Cao men
Glucoza (C6H12O6)
Thạch
Nước
|
5g
20g
Từ 8 g đến 18 g 1)
1 000 ml
|
1) Tùy vào sức đông của thạch
|
5.3.1.2 Chuẩn bị
Hòa tan các thành phần trên vào nước bằng
cách đun sôi.
Chỉnh pH sao cho sau khi khử trùng pH là 6,6
ở 250C, nếu cần.
Chuyển môi trường vào các vật chứa thích hợp
(6.6).
Khử trùng 10 phút trong nồi hấp áp lực (6.1)
ở 1150C.
5.3.2. Dung dịch oxytetraxyclin
5.3.2.1. Thành phần
Oxytetraxyclin (C22H30N2O4)
Nước
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
25 ml
5.3.2.2. Chuẩn bị
Hòa tan oxytetraxyclin trong nước và lọc để
khử trùng dung dịch.
5.3.3. Dung dịch gentamixin
5.3.3.1. Thành phần
Gentamixin
Nước
25 mg1)
25 ml
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
5.3.3.2. Chuẩn bị
Hòa tan gentamixin vào nước và lọc để khử
trùng dung dịch.
5.3.4. Môi trường hoàn chỉnh
Cho 5 ml dung dịch oxitetraxiclin (5.3.2) và
5 ml dung dịch gentamixin (5.3.3) vào mỗi phần 100 ml môi trường cơ sở vô trùng
(5.3.1), đã được làm tan chảy và giữ trong nồi cách thủy (6.4) để ở 470C.
6. Thiết bị và dụng
cụ thủy tinh
Chú thích 2 - Có thể dùng dụng cụ sử dụng một
lần để thay thế cho các dụng cụ thủy tinh nếu nó có các đặc tính kỹ thuật phù
hợp.
Sử dụng các thiết bị, dụng cụ phòng thử
nghiệm vi sinh thông thường và đặc biệt là:
6.1. Thiết bị khử trùng khô (tủ sấy) hoặc khử
trùng ướt (nồi hấp áp lực)
Nồi hấp áp lực có thể hoạt động riêng rẽ hoặc
là một phần của thiết bị chung để chuẩn bị và phân phối môi trường.
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
6.2. Máy trộn, có khả năng trộn 1
ml hoặc 2 ml mẫu với 9 ml hoặc 18 ml dịch pha loãng trong một ống nghiệm có
kích thước thích hợp, để thu được huyền phù đồng nhất và máy hoạt động theo
nguyên tắc quay quanh tâm của lượng chứa trong ống.
6.3. Tủ ấm, có khả năng hoạt động
ở nhiệt độ từ 200C ±
10C đến 250C ± 10C.
6.4. Nồi cách thủy, có khả năng hoạt động
ở nhiệt độ 470C ±
20C.
6.5. pH-met, có độ chính xác trong
khoảng ± 0,1 đơn vị pH ở 250C.
6.6. Chai hoặc bình cấy mẫu
Có thể sử dụng chai hoặc bình có nắp xoáy
bằng kim loại không độc.
6.7. Pipet chia độ, đã hiệu chỉnh để dùng
cho xác định vi khuẩn, có dung tích danh định 10 ml và 1ml, được chia vạch 0,5
ml và 0,1 ml tương ứng và lỗ thoát có đường kính danh định từ 2 mm đến 3 mm.
6.8. Đĩa Petri, đường kính từ 90 mm
đến 100 mm.
7. Lấy mẫu
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Việc lấy mẫu không quy định trong tiêu chuẩn
này. Nên lấy mẫu theo TCVN 4833 - 1 : 2002 (ISO 3100 - 1) [2]
8. Chuẩn bị mẫu thử
Chuẩn bị mẫu thử theo TCVN 4833 - 2: 2002
(ISO 3100 - 2).
Tiến hành kiểm tra mẫu đã xử lý càng sớm càng
tốt. Nếu cần, có thể bảo quản mẫu ở nhiệt độ từ 00C đến +20C,
nhưng không quá 24h.
9. Cách tiến hành
9.1. Phần mẫu thử, huyền phù ban đầu và các
dung dịch pha loãng
Chuẩn bị huyền phù ban đầu và các dung dịch
pha loãng theo TCVN 6507 : 1999 (ISO 6887).
9.2. Cấy và ủ
9.2.1 Lấy hai đĩa Petri vô trùng (6.8). Dùng
pipet vô trùng (6.7) chuyển vào mỗi đĩa 1 ml mẫu thử nếu mẫu dạng lỏng hoặc 1
ml huyền phù ban đầu nếu mẫu ở dạng khác.
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
9.2.3. Từ chai cấy mẫu (6.6) rót vào mỗi đĩa
Petri khoảng 15 ml môi trường thạch của cao men, glucoza và
oxitetraxilin/gentamixin (5.3), đã tan chảy và được giữ ở 470C trong
nồi cách thủy (6.4). Thời gian từ khi kết thúc chuẩn bị mẫu thử đến thời điểm
môi trường được rót sang đĩa không quá 15 phút.
Trộn mẫu cấy một cách cẩn thận với môi trường
và cho hỗn hợp đông đặc lại bằng cách để các đĩa Petri trên bề mặt phẳng mát
nằm ngang.
9.2.4. Lật ngược các đĩa và đặt chúng vào tủ
ấm (6.3) để ở nhiệt độ từ 200C đến 250C.
9.3. Đếm và chọn các khuẩn lạc
Đếm các khuẩn lạc trên mỗi đĩa sau 3 ngày, 4
ngày và 5 ngày ủ ấm. Sau 5 ngày, giữ lại các đĩa chứa ít hơn 150 khuẩn lạc. Nếu
trên các đĩa quá nhiều nấm mốc mọc hoặc khó có thể đếm các khuẩn lạc tách biệt
thì ghi lại các số đếm được sau 4 ngày (thậm chí sau 3 ngày) ủ ấm. Khi đó trong
báo cáo thử nghiệm nêu rõ thời gian ủ là 3 ngày hoặc 4 ngày.
Nếu cần, tiến hành kiểm tra bằng kính hiển vi
để phân biệt các khuẩn lạc nấm men và nấm mốc với các khuẩn lạc của vi khuẩn có
kích thước nhỏ.
10. Biểu thị kết quả
10.1. Trường hợp chung
Sử dụng các đĩa chứa ít hơn 150 khuẩn lạc
(xem 9.3).
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
![](00900141_files/image001.gif)
Trong đó:
SC
là tổng số các khuẩn lạc đếm được trên tất cả các đĩa được giữ lại;
n1 là số đĩa được giữ lại ở độ pha
loãng đầu tiên;
n2 là số đĩa được giữ lại ở độ pha
loãng thứ hai;
d là hệ số pha loãng tương ứng với độ pha
loãng thứ nhất được giữ lại (tức là có nồng độ mẫu thử cao hơn).
Làm tròn các kết quả tính được đến hai chữ số
có nghĩa. Như vậy, nếu chữ số sau cùng nhỏ hơn 5 thì số đứng trước số đó không
bị thay đổi, còn nếu chữ số sau cùng là 5 hoặc nhỏ hơn 5 thì tăng số đứng trước
lên một đơn vị.
Làm tròn tiếp theo cho đến khi thu được hai
chữ số có nghĩa.
Lấy kết quả là số lượng vi sinh vật trong một
mililit (sản phẩm dạng lỏng) hoặc trong một gam (sản phẩm dạng khác), được biểu
thị bằng số từ 1,0 đến 9,9 nhân với lũy thừa tương ứng của 10.
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Số đếm trực tiếp của nấm men và nấm mốc cho
các kết quả sau (hai đĩa Petri cho mỗi độ pha loãng đã được ủ):
- ở độ pha loãng thứ nhất (10-2):
83 khuẩn lạc và 97 khuẩn lạc;
- ở độ pha loãng thứ hai (10-3): 33
khuẩn lạc và 28 khuẩn lạc.
Như vậy
![](00900141_files/image002.gif)
Làm tròn kết quả như quy định trên ta có 11
000 hoặc 1,1 x 104 nấm men hoặc nấm mốc trong một mililit hoặc một
gam sản phẩm.
10.2. Ước tính các số lượng nhỏ khuẩn lạc
Nếu có hai đĩa của mẫu thử (sản phẩm dạng
lỏng) hoặc huyền phù ban đầu (sản phẩm đặc) chứa ít hơn 15 khuẩn lạc, thì tính
trung bình số học y của các khuẩn lạc đếm được trên cả hai đĩa.
Biểu thị kết quả như sau:
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
- đối với sản phẩm dạng khác: Số lượng nấm
men và nấm mốc có trong một gam sản phẩm được ước tính là NE = y/d
Trong đó d là hệ số pha loãng của huyền phù
ban đầu.
10.3. Không có các khuẩn lạc trên các đĩa
Nếu không có các khuẩn lạc trên các đĩa mẫu
thử (sản phẩm dạng lỏng) thì số lượng nấm men và nấm mốc trong một mililit sản
phẩm được ghi là nhỏ hơn 1.
Nếu không có các khuẩn lạc trên các đĩa của
huyền phù ban đầu (sản phẩm dạng khác) thì số lượng nấm men và nấm mốc trong
một gam sản phẩm được ghi là nhỏ hơn 10.
11. Độ chụm
Tính riêng về mặt thống kê, trong 95% trường
hợp các giới hạn tin cậy của kỹ thuật đếm khuẩn lạc dao động từ ± 16% đến ± 52% (xem tài liệu
tham khảo [3]); đối với các số đếm ít hơn 15 khuẩn lạc trong một đĩa, các giới
hạn tin cậy được đưa ra trong phụ lục A. Trên thực tế, có thể gặp phải dao động
thậm chí còn lớn hơn, đặc biệt là giữa các kết quả nhận được từ các nhân viên
thử nghiệm khác nhau.
12. Báo cáo thử
nghiệm
Báo cáo thử nghiệm phải chỉ rõ
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
- phương pháp đã sử dụng, kể cả số ngày ủ;
- kết quả thử nghiệm thu được; và
- nếu kết quả cuối cùng thu được, nếu kiểm
tra độ lặp lại.
Báo cáo thử nghiệm phải chỉ ra phương pháp đã
sử dụng và kết quả thu được. Cũng phải đề cập đến tất cả các chi tiết thao tác
không quy định trong tiêu chuẩn này, cùng với các chi tiết bất thường nào khác
có thể ảnh hưởng tới kết quả.
Báo cáo thử nghiệm cũng phải gồm mọi thông
tin cần thiết để nhận biết đầy đủ về mẫu thử.
PHỤ LỤC
A
(quy định)
CÁC
GIỚI HẠN TIN CẬY ĐỐI VỚI ƯỚC TÍNH SỐ LƯỢNG NHỎ KHUẨN LẠC
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Số lượng khuẩn lạc 1)
Số lượng vi sinh
vật
Giới hạn tin cậy ở
mức 95%
Phần trăm lỗi đối
với giới hạn
Dưới
Trên
Dưới
Trên 2)
1
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
< 1
3
-97
+457
2
1
< 1
4
-88
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
3
2
< 1
4
-79
+192
4
2
1
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
-73
+156
5
2
1
6
-68
+133
6
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
1
6
-63
+118
7
4
2
7
-60
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
8
4
2
8
-57
+97
9
4
2
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
-54
+90
10
5
2
9
-52
+84
11
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
3
10
-50
+79
12
6
3
10
-48
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
13
6
3
11
-47
+71
14
7
4
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
-45
+68
15
8
4
12
-44
+65
16
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
5
13
-43
+62
17
8
5
14
-42
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
18
9
5
14
-41
+58
19
10
6
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
-40
+56
20
10
6
15
-39
+54
21
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
6
16
-38
+53
22
11
7
17
-37
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
23
12
7
17
-36
+50
24
12
8
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
-36
+49
25
12
8
18
-35
+48
26
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
8
19
-35
+47
27
14
9
20
-34
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
28
14
9
20
-34
+45
29
14
9
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
-33
+44
30
15
10
21
-32
+43
1) Đếm được trên hai đĩa Petri
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
PHỤ
LỤC B
(tham khảo)
TÀI
LIỆU THAM KHẢO
[1] TCVN 4993 - 89 (ISO 7954 : 1987) Vi sinh
vật học - Hướng dẫn chung đếm nấm men và nấm mốc. Kỹ thuật đếm khuẩn lạc ở 250C.
[2] TCVN 4833 - 1: 2002 (ISO 3100-1: 1991)
Thịt và sản phẩm thịt - Lấy mẫu và chuẩn bị mẫu thử - Phần 1: Lấy mẫu.
[3] Cowell, N.D.and Morisetti, M.D.J.Sci.Fd.Agric.,
20, 1969, p.573.