TIÊU CHUẨN VIỆT NAM
TCVN 5150:1990
THỊT VÀ SẢN PHẨM THỊT
Phương pháp xác định dư lượng hoocmôn thyroxin
Meat
and meat products
Determination of thyroxin residues
Tiêu chuẩn này quy định phương pháp
xác định hoócmôn thyroxin tồn dư trong thịt và sản phẩm của thịt dùng làm thực
phẩm cho người và thức ăn gia súc.
1. ĐẶC TÍNH
CHUNG
Thyroxin tên hóa học là
3,3,5,5-Tetra-Iodo-Tyroxin là một loại hoócmôn. Trong thực phẩm (chủ yếu là
thịt động vật) có chứa hàm lượng rất nhỏ chất này (thường từ cỡ namô-gam đến
micrôgam). Để phân tích định lượng, trước hết phải chiết nó ra khỏi mẫu, sau đó
xác định bằng các phương pháp phân tích có độ nhạy cao. Ngày nay để xác định
thyroxin, người ta thường dùng phương pháp sắc ký lỏng cao áp (HPLC).
2. NGUYÊN TẮC
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
3. LẤY MẪU
Theo TCVN 4833-89 (ST SEV 2433 -
80)
4. DỤNG CỤ,
THIẾT BỊ VÀ HÓA CHẤT
4.1. Dụng cụ, thiết bị:
+ Hệ máy HPLC với detector UV
+ Máy li tâm
+ Máy lắc
+ Phễu, chiết cỡ 250 ml
+ Bình định mức các loại
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
+ Cốc chịu nhiệt
+ Cột sắc ký loại 250 x 3,2 mm
+ Một vài dụng cụ khác.
4.2. Hóa chất: dùng loại tinh khiết
cho HPLC
+ Chất nhồi cột RP - 8 hay RP - 18
cỡ của Ø = 5 - 7 Mm
+ Đệm xitrát - phốt phát pH - 8 và
6,4
+ Natrihydro cacbonat (NaHCO3),
dung dịch 0,1 và 1 M
+ Thuốc thử Methanolic
+ Trifluoro axetic axit
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
+ Nước cất 2 lần
+ Dung dịch gốc tiêu chuẩn của
thyroxin nồng độ 1 mg/ml
5. CHUẨN BỊ THỬ
5.1. Chuẩn bị mẫu phân tích:
Mẫu thịt cần phân tích được thái
nhỏ, nghiền mịn, trộn đều và cân một lượng bằng 10g cho vào bình nón. Thêm 15
ml dung dịch đệm xitrát - phốtphat pH = 8. Đậy nút lại và lắc kỹ trong 30 phút.
Lọc hay li tâm lấy dung dịch trong. Thêm 1 ml natrihydrocácbonat 0,1M và 2ml
thuốc thử methanolic, lắc kỹ và để trong chậu nước đá trong 30 phút. Sau đó làm
bay hơi đến cạn ở 30 - 350C. Thêm 0,5 ml trifluoro axetic axit, lắc
nhẹ và để ở nhiệt độ phòng trong 30 phút. Sau đó trung hòa bằng 2 - 4 ml
natrihydrocácbonát, dung dịch 1M.
Ly tâm lấy kết tủa, hòa tan kết tủa
này trong hỗn hợp methanol/natrihydrocácbonát 0,1M với tỷ lệ 1/1 (về thể tích)
và định mức bằng nước cất đến 10 ml sau đó ly tâm lấy dung dịch trong bơm vào
cột sắc ký để phân tích thyroxin.
5.2. Pha dãy dung dịch chuẩn:
Dùng dung dịch gốc tiêu chuẩn của
thyroxin nồng độ 1 mg/ml, tính lấy lượng phù hợp để pha và định mức bằng nước
cất đến 25 ml sao cho nồng độ thyroxin trong các bình định mức là 2 - 4 - 6 - 8
- 10 - 12 Mg/ml.
5.3. Mẫu trắng:
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
5.4. Các điều kiện thực nghiệm:
+ Hệ thống HPLC với đêtếcto UV sóng
đo 240 nm
+ Cột tách HPLC: 250 x 3,2 mm nhồi
nhựa RP - 18 có cỡ hạt 5 - 7 Mm Ø
+ Máy ghi píc sắc ký (recorder) có
thế ghi 10 - 20 mV và tốc độ giấy là 5 - 10 mm/phút
+ Pha động: methanol/dung dịch đệm
xitrát - phốtphát pH - 6 và tỷ lệ là 60/40 (về thể tích).
+ Tốc độ pha động: 1 ml/phút
+ Lượng mẫu bơm vào cột: 50 Ml/1
lần thí nghiệm
+ Nhiệt độ thí nghiệm là 250C
+ Các điều kiện khác chọn phù hợp
với hệ HPLC.
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
+ Đặt các thông số đã chọn ở mục
5.4 cho máy HPLC
+ Đặt máy chạy, bơm pha động để ổn
định cột cách và đường nền. Khi đường nền thẳng là được.
+ Bơm lần lượt các mẫu chuẩn, mẫu
trắng rồi đến mẫu phân tích (mỗi mẫu bơm 3 lần lấy giá trị trung bình) vào cột
tách và ghi píc sắc ký tương ứng.
+ Hiệu chỉnh giá trị của mẫu trắng
(nếu có)
+ Dựng đường chuẩn theo hệ tọa độ H
- C. Trong đó H là chiều cao của píc sắc ký tương ứng với các nồng độ C của mẫu
chuẩn.
+ Xác định nồng độ Cx của mẫu phân
tích theo đường chuẩn trên.
7. TÍNH KẾT QUẢ
Hàm lượng thyroxin, tính bằng
dlg/g, trong mẫu phân tích được tính theo công thức sau:
Co =
(Cx . V) / a
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66