|
Dung
dịch chuẩn
|
1
|
2
|
3
|
4
|
5
|
Dung dịch làm việc melamine II
(A.4.6.3), ml
|
0
|
25
|
50
|
75
|
100
|
Dung dịch làm việc axit xyanuric
II (A.4.4.3), ml
|
0
|
25
|
50
|
75
|
100
|
Dung dịch làm việc melamine đánh
dấu II (A.4.7.3), ml
|
50
|
50
|
50
|
50
|
50
|
Dung dịch làm việc axit xyanuric
đánh dấu II (A.4.5.3), ml
|
50
|
50
|
50
|
50
|
50
|
Dung dịch axetonitril-nước
(A.6.1), ml
|
4900
|
4850
|
4800
|
4750
|
4700
|
Tương
ứng với:
|
Tổng nồng độ của các chất phân
tích, ng/ml
|
0
|
10
|
20
|
30
|
40
|
Tổng nồng độ của các chất chuẩn
nội, ng/ml
|
20
|
20
|
20
|
20
|
20
|
Hàm lượng các chất phân tích
(tương ứng trong mẫu), mg/kg
|
0,00
|
0,50
|
1,00
|
1,50
|
2,00
|
Hàm lượng các chất chuẩn nội
(tương ứng trong mẫu), mg/kg
|
1,00
|
1,00
|
1,00
|
1,00
|
1,00
|
A.6.2.2 Dung dịch chuẩn hỗn hợp
gồm melamine (nồng độ từ 0 mg/l đến 0,20 mg/l) và axit xyanuric (nồng độ từ 0
mg/l đến 0,30 mg/l) với các chất chuẩn nội tương ứng (nồng độ 0,10 mg/l)
Chuẩn bị năm dung dịch chuẩn hỗn
hợp trong các bình định mức 5 ml (A.5.12) có dải nồng độ melamine từ 0 mg/l đến
0,20 mg/l và nồng độ axit xyanuric từ 0 mg/l đến 0,30 mg/l với nồng độ chất
chuẩn nội tương ứng cho cả 2 chất là 0,10 mg/l được nêu trong Bảng A.2.
Dung dịch được bảo quản ở 4 oC,
tránh ánh sáng.
Bảng
A.2 - Hỗn hợp chuẩn melamine và axit xyanuric từ 6 đến 10
Dung
dịch chuẩn
6
7
8
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
10
Dung dịch làm việc melamine III
(A.4.6.4), ml
0
25
50
75
100
Dung dịch làm việc axit xyanuric
III (A.4.4.4), ml
0
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
75
100
150
Dung dịch làm việc melamine đánh
dấu III (A.4.7.4), ml
50
50
50
50
50
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
50
50
50
50
50
Dung dịch axetonitril-nước
(A.6.1), ml
4900
4825
4775
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
4650
Tương
ứng với:
Nồng độ melamine, ng/ml
0
1
2
3
4
Nồng độ axit xyanuric, ng/ml
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
2
3
4
6
Nồng độ chất chuẩn nội (melamine
hoặc axit xyanuric), ng/ml
2
2
2
2
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Hàm lượng melamine (tương ứng
trong mẫu), mg/kg
0,00
0,05
0,10
0,15
0,20
Hàm lượng axit xyanuric (tương
ứng trong mẫu), mg/kg
0,00
0,10
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
0,20
0,30
Hàm lượng chất chuẩn nội
(melamine và axit xyanuric, tương ứng trong mẫu), mg/kg
0,10
0,10
0,10
0,10
0,10
A.6.3 Dung dịch chạy sắc kí
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Chuyển 0,77 g amoni axetat (A.4.3)
vào bình định mức 1 000 ml (A.5.12). Hòa tan bằng khoảng 50 ml nước (A.4.1).
Thêm nước (A.4.1) đến vạch và trộn. Lọc qua màng lọc 0,22 mm.
A.6.3.2 Pha động B: axetonitril.
Sử dụng axetonitril tinh khiết dùng
cho HPLC (A.4.2).
A.7 Lấy mẫu
Việc lấy mẫu không được quy định
trong phụ lục này. Nên lấy mẫu theo TCVN 6400 (ISO 707) [1].
Mẫu gửi đến phòng thử nghiệm phải
đúng là mẫu đại diện, không bị hư hại hoặc thay đổi trong quá trình vận chuyển
và bảo quản.
Nếu không thể tiến hành phân tích
ngay thì bảo quản mẫu sữa bò ở 4 oC hoặc đông lạnh.
A.8 Chuẩn bị mẫu thử
A.8.1 Thức ăn công thức dạng bột
từ sữa dành cho trẻ sơ sinh
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Trộn đều hỗn hợp bằng cách lắc và
đảo chiều bình chứa nhiều lần.
A.8.2 Sữa bò
Để mẫu thử về nhiệt độ phòng. Đảo
trộn mẫu thử nhiều lần để đảm bảo mẫu được đồng nhất trước khi đem cân phần mẫu
thử.
A.9 Cách tiến hành
A.9.1 Quy trình chiết mẫu
Cân 1 g mẫu sữa bò (A.8.2) hoặc
thức ăn công thức dạng bột dành cho trẻ sơ sinh (A.8.1), chính xác đến 0,01 g,
cho vào ống li tâm 50 ml (A.5.1).
a) Đối với mẫu có hàm lượng
melamine và hàm lượng axit xyanuric đến 2 mg/kg, với nồng độ chất chuẩn nội 1
mg/kg, thêm vào phần mẫu thử 50 ml dung
dịch làm việc melamine đánh dấu I (A.4.7.2) và 50 ml làm việc axit xyanuric đánh dấu I (A.4.5.2). Trộn đều cho đến
khi thể tích thêm vào được hấp thụ hoàn toàn bởi nền mẫu.
b) Đối với mẫu có hàm lượng
melamine đến 0,2 mg/kg và hàm lượng axit xyanuric đến 0,3 mg/kg với nồng độ
chất chuẩn nội 0,1 mg/kg, thêm vào phần mẫu thử 50 ml chuẩn làm việc melamine đánh dấu II (A.4.7.3) và 50 ml chuẩn làm việc axit xyanuric đánh dấu II
(A.4.5.3). Trộn đều cho đến khi thể tích thêm vào được hấp thụ hoàn toàn bởi
nền mẫu.
Sau đó, thêm 5 ml nước (A.4.1) vào
ống li tâm đã được chuẩn bị ở a) hoặc b). Trộn đều để không tạo cục kết dính.
Thêm 5 ml axetonitril (A.4.2). Lắc mạnh trong ít nhất 1 min.
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Nếu lớp dịch này không trong thì
chuyển phần dịch sang ống li tâm khác và li tâm lại với tốc độ 8500g ở
nhiệt độ phòng trong 10 min bằng máy li tâm.
Chuyển khoảng 0,5 ml đến 1 ml dịch
trong lọ đựng mẫu HPLC. Sau đó đem phân tích trên LC-MS/MS (A.9.3).
A.9.2 Mẫu trắng thuốc thử
Nếu cần kiểm soát sự nhiễm bẩn
melamine và axit xyanuric trong quá trình chiết mẫu, sử dụng mẫu trắng thuốc
thử không cho thêm nền mẫu. Phân tích mẫu trắng thuốc thử cùng với mỗi dãy mẫu
phân tích hàng ngày.
A.9.3 Điều kiện LC-MS/MS
A.9.3.1 Điều kiện HPLC
Pha động A:
Dung dịch amoni axetat (A.6.3.1)
Pha động B:
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Thể tích bơm:
5 ml
Cột sắc kí:
TOSOH TSKgel Amide-80, đường kính
2,0 mm, chiều dài 250 mm, cỡ hạt 5 mm
Nhiệt độ cột:
Nhiệt độ phòng
Tốc độ dòng:
0,25 ml/min
Gradient:
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Van chuyển:
Dòng từ HPLC được cho vào
detector MS từ 3,0 min đến 13,5 min
Bảng
A.3 - Gradient sắc kí lỏng sử dụng để phân tích melamine và axit xyanuric
Thời
gian
min
A
%
B
%
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
10
90
8
10
90
13
65
35
14
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
10
15
90
10
15,5
10
90
25
10
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Trong các điều kiện trên, thời gian
lưu của axit xyanuric khoảng 6,4 min và của melamine khoảng 11,5 min (xem Hình
A.1 đến Hình A.3).
A.9.3.2 Các thông số về khối phổ
Các thông số khối phổ thu được bằng
cách bơm dung dịch làm việc melamine I (A.4.6.2) và dung dịch làm việc axit
xyanuric I (A.4.4.2), đều có nồng độ 20 mg/ml,
với tốc độ 5 ml/min tốc độ vào dòng
HPLC 0,25 ml/min, sử dụng bộ kết nối chữ T. Dòng HPLC có chứa 50 % pha động A
(A.6.3.1) và 50 % pha động B (A.6.3.2). Bảng A.4 đến Bảng A.6 đưa ra điều kiện
hoạt động của thiết bị để phân tích melamine và axit xyanuric.
Bảng
A.4 - Các thông số khối phổ điển hình đối với melamine
Thông
số
Biosystems
Aciex 4000 QTrap
Kiểu ion hóa
Ion hóa phun điện tử (ESI)
Điện thế dòng phun
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Chiều phân cực
Ion hóa dương
Nhiệt độ buồng ion hóa
500 oC
Khí
Khí chắn (curtain gas): 69 kPa
(10 psi)
Khí nguồn ion 1: 207 kPa (30 psi)
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Điện thế bắn phá (DP)
60 V
Điện thế đầu vào (EP)
10 V
Điện thế bắn đầu ra (CXP)
15 V
Áp suất khí bắn phá (SRM)
0,8 Pa (6 mToor), nitơ
Độ rộng chân pic (mỗi chế độ)
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Độ phân giải
Unit (cả hai tứ cực)
Thời gian quét
100 ms
Chuyển đổi ion dương/ion âm tại T
8 min
Bảng
A.5 - Các thông số MS cho axit xyanuric
Thông
số
Biosystems
Aciex 4000 QTrap
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Ion hóa phun điện tử (ESI)
Điện thế dòng phun
-3,5
kV
Chiều phân cực
Ion hóa âm
Nhiệt độ buồng ion hóa
500 oC
Khí
Khí chắn (curtain gas): 69 kPa
(10 psi)
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Khí nguồn ion 1: 207 kPa (30 psi)
Khí nguồn ion 2: 207 kPa (30 psi)
Điện thế bắn phá (DP)
-
40 V
Điện thế đầu vào (EP)
-
10 V
Điện thế bắn đầu ra (CXP)
-
15 V
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
0,8 Pa (6 mToor), nitơ
Độ rộng chân pic (mỗi chế độ)
0,7 Th
Độ phân giải
Unit (cả hai tứ cực)
Thời gian quét
100 ms
Chuyển đổi ion dương/ion âm
8 min
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Chất
phân tích
Phản
ứng chuyển khối (m/z)a để
Tỉ
lệ diện tích píc ± giới hạn
(%)
Định
lượng
Định
tính
Melamine
127,0
® 85,1 (26)
127,0
® 68,0 (45)
0,28
± 25
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
133,0
® 89,1 (26)
133,0
® 71,1 (45)
0,19
± 25
Axit xyanuric
128,0
® 42,1 (30)
128,0
® 85,2 (14)
0,55
± 20
Axit xyanuric đánh dấu [13C3H315N3O3]
(IS)
134,0
® 44,1 (30)
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
0,52
± 20
a Năng lượng bắn phá,
đo bằng electron volt, được đưa ra trong dấu ngoặc đơn.
CHÚ THÍCH: Tùy vào loại detector MS
sử dụng mà tỉ lệ diện tích pic của các phản ứng chuyển khối có thể khác so với
số liệu trong Bảng A.6.
A.9.3.3 Phép thử kiểm tra thiết
bị
Cần đảm bảo các điều kiện hoạt động
của thiết bị LC-MS/MS để đáp ứng yêu cầu của phương pháp. Điều này liên quan
đến việc bơm một dung dịch hiệu chuẩn nồng độ thấp (ví dụ dung dịch chuẩn 7,
Bảng A.2) để kiểm tra xem độ nhạy của thiết bị có thích hợp không.
A.9.4 Quy trình lập đường chuẩn
và phân tích mẫu
Melamine và axit xyanuric được định
lượng bằng phương pháp ngoại chuẩn. Bơm các dung dịch chuẩn (A.6.2.1 hoặc
A.6.2.2) cho mỗi dãy mẫu phân tích hàng ngày.
A.9.5 Khẳng định
Melamine và axit xyanuric được coi
là dương tính trong mẫu thử nếu đáp ứng đầy đủ các tiêu chí từ a) đến c) theo
quy định tại Quyết định số 2002/657/EC của Ủy ban châu Âu (Tài liệu tham khảo
[8]).
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
b) Tỉ lệ giữa thời gian lưu sắc kí
của chất phân tích với thời gian lưu của chất chuẩn nội tương ứng, nghĩa là
thời gian lưu tương đối của chất phân tích, tương ứng với thời gian lưu tương
đối trung bình của dung dịch hiệu chuẩn trong dung sai ± 2,5 %.
c) Tỉ lệ diện tích pic giữa các
phản ứng chuyển khối khác nhau của mỗi chất phân tích nằm trong khoảng cho phép
quy định tại Quyết định số 2002/657/EC của Ủy ban châu Âu (Tài liệu tham khảo
[8]), được nêu trong Bảng A.6.
A.10 Tính và biểu thị kết quả
A.10.1 Tính kết quả
Phần mềm thích hợp có thể có hướng
dẫn xử lý kết quả, kiểm tra tính tuyến tính của đường chuẩn, tính các tỉ lệ
diện tích thu được từ các phản ứng chuyển khối khác nhau (như trong Bảng A.6),
để khẳng định sự có mặt của chất phân tích và đưa ra kết quả cuối cùng, biểu
thị bằng miligam trên kilogam.
CHÚ THÍCH: Đường chuẩn có dạng:
a = bw + a
Trong đó:
a
là tỉ lệ diện tích;
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
w là phần khối lượng;
a là hệ số tự do.
Tính hàm lượng chất cần phân tích, wa,
bằng miligam trên kilogam (đối với chất phân tích là melamine thì wa
= wm; chất phân tích là axit xyanuric thì wa
= wc), theo công thức sau:
Trong đó:
Aa
là diện tích píc của chất phân
tích có trong mẫu;
AIS
là diện tích píc của chất chuẩn
nội có trong mẫu;
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
là hệ số tự do;
b
là độ dốc;
mIS
là khối lượng chất chuẩn nội thêm
vào mẫu thử, tính bằng nanogam (ng) (A.9.1);
ma
là khối lượng mẫu thử, tính bằng
gam (g) (A.9.1).
A.10.2 Biểu thị kết quả
Biểu thị kết quả đến hai chữ số
thập phân.
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
A.11.1 Độ tuyến tính
Các dải tuyến tính đã thử nghiệm
được nêu trong a) và b).
a) Melamine:
tương ứng từ 0 mg/kg đến 0,20
mg/kg và từ 0 mg/kg đến 2,00 mg/kg (hàm lượng tương đương trên nền mẫu).
b) Axit xyanuric:
tương ứng từ 0 mg/kg đến 0,30
mg/kg và từ 0 mg/kg đến 2,00 mg/kg (hàm lượng tương đương trên nền mẫu).
Khi hiệu chuẩn theo mô hình tuyến
tính thì độ lặp lại phải được phân bố đều và các tín hiệu đo phải ổn định trong
dải nồng độ trên.
A.11.2 Giới hạn phát hiện
LOD (tỉ lệ tín hiệu trên nhiễu bằng
3) của melamine là 0,03 mg/kg và của axit xyanuric là 0,05 mg/kg trên cả hai
loại mẫu CM và PIF.
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
LOQ của melamine là 0,05 mg/kg và
của axit xyanuric là 0,10 mg/kg trên cả hai loại mẫu CM và PIF.
A.11.4 Giới hạn quyết định và
khả năng phát hiện trên thức ăn công thức từ sữa dành cho trẻ sơ sinh
Giả thiết giới hạn tối đa (ML) là 1
mg/kg trong PIF, thì giới hạn quyết định, wCCa và khả năng phát hiện, wCCb, được nêu trong a) và b).
a) Đối với melamine:
wCCa = 1,03 mg/kg; wCCb = 1,05 mg/kg;
b) Đối với axit xyanuric:
wCCa = 1,04 mg/kg; wCCb = 1,09 mg/kg.
A.11.5 Độ thu hồi
Đối với cả melamine và axit
xyanuric, độ thu hồi đã hiệu chỉnh bằng chất chuẩn nội nằm trong khoảng 99 %
đến 116 %.
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Giá trị về giới hạn lặp lại tương
đối và giới hạn tái lập nội bộ phòng thử nghiệm thu được từ các nghiên cứu liên
phòng thử nghiệm quy mô nhỏ theo TCVN 6910-1 (ISO 5725-1) và TCVN 6910-2 (ISO
5725-2) [5], nhưng không đáp ứng tất cả các yêu cầu của các tiêu
chuẩn này.
A.11.6.1 Giới hạn lặp lại tương
đối
Giá trị giới hạn lặp lại tương đối
thu được bằng cách sử dụng quy trình mô tả trong phương pháp này được trình bày
trong Bảng A.7.
Bảng
A.7 - Giá trị độ lặp lại tương đối điển hình
Chất
phân tích
Nền
mẫu
Giá
trị độ lặp lại tương đối
%
Khoảng
nồng độ
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
CM
6
0,05
đến 0,15
Melamine
PIF
12
0,05
đến 0,15
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
4
0,5
đến 1,5
CM
8
0,1
đến 0,2
Axit
xyanuric
PIF
11
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
PIF
5
0,5
đến 1,5
A.11.6.2 Giới hạn tái lập nội bộ
phòng thử nghiệm
Giá trị giới hạn tái lập phòng thử
nghiệm thu được bằng cách sử dụng quy trình mô tả trong phương pháp này được
trình bày trong Bảng A.8.
Bảng
A.8 - Giá trị tái lập tương đối nội bộ phòng thử nghiệm điển hình
Chất
phân tích
Nền
mẫu
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
%
Khoảng
nồng độ
mg/kg
CM
13
0,05
đến 0,15
Melamine
PIF
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
0,05
đến 0,15
PIF
6
0,5
đến 1,5
CM
10
0,1
đến 0,2
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
PIF
31
0,1
đến 0,2
PIF
13
0,5
đến 1,5
A.12 Sắc đồ mẫu
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Hình
A.2 - Ví dụ về sắc đồ LC-MS/MS của melamine (MEL) và axit xyanuric (CA) từ dịch
chiết mẫu thức ăn công thức dạng bột từ sữa dành cho trẻ sơ sinh thêm chuẩn ở
mức: MEL = 0,05 mg/kg (IS = 0,1 mg/kg), CA = 0,1 mg/kg (IS = 0,1 mg/kg)
Hình
A.3 - Ví dụ về sắc đồ LC-MS/MS của melamine (MEL) và axit xyanuric (CA) từ dịch
chiết mẫu thức ăn công thức từ sữa dành cho trẻ sơ sinh thêm chuẩn ở mức: MEL
= 0,5 mg/kg (IS = 0,1 mg/kg), CA = 0,5 mg/kg (IS = 0,1 mg/kg)
A.13 Báo cáo thử nghiệm
Báo cáo thử nghiệm của phương pháp
A phải bao gồm ít nhất các thông tin sau:
a) tất cả thông tin cần thiết để
nhận dạng đầy đủ mẫu thử;
b) phương pháp lấy mẫu được sử
dụng, nếu biết;
c) phương pháp thử được sử dụng,
viện dẫn phụ lục này [Phụ lục A của TCVN 9048 (ISO/TS 15495)];
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
e) kết quả thử nghiệm thu được;
f) kết quả cuối cùng thu được, nếu
kiểm tra độ lặp lại.
Phụ lục B
(Tham
khảo)
Ví
dụ B - Phân tích định lượng melamine và axit xyanuric trong thức ăn công thức
từ sữa dành cho trẻ sơ sinh và sữa bò bằng sắc kí lỏng sử dụng khối phổ bẫy ion
tuyến tính
B.1 Phạm vi áp dụng
Phụ lục này quy định phương pháp
xác định melamine và axit xyanuric trong thức ăn công thức từ sữa dành cho trẻ
sơ sinh và trong sữa bò bằng phương pháp khối phổ hai lần (LC-MS/MS) bẫy ion
tuyến tính với nguồn ion hóa phun điện tử và chế độ theo dõi phản ứng được chọn
(SRM). Định lượng bằng cách dùng dung dịch đồng vị (13C, 15N)-melamine
và đồng vị (13N, 15C)-axit xyanuric làm chất chuẩn nội
(IS).
B.2 Thuật ngữ và định nghĩa
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
B.3 Nguyên tắc
Melamine và axit xyanuric được
chiết đồng thời bằng axetonitril cùng lúc với kết tủa protein. Sau khi li tâm,
lớp trên được tiếp tục phân tích bằng LC-MS/MS bẫy ion ở chế độ SRM. Melamine
và axit xyanuric được phân tích riêng biệt lần lượt ở hai chế độ ion dương và
ion âm.
B.4 Thuốc thử
Chỉ sử dụng các thuốc thử tinh
khiết phân tích, trừ khi có quy định khác và sử dụng nước cất hoặc nước đã loại
kháng hoặc nước có độ tinh khiết tương đương.
CHÚ THÍCH: Số CAS được cung cấp cho
mỗi thuốc thử.
Trước khi sử dụng hóa chất, cần
tuân theo hướng dẫn hoặc thủ tục đảm bảo an toàn được quy định bởi cơ quan có
thẩm quyền.
B.4.1 Nước, dùng cho sắc kí
(số CAS 7732-18-5).
B.4.2 Axetonitril (CH3CN),
loại dùng cho sắc kí lỏng (số CAS 75-05-8).
B.4.3 Amoni axetat (CH3COONH4),
tinh khiết phân tích (số CAS 631-61-8).
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Dùng pipet lấy 10 ml axit formic
(số CAS 64-18-6, tinh khiết phân tích) cho vào bình định mức 1000 ml (B.5.8).
Thêm nước (B.4.1) đến vạch và trộn.
B.4.5 Axit xyanuric [(CHOH)3],
độ tinh khiết lớn hơn 98 % khối lượng (số CAS 108-80-5)
B.4.5.1 Dung dịch chuẩn gốc axit
xyanuric, nồng độ 0,1 mg/ml
Cân 20 mg axit xyanuric (B.4.5),
chính xác đến 0,1 mg, cho vào bình định mức 200 ml (B.5.8). Hòa tan và thêm
dung dịch axit formic (B.4.4) đến vạch. Siêu âm 10 min cho tan hoàn toàn.
Dung dịch chuẩn gốc axit xyanuric
có thể bảo quản được 10 ngày ở 4oC. Chuẩn bị dung dịch chuẩn gốc mới
sau 10 ngày.
B.4.5.2 Dung dịch làm việc axit
xyanuric, nồng độ 10 mg/ml
Dùng pipet lấy 10 ml dung dịch
chuẩn gốc axit xyanuric (B.4.5.1) vào bình định mức 100 ml (B.5.8). Thêm dung
dịch axit formic (B.4.4) đến vạch. Siêu âm ít nhất 10 min cho tan hoàn toàn.
Dung dịch làm việc axit xyanuric có
thể bảo quản được 10 ngày ở 4oC. Chuẩn bị dung dịch làm việc mới sau
10 ngày.
B.4.6 Axit xyanuric đánh dấu (13C3H315N3O3),
độ tinh khiết đồng vị: 13C3 = 99 %; vòng 15N3
> 98%; độ tinh khiết hóa học > 90 % khối lượng, nồng độ 100 mg/ml -
1,2 ml.
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Dung dịch chuẩn gốc axit xyanuric
đánh dấu có thể được mua từ Cambridge Isotope Laboratories5) (độ
tinh khiết 90% khối lượng). Bảo quản ở nhiệt độ phòng, tránh ánh sáng.
B.4.6.2 Dung dịch làm việc axit
xyanuric đánh dấu, nồng độ 10 mg/ml
Dùng pipet lấy 1,1 ml dung dịch
chuẩn gốc axit xyanuric đánh dấu (B.4.6.1) vào bình định mức 10 ml (B.5.8).
Thêm dung dịch axit formic (B.4.4) đến vạch và trộn.
Dung dịch làm việc axit xyanuric
đánh dấu được sử dụng làm chất chuẩn nội (IS). Bảo quản dung dịch ở 4 oC.
B.4.7 Melamine (C3H6N6),
> 98 % khối lượng (số CAS 108-78-1)
B.4.7.1 Dung dịch chuẩn gốc
melamine, nồng độ 0,1 mg/ml.
Cân 20 mg melamine (B.4.7), chính
xác đến 0,1 mg, vào bình định mức 200 ml (B.5.8). Hòa tan và thêm dung dịch
axit formic (B.4.4) đến vạch. Siêu âm ít nhất 10 min cho tan hoàn toàn.
Dung dịch chuẩn gốc melamine có thể
bảo quản được 10 ngày ở 4oC. Chuẩn bị dung dịch chuẩn làm việc mới
sau 10 ngày.
B.4.7.2 Dung dịch làm việc
melamine I, nồng độ 10 mg/ml.
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Dung dịch làm việc melamine I có
thể bảo quản được 10 ngày ở 4oC. Chuẩn bị dung dịch làm việc mới sau
10 ngày.
B.4.7.3 Dung dịch làm việc melamine
II, nồng độ 1 mg/ml.
Dùng pipet lấy 10 ml dung dịch làm
việc melamine I (B.4.7.2) vào bình định mức 100 ml (B.5.8). Thêm dung dịch axit
formic (B.4.4) đến vạch. Siêu âm ít nhất 10 min cho hòa tan hoàn toàn.
Dung dịch làm việc melamine II có
thể bảo quản được 10 ngày ở 4oC. Chuẩn bị dung dịch làm việc mới sau
10 ngày.
B.4.8 Melamine đánh dấu [13C3N3(15NH2)3],
độ tinh khiết đồng vị: 13C3 = 99%, amino-15N3
= 98%; độ tinh khiết hóa học ≥ 98 % khối lượng, 100 mg/ml trong nước - 1,2
ml.
B.4.8.1 Dung dịch chuẩn gốc
melamine đánh dấu, nồng độ 100 mg/ml.
Dung dịch chuẩn gốc melamine đánh
dấu được bán sẵn. Bảo quản dung dịch ở nhiệt độ phòng, tránh ánh sáng.
B.4.8.2 Dung dịch làm việc
melamine đánh dấu, nồng độ 10 mg/ml.
Dùng pipet lấy 1 ml dung dịch chuẩn
gốc melamine đánh dấu (B.4.8.1) vào bình định mức 10 ml (B.5.8). Thêm dung dịch
axit formic (B.4.4) đến vạch và trộn.
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
B.5 Thiết bị, dụng cụ
Dụng cụ thủy tinh (ví dụ bình định
mức, B.5.8) dùng để chuẩn bị dung dịch chuẩn gốc và dung dịch làm việc có thể
bị nhiễm bẩn, đặc biệt là nhiễm melamine. Vì thế, tất cả dụng cụ cần được rửa
sạch bằng chất tẩy rửa phòng thử nghiệm, tráng bằng nước cất và làm khô trong
không khí.
Sử dụng các thiết bị của phòng thử
nghiệm thông thường và cụ thể như sau:
B.5.1 Ống li tâm, hình trụ,
bằng polypropylen, dung tích 50 ml, ví dụ 21008-1696).
B.5.2 Máy li tâm, có rotor
thích hợp với ống 50 ml và gia tốc góc 4 000g, ví dụ RC67).
B.5.3 Cột HPLC, ZIC-HILIC8),
2,1 mm x 150 mm, 5 mm, 20 nm.
B.5.4 Xyranh bằng nhựa, dung
tích 3 ml, Norm-Ject6).
B.5.5 Bộ lọc dạng xyranh, loại
đĩa 13 mm, màng nylon 0,2 mm, ví dụ
28143-9856).
B.5.6 Bơm HPLC Surveyor MS9)
nối với khối phổ bẫy ion tuyến tính LTQ-XL9), được
trang bị nguồn ion hóa phun điện tử.
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
B.5.8 Bình định mức, dung
tích 10 ml, 100 ml, 200 ml và 1 000 ml, TCVN 7153 (ISO 1042)[3],
loại A.
B.6 Chuẩn bị thuốc thử
B.6.1 Đường chuẩn của melamine
và axit xyanuric
B.6.1.1 Dung dịch chuẩn melamine
(0 mg/l đến 5 ml/l) với chất chuẩn nội tương ứng (ở mức 1,00 mg/l)
Chuẩn bị dung dịch chuẩn melamine
vào 6 bình định mức dung tích 10 ml riêng biệt (B.5.8) như trong Bảng B.1. Bảo
quản các dung dịch ở 4oC.
Bảng
B.1 - Dung dịch chuẩn melamine
Dung
dịch chuẩn
1
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
3
4
5
6
Dung dịch làm việc melamine I
(B.4.7.2), ml
0
0
100
200
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
700
Dung dịch làm việc melamine II
(B.4.7.3), ml
0
150
0
0
0
0
Dung dịch melamine đánh dấu (IS)
(B.4.8.2), ml
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
150
150
150
150
150
Axetonitril (B.4.2), ml
9850
9700
9750
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
9400
9150
Tương
ứng với
Nồng độ melamine, ng/ml
0
15
100
200
450
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Nồng độ melamine đánh dấu (IS),
ng/ml
150
150
150
150
150
150
Hàm lượng melamine (tương ứng
trong mẫu), mg/kg
0,00
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
0,66
1,33
3,00
4,66
Hàm lượng chất chuẩn nội melamine
(tương ứng trong mẫu), mg/kg
1,00
1,00
1,00
1,00
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
1,00
B.6.1.2 Dung dịch chuẩn axit
xyanuric (0 mg/l đến 5 ml/l) với chất chuẩn nội axit xyanuric tương ứng (ở mức
0,66 mg/l)
Chuẩn bị dung dịch chuẩn axit
xyanuric vào 6 bình định mức riêng biệt (B.5.8) như trong Bảng B.1. Bảo quản
các dung dịch ở 4oC.
Bảng
B.2 - Dung dịch chuẩn axit xyanuric
Dung
dịch chuẩn
1
2
3
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
5
6
Dung dịch chuẩn làm việc axit
xyanuric (B.4.5.2), ml
0
25
100
200
550
700
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
100
100
100
100
100
100
Axetonitril (B.4.2), ml
9900
9875
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
9700
9350
9200
Tương
ứng với:
Nồng độ axit xyanuric, ng/ml
0
25
100
200
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
700
Nồng độ axit xyanuric đánh dấu
(IS), ng/ml
100
100
100
100
100
100
Hàm lượng axit xyanuric (tương
ứng trong mẫu), mg/kg
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
0,17
0,66
1,33
3,66
4,66
Hàm lượng chất chuẩn nội axit
xyanuric (tương ứng trong mẫu), mg/kg
0,66
0,66
0,66
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
0,66
0,66
B.6.2 Dung môi sắc kí
B.6.2.1 Pha động A, dung
dịch amoni axetat, nồng độ 10 mmol/l trong hỗn hợp axetonitril và nước (1:1).
Chuyển 0,77 g amoni axetat vào bình
định mức 1 000 ml (B.5.8). Thêm 500 ml nước (B.4.1) và hòa tan amoni axetat.
Thêm axetonitril (B.4.2) đến vạch và trộn. Lọc dung dịch qua màng lọc 0,22 mm.
B.6.2.2 Pha động B, axetonitril.
Sử dụng axetonitril (B.4.2).
B.7 Lấy mẫu
Việc lấy mẫu không phải là một phần
của phương pháp mô tả trong phụ lục này. Nên lấy mẫu theo TCVN 6400 (ISO 707)[1].
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Bảo quản sữa tươi ở 4 oC
nếu không thực hiện phân tích ngay sau khi nhận mẫu.
B.8 Chuẩn bị phần mẫu thử
B.8.1 Thức ăn công thức từ sữa
dành cho trẻ sơ sinh
Đảm bảo mẫu phòng thử nghiệm được
đồng nhất bằng cách chuyển vào bình chứa có dung tích lớn gấp hai lần dung tích
mẫu. Đậy kín ngay bình. Trộn đều bằng cách lắc kỹ và dốc ngược bình chứa.
B.8.2 Sữa bò
Giữ mẫu ở nhiệt độ phòng. Đảm bảo
mẫu đồng nhất trước khi cân bằng cách quay ngược bình nhiều lần.
B.9 Cách tiến hành
B.9.1 Quy trình chiết
Cân 3,00 g thức ăn công thức từ sữa
dành cho trẻ sơ sinh (B.8.1) hoặc sữa bò (B.8.2), chính xác đến 0,01 g, cho vào
ống li tâm 50 ml (B.5.1). Thêm 300 ml
dung dịch làm việc melamine đánh dấu (IS) (B.4.8.2). Thêm 200 ml dung dịch làm việc axit xyanuric đánh dấu
(IS) (B.4.6.2). Sau đó thêm 19,5 ml axetonitril (B.4.2) và lắc kỹ để đảm bảo
không tạo cục kết dính.
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
B.9.2 Điều kiện LC-MS/MS
Bơm dung dịch mẫu vào LC-MS/MS để
phân tích.
CHÚ THÍCH: Melamine và axit
xyanuric được phát hiện riêng biệt bằng các lần phân tích LC-MS khác nhau.
B.9.2.1 Điều kiện HPLC
Pha động A:
Dung dịch amoni axetat (B.6.2.1)
Pha động B:
Axetonitrile (B.6.2.2)
Thể tích bơm:
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Cột sắc kí:
ZIC-HILIC, 2,1 mm x 150 mm, 5 mm, 20 nm
Nhiệt độ cột:
Nhiệt độ phòng
Tốc độ dòng:
0,4 ml/min
Gradient:
Xem Bảng B.3
Van chuyển:
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Bảng
B.3 - Gradient sắc kí lỏng sử dụng để phân tích melamine hoặc axit xyanuric
Thời
gian
min
A
%
B
%
0
3
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
2
3
97
2,5
20
80
11
20
80
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
3
97
16
30
97
Điều kiện HPLC đối với melamine và
axit xyanuric là giống nhau. Trong các điều kiện này, thời gian lưu của cả
melamine và axit xyanuric là khoảng 5 min.
B.9.2.1 Các thông số về khối phổ
Hiệu chuẩn chất phân tích bằng cách
dùng xyranh bơm dung dịch chuẩn melamine và dung dịch chuẩn axit xyanuric nồng
độ 10 mg/ml. Giữ tốc độ bơm của xyranh
không đổi 5 ml/min bằng van nối chữ T
với tốc độ dòng HPLC là 0,4 ml/min. Giữ tỉ lệ dòng HPLC là 20 % pha động A và
80 % pha động B. Các điều kiện vận hành MS cho phân tích melamine và axit
xyanuric được liệt kê trong Bảng B.4 đến Bảng B.6.
Bảng
B.4 - Các thông số khối phổ điển hình đối với melamine
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Bẫy
ion tuyến tính LTQ-XL
Kiểu ion hóa
Ion hóa phun điện tử (ESI)
Điện thế dòng phun
5 kV
Chiều phân cực
Ion hóa dương
Nhiệt độ ống chuyển
350 oC
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Khí mang: 60 đơn vị tùy ý
Khí bổ trợ: 20 đơn vị tùy ý
Khí làm sạch: 0
Dòng điện phun
5,6 mA
Điện thế mao quản
20 V
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
100 ms
Bảng
B.5 - Các thông số khối phổ điển hình đối với axit xyanuric
Thông
số
Bẫy
ion tuyến tính LTQ-XL
Kiểu ion hóa
Ion hóa phun điện tử (ESI)
Điện thế dòng phun
- 4 kV
Chiều phân cực
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Nhiệt độ ống chuyển
400 oC
Khí
Khí mang: 60 đơn vị tùy ý
Khí bổ trợ: 20 đơn vị tùy ý
Khí làm sạch: 0
Dòng điện phun
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Điện thế mao quản
- 14 V
Thời gian bơm mẫu tối đa
100 ms
Bảng
B.6 - Các phản ứng chuyển khối xảy ra trong bẫy ion đối với phân tích melamine,
axit xyanuric và các chất chuẩn nội tương ứng
Chất
phân tích
Phản
ứng chuyển khối (m/z)a:
Melamine
127,1
® 85,1 (24)
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
133,1
® 89,1 (24)
Axit xyanuric
128,0
® 85,0 (24)
Axit xyanuric đánh dấu (13C3H315N3O3)
(IS)
134,0
® 88,9 (24)
a Năng lượng va chạm,
đo bằng electron vôn, được đưa ra trong dấu ngoặc đơn
B.10 Tính và biểu thị kết quả
B.10.1 Tính kết quả
CHÚ THÍCH: Đường chuẩn có dạng:
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Trong đó:
a
là tỉ lệ diện tích;
b là độ dốc;
w là phần khối lượng;
a là hệ số tự do.
Tính hàm lượng chất cần phân tích, wa,
bằng miligam trên kilogam (nếu chất phân tích là melamine: wa
= wm; chất phân tích là axit xyanuric wa = wc)
theo công thức sau:
Trong đó:
a
là tỉ lệ diện tích peak của chất phân tích và diện tích peak của chất chuẩn nội
(IS) sau khi phân tích bằng LC/MS;
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
b là độ dốc;
m là khối lượng của phần mẫu
thử (B.9.1), tính bằng gam (g).
B.10.2 Biểu thị kết quả
Biểu thị kết quả phân tích đến hai
chữ số thập phân.
B.11 Các đặc tính hiệu năng
B.11.2 Độ tuyến tính
Đường chuẩn melamine tuyến tính
trong khoảng từ 0 mg/kg đến 5 mg/kg (hàm lượng tương đương trong mẫu). Tương tự
với axit xyanuric là từ 0 mg/kg đến 7 mg/kg (hàm lượng tương đương trong mẫu).
B.11.2 Độ thu hồi
Tổng số có 16 mẫu thức ăn công thức
từ sữa dành cho trẻ sơ sinh đã được thêm melamine và axit xyanuric với các mức
gấp 0,1; 0,5; 1 và 1,5 lần mức tối đa (ML).
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
B.11.3 Giới hạn phát hiện (LOD)
Giới hạn phát hiện (tỉ lệ tín hiệu
trên nhiễu bằng 3) của melamine trong thức ăn công thức từ sữa dành cho trẻ sơ
sinh là 0,08 mg/kg và trong sữa bò là 0,07 mg/kg.
Giới hạn phát hiện của axit
xyanuric trong thức ăn công thức từ sữa dành cho trẻ sơ sinh là 0,10 mg/kg và
trong sữa bò 0,07 mg/kg.
B.11.4 Giới hạn định lượng (LOQ)
Giới hạn định lượng (mức thấp nhất
đã được xác nhận giá trị sử dụng) của melamine trong thức ăn công thức từ sữa
dành cho trẻ sơ sinh là 0,11 mg/kg và trong sữa bò là 0,10 mg/kg.
Giới hạn định lượng của melamine
trong thức ăn công thức từ sữa dành cho trẻ sơ sinh là 0,13 mg/kg và trong sữa
bò 0,10 mg/kg.
B.11.5 Giới hạn quyết định và
khả năng phát hiện melamine và axit xyanuric trong thức ăn công thức từ sữa
dành cho trẻ sơ sinh và trong sữa bò
Giả thiết giới hạn tối đa (ML) là 1
mg/kg trong thức ăn công thức từ sữa dành cho trẻ sơ sinh, giới hạn quyết định,
wCCa , và khả
năng phát hiện, wCCb
, được tính bằng cách thêm chuẩn vào 20 mẫu thức ăn công thức từ sữa dành cho
trẻ sơ sinh ở giới hạn tối đa 1 mg/kg, cho kết quả nêu trong a) và b):
a) Đối với melamine:
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
b) Đối với axit xyanuric:
wCCa = 1,11 mg/kg; wCCb = 1,19 mg/kg.
CẢNH BÁO: Các giá trị trên thu
được trong các điều kiện lặp lại và cần được kiểm tra độ tái lập trước khi sử
dụng các giá trị này.
B.11.6 Độ chụm
B.11.6.1 Độ lặp lại
Độ lặp lại điển hình thu được từ
cùng một người phân tích trong cùng một phòng thử nghiệm, sử dụng phương pháp
này là:
a) Đối với melamine:
8 % nằm ngoài dải hàm lượng từ
0,5 mg/kg đến 1,5 mg/kg;
b) Đối với axit xyanuric:
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
CHÚ THÍCH: Các giá trị này được
tính theo hệ số biến thiên độ lặp lại, CV,r, cho một dãy các phân
tích. Ba dãy phân tích được tiến hành ở các mức 0,5 mg/kg, 1 mg/kg và 1,5
mg/kg. Trong ba trường hợp này, giá trị CV,r cho mỗi dãy là 8 % đối
với chất phân tích là melamine và 9 % đối với chất phân tích là axit xyanuric.
B.11.6.2 Độ tái lập
Chưa xác định.
B.12 Sắc kí đồ của mẫu
Xem Hình B.1 và Hình B.2.
Hình
B.1 - Sắc kí đồ chạy LC-MS/MS của melamine (MEL) từ dịch chiết mẫu thức ăn công
thức từ sữa dành cho trẻ sơ sinh NIST với mức thêm chuẩn: MEL = 0,50 mg/kg
Hình
B.2 - Sắc kí đồ chạy LC-MS/MS của axit xyanuric (CA) trong mẫu thức ăn công
thức từ sữa dành cho trẻ sơ sinh ở mức thêm chuẩn: CA = 0,50 mg/kg
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Báo cáo thử nghiệm của phương pháp B
phải bao gồm ít nhất các thông tin sau:
a) tất cả thông tin cần thiết để
nhận dạng đầy đủ mẫu thử;
b) phương pháp lấy mẫu được sử
dụng, nếu biết;
c) phương pháp thử được sử dụng, viện
dẫn phụ lục này [Phụ lục B của TCVN 9048 (ISO/TS 15495)];
d) tất cả các chi tiết vận hành
không được quy định trong phụ lục này, hoặc được coi là tùy chọn, cùng với chi
tiết về bất kì sự cố nào có thể ảnh hưởng đến kết quả thử nghiệm;
e) kết quả thử nghiệm thu được;
f) kết quả cuối cùng thu được, nếu
kiểm tra độ lặp lại.
THƯ
MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
[2] TCVN 7150 (ISO 835), Dụng cụ
thí nghiệm bằng thủy tinh - Pipet chia độ
[3] TCVN 7153 (ISO 1042), Dụng
cụ thí nghiệm bằng thủy tinh - Bình định mức
[4] TCVN 8488 (ISO 4788), Dụng
cụ thí nghiệm bằng thủy tinh - Ống đong chia độ
[5] TCVN 6910-2 (ISO 5725-2), Độ
chính xác (độ đúng và độ chụm) của phương pháp đo và kết quả đo - Phần 2:
Phương pháp cơ bản xác định độ lặp lại và độ tái lập của phương pháp đo tiêu
chuẩn
[6] ISO 8655-2, Piston-operated
volumetric apparatus - Part 2: Piston pipettes
[7] ISO 11843-5, Capability of
detection - Part 5: Methodology in the linear and non-linear calibration cases
[8] Commission Decision
2002/657/EC, 2002, Official Journal of the European Communities, L221,
8-36, 12 August 2002, implementing Council Directive 96/23/EC concerning the
performance of analytical methods and the interpretation of results, last amended
by Commission Decision 2005/34 of 11 January 2005
[9] SANCO/2004/276rev4, Guidelines
for the implementation of decision 2002/657/EC, 2008-12
[10] DESMARCHELIER, A., GUILLAMON
CUADRA, M., DELATOUR, T., MOTTIER, P. Simultaneous quantitative
determination of melamine and axit xyanuric in cow's milk and milk-based infant
formula by liquid chromatography-electrospray ionization tandem mass
spectrometry. J. Agric. Food Chem. 2009, 57, pp. 7186-7193
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66