo các hướng dẫn quốc tế cụ thể.
CHÚ THÍCH 1 Cơ quan kiểm soát Chất lượng
Microarray (MAQC) cung cấp nguồn để xác định các thực hành tốt microarray, bao
gồm việc sử dụng mẫu chuẩn, bộ dữ liệu và các định dạng.
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
CHÚ THÍCH 2 Thông tin tối
thiểu về thực nghiệm Microarray (MIAME), bằng cách thiết lập các tiêu
chuẩn thông dụng để mô tả dữ liệu microarray, hệ thống quản lý dữ liệu,
truyền dữ liệu, công khai nơi cắt giữ bảo quản và khai thác dữ liệu, hỗ trợ thông
tin chi tiết mà các nhà nghiên cứu cần có để giải thích quy
trình và mục đích sinh học với dữ liệu microarray.
Xem
http://www.mged.org/Workgroups/MIAME/miame.html
Các yêu cầu chung đối với việc
phát hiện ADN cũng có trong các tiêu chuẩn sau đây: TCVN 7605 (ISO 21569), ISO
21570, TCVN 7606 (ISO 21571), TCVN 11134 (ISO 22174) và TCVN 7608 (ISO
24276).
PHÂN TÍCH DẤU ẤN SINH HỌC PHÂN TỬ
- ĐỊNH NGHĨA VÀ CÁC YÊU CẦU CHUNG ĐỐI VỚI VIỆC PHÁT HIỆN CÁC TRÌNH TỰ AXIT
NUCLEIC ĐẶC HIỆU BẰNG MICROARRAY
Molecular biomarker
analysis - General definitions and requirements for microarray detection of
specific nucleic acid sequences
1 Phạm vi áp dụng
Tiêu chuẩn này đưa ra các thuật ngữ về việc
phát hiện trình tự axit nulceic cần tìm sử dụng các ADN chip để phát hiện axit
nucleic.
Tiêu chuẩn này áp dụng cho tất cả các
phương pháp sử dụng microarray để phát hiện các axit nucleic.
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Tiêu chuẩn này được xây dựng để cung cấp các khuyến nghị
và quy tắc đối với:
- thiết kế và sản xuất microarray,
- đánh giá xác nhận lai đặc hiệu,
- đánh giá xác nhận liên phòng thử nghiệm đối
với các phương pháp định tính,
- xác định các giới hạn phát hiện của
microarray,
- xác định các dải tín hiệu tin cậy, và
- các tiêu chí đánh giá hiệu năng kỹ thuật
của microarray platform.
Tiêu chuẩn này không bao gồm:
- quá trình đo định lượng;
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
2 Tài liệu viện dẫn
Các tài liệu viện dẫn sau rất cần thiết cho việc
áp dụng tiêu chuẩn này. Đối với các tài liệu viện dẫn ghi năm công bố thì áp dụng
phiên bản được nêu. Đối với các tài liệu viện dẫn không ghi năm công bố thì áp
dụng phiên bản mới nhất, bao gồm cả các sửa đổi, bổ sung (nếu có).
TCVN 6165 (ISO/IEC Guide 99) Từ vựng quốc
tế về đo lường học - Khái niệm, thuật ngữ chung và cơ bản
TCVN 6910-1 (ISO 5725-1) Độ chính xác (độ đúng và
độ chụm) của phương pháp đo và kết quả đo - Phần 1: Nguyên tắc và định nghĩa
chung
TCVN 6910-2 (ISO 5725-2) Độ chính xác (độ
đúng và độ chụm) của phương pháp đo và kết quả đo - Phần 2:
Phương pháp cơ bản xác định độ lặp lại và độ tái lập của phương pháp đo tiêu
chuẩn
TCVN 7608 (ISO 24276) Thực phẩm - Phương
pháp phân tích để phát hiện sinh vật biến đổi gen và sản phẩm
có nguồn gốc biến đổi gen - Yêu cầu chung và định nghĩa
TCVN 11134 (ISO 22174) Vi sinh vật trong
thực phẩm và thức ăn chăn nuôi - Phản ứng chuỗi polymerase (PCR) để phát hiện
vi sinh vật gây bệnh từ thực phẩm - Định nghĩa và yêu cầu chung
TCVN ISO/IEC 17025:2007 (ISO/IEC
17025:2005) Yêu cầu chung về năng lực của phòng thử nghiệm và hiệu chuẩn
3 Thuật ngữ và định
nghĩa
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
3.1
Giới hạn phát hiện đối với microarray
platform
(limit of detection for microarray platform)
LODP
Lượng tương đối thấp nhất của chất ngoại
chuẩn (hoặc mẫu chuẩn) có thể phát hiện được bằng
thực nghiệm với mức tin cậy 95 %, cho số bản sao và/hoặc nồng
độ chất ngoại chuẩn (hoặc mẫu chuẩn) xác định (xác định/ước lượng được).
3.2
Dải tín hiệu tin cậy (range of reliable
signal)
Khả năng (trong dải nhất định) cung cấp các
kết quả tỷ lệ thuận với nồng độ và/hoặc số bản sao của chất ngoại
chuẩn (hoặc mẫu chuẩn).
3.3
ADN Chip (DNA microrray/DNA chip)
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
3.4
Đoạn dò ADN (probe DNA)
Sợi đơn axit nucleic có trình tự xác định
dùng để nhận diện các đoạn axit nucleic khác có trình tự bổ sung với nó.
3.5
Platform (platform)
Thiết bị hỗ trợ công nghệ microarray (hoặc
DNA chip).
3.6
Phát hiện huỳnh quang (fluorescence
detection)
Phương pháp phát hiện lai sử dụng đoạn dò
ADN cố định bằng đo tín hiệu huỳnh quang.
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Phát hiện màu (colorimetric
detection)
Phương pháp phát hiện lai sử dụng đoạn dò
ADN cố định bằng đo tín hiệu màu.
3.8
Phát hiện điện hóa (electrochemical
detection)
Phương pháp phát hiện lai bằng cách đo dòng
điện của một điện cực mà trên đó đoạn dò ADN được cố định.
3.9
Chất ngoại chuẩn (external
measurement Standard)
Vật liệu hoặc cơ chất được chuẩn bị để kiểm tra
tính tương thích của phương pháp phân tích dựa trên microarray, có giá trị đặc
tính nhận được là giá trị đồng thuận dựa trên phép thử nghiệm cộng tác dưới sự
bảo trợ của một nhóm khoa học hoặc kỹ thuật.
3.10
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Sự gắn kết không đặc hiệu của đoạn dò ADN
vào axit nucleic không phải đích.
4 Nguyên tắc
4.1 Phép thử microarray
platform
Ví dụ về phép thử microarray platform gồm:
- biến tính ADN sợi đơn hoặc sợi đôi hoặc ARN cần phân
tích,
- lai đích với đoạn dò ADN đã được gắn vào
cơ chất rắn,
- phát hiện lai bằng các tín hiệu điện, hiện
màu và/hoặc huỳnh quang, và
- phân tích dữ liệu.
Phòng thử nghiệm phải sử dụng các chất ngoại
chuẩn (hoặc mẫu chuẩn) và thực hiện các phép kiểm chứng phù hợp với bước đo
microarray trong quá trình kiểm tra xác nhận. Những yêu cầu này bao gồm
kiểm tra xác nhận các phương pháp dựa trên phương pháp ADN chip cũng giúp làm
rõ việc giải thích các kết quả.
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Phân tích microarray cần sử dụng các kiểu
đoạn dò ADN và cần được thiết kế sao cho có thể kiểm tra xác nhận được.
Thiết kế có các đoạn dò ADN để
phát hiện
- các chất ngoại chuẩn (hoặc mẫu chuẩn),
- kiểm chứng dương,
- kiểm chứng âm, và
- trình tự axit nucleic quan tâm.
Đoạn dò ADN cố định phải được sao chép ít
nhất ở các vị trí hai lần lặp lại. Các đoạn dò ADN được thiết kế phải
tính đến giá trị Tm, tỷ lệ GC và tính đặc hiệu của trình tự. Trình tự cần được
mô tả. Để tránh sự nhầm lẫn giữa các nucleotid base, chữ 'g' sẽ được sử dụng
để phân biệt rõ giữa 'G' và 'C trong mô tả (nghĩa là C, g, A và T phải được sử dụng để chỉ
ra các base). Chất lượng của đoạn dò ADN phải được đảm bảo bằng một phương pháp thích hợp
(phân tích quang phổ, phân tích khối phổ, v.v..).
4.3 Đánh giá hiệu lực
lai đặc hiệu
4.3.1 Đánh giá lý thuyết
về tính đặc hiệu
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
4.3.2 Đánh giá thực nghiệm tính đặc hiệu
Tính đặc hiệu của đoạn dò ADN cần được đánh
giá xác nhận bằng thực nghiệm trên các mẫu có các trình tự axit
nucleic tương tự như trình tự đích, cũng như trên các sinh vật đã được xác
định qua việc đánh giá lý thuyết về tính đặc hiệu như tính đẳng dòng trình tự
có mặt có khả năng gây ra các lai chéo. Các điều kiện thử nghiệm phải giống như những
điều kiện thường áp dụng trong phòng thử nghiệm.
4.3.3 Đánh giá thực nghiệm
về lai chéo
Quá trình đánh giá xác nhận phải chứng minh
là không có sự lai chéo xảy ra trên đoạn dò ADN có khả năng phát hiện được
bằng thực nghiệm bằng chất ngoại chuẩn (hoặc mẫu chuẩn) trong nền mẫu. Các kết quả được chấp
nhận nếu các đoạn dò ADN để phát hiện chất ngoại chuẩn (hoặc mẫu chuẩn)
là dương tính và các
đoạn dò ADN để phát hiện các kiểm chứng âm là âm tính.
4.4 Đánh giá xác nhận
liên phòng thử nghiệm về các phương pháp định tính
4.4.1 Yêu cầu chung
Về bản chất, các kết quả phép thử định tính
chỉ có câu trả lời có/không. Tuy nhiên, việc xác định dải áp dụng của phương
pháp là cần thiết trong nghiên cứu đánh giá xác nhận. Phương pháp này chỉ áp dụng được trong dải
đó.
4.4.2 Giới hạn phát hiện
đối với microarray platform (LODP)
Trong trường hợp sử dụng microarray, không
thực hiện xác định giới hạn phát hiện (LOD) của từng đích cần thăm dò.
Nếu yêu cầu LOD của các đích riêng rẽ, ngoại chuẩn (hoặc chuẩn đối chứng) thì có thể được sử dụng để
xác định giới hạn của một dãy đích đại diện trên nền mẫu cụ thể.
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
4.4.3 Dải tín hiệu tin cậy
Dải tín hiệu tin cậy là dải
áp dụng của phương pháp cần biết trước về số bản sao và/hoặc nồng
độ (đã xác định/đã ước lượng được) của chất ngoại chuẩn (hoặc mẫu chuẩn) ở mức tin cậy 95 %.
Các giá trị này cần được thiết lập thông qua phép thử liên phòng sử dụng các mẫu
chuẩn hoặc mẫu chuẩn được chứng nhận phù hợp. Thông tin cũng có thể được lấy từ
các nghiên cứu nội phòng thử nghiệm như là một biện pháp tạm thời.
4.4.4 Mẫu thử
Dung dịch hoặc chất chiết có chứa các phân tử ADN/ARN thích hợp
với lĩnh vực áp dụng được chuẩn bị sao cho không có ức chế việc lai hoặc gây
nhiễu với detetor điện, hiện màu và/hoặc huỳnh quang.
4.4.5 Hệ thống đo
Các dụng cụ bao gồm máy chu trình nhiệt, tủ
lai hoặc các thiết bị lai khác, máy quét ADN chip và thiết bị hoặc dụng cụ để
đo tình trạng nguyên vẹn và nồng độ ADN/ARN phải được hiệu chuẩn
theo TCVN/ISO/IEC 17025. Điều này bao gồm các tiêu chí lựa chọn cài đặt dụng cụ,
thiết bị (ví dụ như cài đặt nền, cài đặt chuẩn hóa).
Mọi phép tính hoặc mô hình được sử dụng để
lấy kết quả phân tích cần được đánh giá xác nhận.
4.4.6 Ước tính độ không đảm
bảo đo
Độ không đảm bảo đo phát sinh từ nhiều nguồn,
bao gồm cỡ mẫu phòng thử nghiệm, việc lấy mẫu thử từ mẫu phòng thử nghiệm, đo nồng
độ axit nucleic trong các phần chiết và lấy mẫu ADN/ARN trong các phản ứng,
cũng như độ biến thiên phép phân tích [1]. Ước tính độ không
đảm bảo của phép đo có thể được lấy từ nghiên cứu nội phòng/liên
phòng thử nghiệm hoặc từ các ước tính của các thành phần, như trong
TCVN/ISO/IEC 17025.
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Các đặc tính và chất lượng của thuốc thử
[thuốc nhuộm huỳnh quang, enzym phiên mã ngược, dung dịch đệm v.v...] và lượng
chất ngoại chuẩn (hoặc mẫu chuẩn) được thêm vào hỗn hợp phản ứng phải được
đánh giá xác nhận.
5 Biểu thị kết quả
5.1 Yêu cầu chung
Không biểu thị kết quả dạng ký hiệu + và -.
Không biểu thị kết quả âm tính dưới dạng
“không có trình tự đích”.
5.2 Biểu thị kết quả âm
Các câu sau đây hoặc tương ứng phải được thể
hiện trong báo cáo thử nghiệm.
Trình tự đích Y ADN/ARN (đặc hiệu) không
phát hiện được.
LODP của phương pháp là X được xác định bằng
ABC (mô tả chất ngoại chuẩn).
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Các câu sau đây hoặc tương ứng phải được thể
hiện trong báo cáo thử nghiệm.
Trình tự đích Y ADN/ARN (đặc hiệu) đã phát hiện được.
Có thể bao gồm cả việc nhận dạng
đích, nếu biết.
Có thể gồm cả nhận dạng GMO, nếu biết.
5.4 Biểu thị kết quả
không xác định
Phương pháp đã được đánh giá xác nhận bao gồm
các tiêu chí mà từ đó kết quả đo quan sát được có thể được chấp nhận là có giá trị.
Các tiêu chí chấp nhận/không chấp nhận đối với phép phân tích phải được mô tả.
Báo cáo thử nghiệm phải bao gồm thông tin về
độ lệch chuẩn lặp lại và độ lệch chuẩn tái lập.
Khi ít nhất một phần thử nghiệm cho kết quả
không xác định, thì lặp lại phép phân tích.
Nếu việc lặp lại của phép phân tích xác nhận
kết quả không xác định, thì báo cáo thử nghiệm phải gồm các thông tin sau:
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
- lý do không thể thu được kết quả cuối cùng (ví dụ: ảnh
hưởng chất ức chế, các chất gây nhiễu v.v...).
6 Báo cáo thử nghiệm
Báo cáo phải được thực hiện như được quy định
trong các tiêu chuẩn áp dụng (ví dụ TCVN ISO/IEC 17025).
Báo cáo thử nghiệm phải ít nhất bao gồm các
thông tin sau:
- mọi thông tin cần thiết cho việc nhận biết
đầy đủ về mẫu;
- ngày nhận mẫu;
- mọi thông tin cụ thể liên quan đến mẫu
phòng thử nghiệm và bất kỳ hạn chế kèm theo có thể áp dụng;
- mọi thông tin liên quan đến mẫu thử nghiệm
(loại, số lượng mẫu);
- các điều kiện liên
quan đến vận chuyển mẫu, cũng như bảo quản, nếu có;
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
- mô tả phương pháp chiết
axit nucleic đã sử dụng;
- nhận biết phương pháp phân tích và mô tả
chung về quy trình microarray là cơ sở của phương pháp phân tích;
- kiểm chứng dương và kiểm chứng âm;
- loại chất ngoại chuẩn (hoặc mẫu chuẩn);
- kết quả LODP thực nghiệm và dải tín hiệu
tin cậy đối với phép phân tích phát hiện;
- cách tính toán và mô hình sử dụng để thu
được kết quả phân tích;
- các điểm quan sát được trong quá trình thử nghiệm.
Thư mục tài liệu
tham khảo
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66