Việc đếm vi sinh vật bằng phương pháp nuôi cấy trong môi trường lỏng được thực hiện dựa theo nguyên tắc nào?

Nội dung chính

• Việc đếm vi sinh vật bằng phương pháp nuôi cấy trong môi trường lỏng được thực hiện dựa theo nguyên tắc nào?
• Thể tích của phần mẫu thử trong đếm vi sinh vật bằng phương pháp nuôi cấy trong môi trường lỏng được quy định như thế nào?
• Để xác định giá trị ước lượng số có xác suất lớn nhất trong đếm vi sinh vật bằng phương pháp nuôi cấy trong môi trường lỏng bằng các cách cơ bản nào?

Việc đếm vi sinh vật bằng phương pháp nuôi cấy trong môi trường lỏng được thực hiện dựa theo nguyên tắc nào?

Việc đếm vi sinh vật bằng phương pháp nuôi cấy trong môi trường lỏng được thực hiện dựa theo nguyên tắc tại Mục 9 Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 9716:2013 như sau:

Đếm bằng phương pháp nuôi cấy trong môi trường lỏng

9.1. Nguyên tắc

Các phần mẫu thử của mẫu nước được cấy trong môi trường lỏng đảm bảo sự sinh trưởng của một vi sinh vật cụ thể hoặc một nhóm các vi sinh vật. Số có xác suất lớn nhất (MPN) của các vi sinh vật tồn tại trong mẫu ban đầu và độ chụm trong việc ước lượng có thể được tính toán theo các phương pháp thống kê dựa trên các phần mẫu thử dương tính và âm tính thu được sau thời kì nuôi ủ.

…

Như vậy, theo quy định trên thì việc đếm vi sinh vật bằng phương pháp nuôi cấy trong môi trường lỏng được thực hiện dựa theo nguyên tắc sau:

- Các phần mẫu thử của mẫu nước được cấy trong môi trường lỏng đảm bảo sự sinh trưởng của một vi sinh vật cụ thể hoặc một nhóm các vi sinh vật;

- Số có xác suất lớn nhất (MPN) của các vi sinh vật tồn tại trong mẫu ban đầu và độ chụm trong việc ước lượng có thể được tính toán theo các phương pháp thống kê dựa trên các phần mẫu thử dương tính và âm tính thu được sau thời kì nuôi ủ.

Việc đếm vi sinh vật bằng phương pháp nuôi cấy trong môi trường lỏng được thực hiện dựa theo nguyên tắc nào? (Hình từ Internet)

Thể tích của phần mẫu thử trong đếm vi sinh vật bằng phương pháp nuôi cấy trong môi trường lỏng được quy định như thế nào?

Thể tích của phần mẫu thử trong đếm vi sinh vật bằng phương pháp nuôi cấy trong môi trường lỏng được quy định tại tiết 9.3.2 tiểu mục 9.3 Mục 9 Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 9716:2013 như sau:

Đếm bằng phương pháp nuôi cấy trong môi trường lỏng

…

9.3. Cách tiến hành

9.3.1. Quy định chung

Sự lựa chọn phương pháp đếm MPN phụ thuộc vào các yếu tố tương tự như nêu tại 8.2.2. Hướng dẫn dưới đây được dựa trên quy trình được áp dụng phổ biến nhất.

9.3.2. Phần mẫu thử

Chất bổ sung trong các phần mẫu thử không nên làm thay đổi thành phần môi trường đến mức gây nên trở ngại đáng kể đến sự sinh trưởng của vi sinh vật. Thể tích của phần mẫu thử nhỏ hơn hoặc bằng 1 mL thường được bổ sung 5 lần hoặc nhiều hơn thể tích của môi trường 1 X. Những phần mẫu thử từ 1 mL đến 100 mL thường được cho vào một lượng bằng thể tích của môi trường 2 X với điều kiện là mẫu thử không chứa hàm lượng lớn các muối vô cơ, dưỡng chất hoặc độc tố có thể ảnh hưởng đến sự sinh trưởng của vi khuẩn. Phương pháp nuôi lỏng nhìn chung có thể chịu được một lượng lớn chất rắn lơ lửng.

Với các thể tích lớn hơn 100 mL, có thể sử dụng môi trường đậm đặc hơn. Đối với các mục đích đặc biệt, môi trường khan vô khuẩn có thể được hòa tan trong mẫu lạnh (hoặc làm ấm trước ở nhiệt độ 30 °C) để phân tích.

Nhược điểm của việc có mặt các khoáng chất ở nồng độ cao hoặc các hợp chất độc hại có thể được khắc phục bằng cách tách vi sinh vật từ mẫu nước. Điều này có thể thực hiện bằng cách tiến hành lọc tế bào lên màng như nêu tại 8.2.5 hoặc cho vào mẫu chất trợ lọc như điatomit hoặc dung dịch ôxit nhôm dạng huyền phù nếu dung dịch bị đục. Những chất trợ lọc này lắng xuống và mang theo các vi sinh vật; các chất này được phân tách bằng li tâm hoặc lọc. Màng lọc, điatomit hoặc ôxit nhôm sau đó được đặt vào trong môi trường nuôi cấy lỏng.

Như vậy, theo quy định trên thì thể tích của phần mẫu thử trong đếm vi sinh vật bằng phương pháp nuôi cấy trong môi trường lỏng nhỏ hơn hoặc bằng 1 mL thường được bổ sung 5 lần hoặc nhiều hơn thể tích của môi trường 1 X.

Những phần mẫu thử từ 1 mL đến 100 mL thường được cho vào một lượng bằng thể tích của môi trường 2 X với điều kiện là mẫu thử không chứa hàm lượng lớn các muối vô cơ, dưỡng chất hoặc độc tố có thể ảnh hưởng đến sự sinh trưởng của vi khuẩn.

Để xác định giá trị ước lượng số có xác suất lớn nhất trong đếm vi sinh vật bằng phương pháp nuôi cấy trong môi trường lỏng bằng các cách cơ bản nào?

Để xác định giá trị ước lượng số có xác suất lớn nhất trong đếm vi sinh vật bằng phương pháp nuôi cấy trong môi trường lỏng bằng các cách cơ bản được quy định tại tiết 9.5.1 tiểu mục 9.5 Mục 9 Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 9716:2013 như sau:

Đếm bằng phương pháp nuôi cấy trong môi trường lỏng

…

9.5. Xác định giá trị MPN

9.5.1. Nguyên tắc

Có ba cách cơ bản để xác định giá trị MPN:

a) Công thức toán học;

b) Bảng biểu;

c) Chương trình máy tính.

…

Như vậy, theo quy định trên thì để xác định giá trị ước lượng số có xác suất lớn nhất trong đếm vi sinh vật bằng phương pháp nuôi cấy trong môi trường lỏng bằng 03 cách cơ bản sau:

- Công thức toán học;

- Bảng biểu;

- Chương trình máy tính.