Kali dihydrophosphat (KH2PO4)
|
34g
|
Nước
|
500 ml
|
4.1.2 Chuẩn bị
4.1.2.1 Dung dịch gốc
Hòa tan kali dihydrophosphat trong nước.
Chỉnh pH đến 7,2 bằng dung dịch natri hydroxit 1 M. Thêm nước đến 1
lít. Khử trùng 15 min ở 121 °C. Bảo quản trong
tủ lạnh.
4.1.2.2 Dung dịch pha
loãng
Lấy 1,25 ml dung dịch gốc
(4.1.2.1), thêm nước đến 1 lít. Phân phối vào các chai 90 ml hoặc 99 ml (5.9). Khử
trùng 15 min
ở 121 °C.
4.2 Môi trường
thạch đếm đĩa (PCA)
4.2.1 Thành phần
Trypton
5,0 g
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
2,5 g
Dextrose
1,0 g
Thạch
15,0 g
Nước
1 000 ml
4.2.2 Chuẩn bị
Hòa tan các thành phần trên trong nước. Có thể
đun nóng nước để hòa tan các
thành phần.
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Phân phối môi trường vào các ống hoặc bình thủy
tinh có dung tích thích hợp. Khử trùng 15 min
trong nồi hấp áp lực (5.1) ở 121 °C. Chỉnh pH sao cho sau khi khử trùng, pH đạt 7,0 ± 0,2, nếu cần.
5 Thiết bị, dụng cụ
Có thể dùng dụng cụ thủy tinh sử dụng một lần
thay thế cho các dụng cụ thủy tinh sử dụng nhiều lần nếu chúng có các đặc
tính thích hợp.
Sử dụng các thiết bị, dụng cụ của phòng thử
nghiệm vi sinh và các thiết bị, dụng cụ cụ thể như sau:
5.1 Thiết bị để khử trùng khô (tủ
sấy) hoặc để khử trùng ướt (nồi hấp áp lực).
5.2 Tủ ấm, có khả năng
duy trì nhiệt độ ở 35 °C ± 1 °C.
5.3 Đĩa Petri, bằng thủy
tinh có chiều cao 15 mm, đường kính 100 mm hoặc bằng chất dẻo có chiều cao 15 mm, đường
kính 90 mm.
5.4 Pipet vô trùng, có dung
tích danh nghĩa 1 ml, 5 ml và 10
ml, được chia vạch đến 0,1 ml.
5.5 Nồi cách thủy, có thể kiểm
soát nhiệt độ ổn định ở 45 °C ± 1 °C.
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
5.7 Máy đo pH, có độ chính
xác ± 0,1 đơn vị pH, ở 25 °C.
5.8 Nhiệt kế, có thể đo với
khoảng nhiệt độ thích hợp.
5.9 Chai pha
loãng,
dung tích 90 ml hoặc 99 ml.
5.10 Chai pha loãng, dung tích
160 ml, bằng thủy tinh
bosilicat chịu nhiệt, có nút cao su
hoặc nắp vặn bằng chất dẻo.
6 Lấy mẫu
Mẫu gửi đến phòng thử nghiệm phải là mẫu
đại diện. Mẫu không bị hư hỏng hoặc
biến đổi trong suốt quá trình vận chuyển hoặc bảo quản.
Việc lấy mẫu không quy định trong tiêu
chuẩn này. Xem tiêu chuẩn cụ thể có
liên quan đến sản phẩm. Nếu chưa có tiêu chuẩn cụ thể liên quan đến sản phẩm thì các bên có
liên quan nên thỏa thuận với
nhau về vấn đề này.
7 Chuẩn bị mẫu thử
Mẫu được trộn đều để thu được các phần mẫu thử đồng nhất.
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
8.1 Cấy và ủ
8.1.1 Dùng các
pipet vô trùng (5.4) để chuẩn bị các dung dịch pha loãng thập phân 10-2, 10-3, 10-4 và các dung
dịch pha loãng thập phân
thích hợp khác, từ mẫu đã đồng nhất bằng cách chuyển
10 ml dung dịch đã được pha loãng vào 90 ml
chất pha loãng. Tránh tạo
bọt. Lắc các dung dịch pha loãng 25 lần với biên độ 30 cm trong 7 s.
8.1.2 Dùng pipet lấy
1 ml mỗi dung dịch pha loãng cho vào từng cặp đĩa Petri (5.3) riêng rẽ, được đánh dấu
thích hợp. Nếu sau 3 min mới cấy mẫu thì lắc lại các chai pha loãng (5.10) 25 lần với biên độ 30 cm
trong 7 s trước khi dùng pipet chuyển phần mẫu thử sang đĩa Petri.
8.1.3 Cho vào mỗi đĩa từ
12 ml đến 15 ml môi trường PCA (4.2), đã làm nguội trước về nhiệt độ 44 °C đến 46 °C, trong vòng
15 min sau lần pha loãng đầu tiên.
Cho ngay thạch vào các đĩa Petri nếu chất pha loãng có chứa chất hút ẩm. Rót thạch và nước pha
loãng (4.1) vào đĩa kiểm chứng cho mỗi dãy mẫu. Trộn ngay các dung dịch pha loãng mẫu
với môi trường thạch, trộn kỹ và trộn đều bằng cách xoay đĩa và di chuyển đĩa tới lui
trên bề mặt phẳng.
8.1.4 Khi thạch đông
đặc, lật ngược đĩa Petri và ủ ngay trong 48 h ± 2 h ở 35 °C.
8.2 Đếm khuẩn lạc
Sau khi ủ (8.1.4), dùng thiết bị đếm
khuẩn lạc (5.6) để đếm các đĩa kép trong dải thích hợp (từ 25 đến 250 khuẩn lạc),
ghi kết quả trên đĩa pha loãng đã đếm. Trong 3 độ pha loãng phải có ít nhất một độ pha
loãng có 2 đĩa cho kết quả nằm trong dải từ
25 đến 250 khuẩn lạc.
9 Biểu thị kết quả
9.1 Nếu chỉ có 1 độ pha
loãng cho kết quả nằm trong dải
từ 25 đến 250 khuẩn lạc thì tính số đếm trung bình trên gam cho mỗi độ pha loãng và nhân với
hệ số pha loãng để có tổng
số vi sinh vật hiếu khí trên gam (xem Bảng 1, mẫu số 1).
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
9.3 Nếu không có
đĩa nào hoặc chỉ có
một trong hai đĩa kép có từ 25 đến 250 khuẩn lạc thì thực hiện
như sau:
a) Nếu tất cả các đĩa đều
có ít hơn 25 khuẩn
lạc: khi 2 đĩa của độ pha loãng thấp nhất có ít hơn 25 khuẩn
lạc, đếm số khuẩn lạc
trên mỗi đĩa của độ pha
loãng đó, tính số đếm trung bình và nhân với hệ số pha loãng
để có tổng số vi
sinh vật hiếu khí ước tính. Đánh dấu kết quả này để lưu ý rằng đây là kết quả ước tính từ
số đếm đĩa nằm ngoài dải từ 25 đến 250 khuẩn lạc (xem Bảng 1, mẫu số
3).
b) Nếu tất cả các đĩa đều có nhiều hơn
250 khuẩn lạc: đếm số khuẩn lạc tại các phần của đĩa sao cho đại diện cho sự
phân bố khuẩn lạc. Đánh dấu
tổng số đếm đĩa
này để lưu ý rằng
đây là kết quả ước tính từ số đếm đĩa nằm ngoài dải từ 25 đến 250
khuẩn lạc (xem Bảng
1, mẫu số 4).
c) Trường hợp khuẩn lạc mọc
lan rộng: thường có 3 dạng
đặc trưng;
i) tạo thành chuỗi các
khuẩn lạc, không
tách biệt rõ ràng, do sự tan rã của một cụm vi sinh vật;
ii) khuẩn lạc phát triển trong lớp
màng nước giữa thạch và đáy đĩa;
iii) khuẩn lạc hình thành trong lớp
màng nước ở cạnh hoặc trên bề mặt thạch.
Nếu các đĩa được chuẩn bị từ mẫu
có khuẩn lạc lan rộng quá mức, diện tích lan rộng bao trùm trên 50 % diện tích
đĩa hoặc diện tích mọc chồng lên đến 25 % diện tích đĩa thì đĩa được coi là bị
khuẩn lạc mọc lan
rộng. Xác định số đếm
trung bình của mỗi độ pha
loãng, tổng số đếm đĩa được tính theo trung
bình của các
giá trị này (xem Bảng 1, mẫu số 5).
Khi cần đếm các đĩa chứa khuẩn lạc lan
rộng không nằm trong 2 trường hợp nêu trên thì đếm từng dạng khuẩn lạc lan rộng đặc
trưng nêu trên. Đối với dạng thứ nhất (i), nếu chỉ có một chuỗi
lan rộng thì tính là một khuẩn lạc. Nếu có một hoặc nhiều chuỗi riêng rẽ thì đếm mỗi chuỗi
là một khuẩn lạc. Không đếm từng thành phần đơn lẻ trong chuỗi như là khuẩn lạc riêng.
Đối với dạng thứ hai (ii) và dạng thứ ba (iii), thường là các khuẩn lạc đặc
trưng và được đếm bình thường. Gộp
số đếm khuẩn lạc lan rộng và số đếm khuẩn lạc để có tổng số đếm đĩa.
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
e) Đối với các cặp đĩa mà một đĩa của mỗi độ pha
loãng chứa từ 25 đến 250 khuẩn lạc và đĩa còn lại chứa nhiều hơn 250 khuẩn lạc hoặc ít hơn 25 khuẩn lạc: đếm cả bốn đĩa và lấy các
số đếm này để tính tổng số đếm đĩa (xem Bảng 1, mẫu số 7).
f) Đối với các cặp đĩa mà cả hai đĩa của một độ pha
loãng chứa từ 25 đến 250 khuẩn lạc và trong cặp đĩa còn lại chỉ có một đĩa chứa từ 25
đến 250 khuẩn lạc: đếm cả bốn đĩa và lấy các số đếm này để tính tổng số đếm đĩa (xem Bảng 1, mẫu số
8).
g) Đối với các đĩa không chứa các đơn
vị hình thành khuẩn lạc: báo cáo kết quả tổng số đếm đĩa hiếu khí ít hơn 1 lần tương
ứng với độ pha loãng thấp nhất đã sử dụng. Đánh dấu kết quả này để lưu
ý rằng đây là số ước tính từ số đếm
nằm ngoài dải từ
25 đến 250 khuẩn lạc. Khi đĩa chứa mẫu
đã biết là bị nhiễm hoặc
mặt khác không thỏa mãn thì báo cáo kết quả là có sai sót của phòng thử nghiệm.
9.4 Làm tròn số
đếm đến hai chữ số có nghĩa, chỉ thực hiện
làm tròn một lần khi tính tổng số đếm đĩa. Khi làm tròn, tăng chữ số
có nghĩa thứ hai tính từ trái sang
phải lên một đơn vị nếu chữ số có nghĩa thứ ba bằng hoặc lớn hơn 5; giảm chữ số có
nghĩa thứ hai xuống một
đơn vị nếu chữ số có nghĩa thứ ba nhỏ hơn 5.
Bảng 1 - Ví dụ
về việc tính tổng số đếm đĩa (2 đĩa cho mỗi độ
pha loãng)
Số thứ tự của mẫu
Số khuẩn lạc
đếm được
Tổng số đếm đĩa/g
1 : 100
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
1 : 1 0000
1
TNTC a)
175 b)
16
190 000
TNTC
208
17
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
TNTC
224
25
250 000
TNTC
245
30
3
18
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
0
1 600 c)
14
0
0
4
TNTC
TNTC
523
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
TNTC
TNTC
487
5
TNTC
245
35
290 000
TNTC
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
mọc lan rộng
6
TNTC
245
23
260 000
TNTC
278
20
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
TNTC
225
21
270 000
TNTC
255
40
8
TNTC
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
18
230 000
TNTC
240
28
TNTC
260
30
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
TNTC
230
28
CHÚ THÍCH:
a) Số đếm khuẩn lạc >
250.
b) Các số có gạch dưới
là số đếm được dùng để tính kết quả.
c) Số đếm ước tính
10 Báo cáo thử nghiệm
Báo cáo thử nghiệm phải chỉ rõ:
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
b) phương pháp lấy mẫu đã sử dụng,
nếu biết;
c) phương pháp thử nghiệm đã dùng, viện
dẫn tiêu chuẩn này;
d) mọi chi tiết thao tác không được
quy định trong tiêu chuẩn này hoặc những điều được coi là tùy chọn cũng
như các sự cố bất kỳ có thể ảnh hưởng đến kết quả;
e) kết quả thử nghiệm thu được.
THƯ MỤC TÀI
LIỆU THAM KHẢO
[1] TCVN 4884:2005 (ISO 4833:2003)
Vi sinh vật trong thực phẩm và thức ăn chăn nuôi - Phương pháp định lượng
vi sinh vật trên đĩa thạch - Kỹ
thuật đếm khuẩn lạc ở 30 độ C
[2] TCVN
4884-1:2015 (ISO 4833-1:2013) Vi sinh vật trong chuỗi thực phẩm - Phương
pháp định
lượng
vi sinh vật - Phần 1: Đếm khuẩn lạc ở 30 °C bằng kỹ thuật
đổ đĩa