Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 6506-1:2015 về Sữa và sản phẩm sữa - Xác định hoạt độ phosphatasa kiềm

• Số hiệu: TCVN6506-1:2015
• Loại văn bản: Tiêu chuẩn Việt Nam
• Nơi ban hành: ***
• Người ký: ***
• Ngày ban hành: Năm 2015

K là tỷ lệ hiệu chuẩn của đường chuẩn đã thiết lập;

FC là giá trị huỳnh quang thu được bằng cách đo dung dịch hiệu chuẩn C(4.4.3) dựa vào dung dịch hiệu chuẩn A (4.4.1) đã đặt mức huỳnh quang về zero (xem 8.3);

FB là giá trị huỳnh quang thu được bằng cách đo dung dịch hiệu chuẩn B (4.4.2) dựa vào dung dịch hiệu chuẩn A (4.4.1) đã đặt mức huỳnh quang về zero (xem 8.3).

9.2  Tính kết quả

Tính hoạt độ phosphatase kiềm, A_p, theo công thức sau đây:

Trong đó

A_p

là hoạt độ phosphatase kiềm của mẫu thử (7.2.2 hoặc 7.2.3), tính bằng mili đơn vị hoạt tính enzym trên lit;

F_av

là lượng huỳnh quang trung bình do phần mẫu thử (8.4) phát ra trong 1 min, được đo dựa vào dung dịch hiệu chuẩn A (xem 8.3) tại thời điểm bắt đầu phút thứ hai đến cuối phút thứ ba;

C_B

...

...

...

f

là giá trị hệ số chuyển đổi tử đơn vị trên mililit sang mili đơn vị trên lít; f = 1 x 106; trong trường hợp mẫu thử được pha loãng để thu được hoạt độ nhỏ hơn 7 000 mU/l thì f = (hệ số pha loãng mẫu thử) x 10®

V

là thể tích phần mẫu thử, tính bằng mililit (ml).

9.3 Biểu thị kết quả

Biểu thị kết quả đến đơn vị số nguyên gần nhất của mili đơn vị.

10 Độ chụm

10.1 Phép thử liên phòng thử nghiệm

Các chi tiết của phép thử liên phòng thử nghiệm về độ chụm của phương pháp được đưa ra trong phụ lục A. Các giá trị giới hạn độ lặp lại và độ tái lập biểu thị ở mức xác suất 95 % và có thể không áp dụng được cho các dải nồng độ và các chất nền khác với các dải nồng độ và chất nền đã nêu.

...

...

...

Đối với các giá trị nhỏ hơn 125 mU/l thì chênh lệch tuyệt đối giữa hai kết quả thử độc lập riêng rẽ thu được khi sử dụng cùng một phương pháp thử, tiến hành trên cùng một nguyên liệu thử, trong cùng một phòng thử nghiệm, sử dụng cùng thiết bị, trong khoảng thời gian ngắn, không được quá 5 % các trường hợp lớn hơn 14 mU/l.

Đối với các giá trị bằng hoặc lớn hơn 125 mU/l nhưng nhỏ hơn 620 mU/l thì chênh lệch tuyệt đối giữa hai kết quả thử độc lập riêng rẽ thu được khi sử dụng cùng một phương pháp thử, tiến hành trên cùng một nguyên liệu thử, trong cùng một phòng thử nghiệm, sử dụng cùng thiết bị, trong khoảng thời gian ngắn, không được quá 5 % các trường hợp lớn hơn 12 % trung bình của hai kết quả.

10.2 Độ tái lập

Đối với các giá trị nhỏ hơn 125 mU/l thì chênh lệch tuyệt đối giữa hai kết quả thử riêng rẽ thu được khi áp dụng cùng một phương pháp, tiến hành trên cùng mẫu thử, thực hiện trong các phòng thử nghiệm khác nhau, do các kỹ thuật viên khác nhau thực hiện, sử dụng các thiết bị khác nhau, không được quá 5 % các trường hợp lớn hơn lớn hơn 23 mU/l.

Đối với các giá trị bằng hoặc lớn hơn 125 mU/l nhưng nhỏ hơn 620 mU/l thì chênh lệch tuyệt đối giữa hai kết quả thử riêng rẽ thu được khi áp dụng cùng một phương pháp, tiến hành trên cùng mẫu thử, thực hiện trong các phòng thử nghiệm khác nhau, do các kỹ thuật viên khác nhau thực hiện, sử dụng các thiết bị khác nhau, không được quá 5 % các trường hợp lớn hơn 24 % trung bình của hai kết quả.

11 Báo cáo thử nghiệm

Báo cáo thử nghiệm phải ghi rõ:

a) mọi thông tin cần thiết về nhận biết đầy đủ về mẫu thử;

b) phương pháp lấy mẫu đã sử dụng, nếu biết;

...

...

...

d) tất cả các điều kiện thao tác không quy định trong tiêu chuẩn này, hoặc được xem là tùy ý, cùng với mọi tình huống bất thường có thể ảnh hưởng đến kết quả.

e) kết quả thử nghiệm thu được hoặc nếu đáp ứng yêu cầu về độ lặp lại thì ghi kết quả cuối cùng thu được.

Phụ lục A

(Tham khảo)

Phép thử liên phòng thử nghiệm

Một phép thử liên phòng thử nghiệm bao gồm 13 phòng thử nghiệm từ bảy quốc gia (Mỹ, Anh, Pháp, Nauy, Italia, Hà lan, Thuy Sỹ) đã tham gia thử nghiệm theo TCVN 6910-1 (ISO 5725-1) và TCVN 6910-2 (ISO 5725-2) do phòng thử nghiệm QuadraChem và Frank Harding tổ chức, thực hiện trên bốn loại mẫu sữa bò (sữa nguyên chất, sữa tách một phần chất béo, sữa gầy và sữa bổ sung hương liệu), sữa dê nguyên chất và sữa cừu nguyên chất. Phép thử này đã kết thúc vào tháng 3 năm 2004.

CHÚ THÍCH 1: Chỉ có các kết quả của sữa bổ sung hương liệu, sữa cừu nguyên chất và sữa dê thực hiện trong tháng 3 n8m 2004 được báo cáo trong Phụ lục này. Các kết quả nghiên cứu trên sữa bò (sữa nguyên chất, sữa tách một phần chất béo, sữa gầy) được bổ sung vào năm 2008.

Một nghiên cứu cộng tác khác do ANSES và Marina Nicolas tổ chức, gồm có 19 phòng thử nghiệm của 18 quốc gia (Bắc Ailen, Pháp, ủc, Thụy Sĩ, Hungari, Ailen, NaUy, Đức, Phần Lan, Bỉ, Tây Ban Nha, Síp, Bungari, Bồ Đào Nha, New Zealand, Séc và Hy Lạp) đã thực hiện theo TCVN 6910-1 (ISO 5725-1) và TCVN 6910-2 (ISO 5725-2) trên sữa bò (nguyên chất, tách một phần chất béo và sữa gầy). Phép thử kết thúc tháng 1 năm 2008. Dữ liệu thu được sau này thay thế cho dữ liệu năm 2004.

...

...

...

Các kết quả thu được đã được phân tích thống kê theo TCVN 6910-1 (ISO 5725-1) và TCVN 6910-2 {ISO 5725-2) để cho độ chụm của phương pháp nêu trong Điều 10. Các mức enzym trung bình thực tế của mẫu nghiên cứu được nêu trong Bảng A.1. Bảng A.2 và Bảng A.3 đưa ra các giá trị giới hạn lặp lại và tái lập. Bảng A.4 và Bằng A.5 đưa ra các hệ số biến thiên về độ lặp lại và độ tái lập tương ứng.

CHÚ THÍCH 2: Chuẩn có thể được tạo ra từ các dữ liệu của các Bảng A.2, A.3, A.4 và A.5 để kiểm soát hiệu năng của phòng thử nghiệm.

Báo cáo toàn diện của nghiên cứu ban đầu được xuất bản trong Tài liệu tham khảo [5] và báo cáo nghiên cứu bổ sung được Phòng thí nghiệm chuẩn của Liên minh Châu Âu về sữa và các sản phẩm sữa, ANSES (EX-AFSSA), ủy ban An toàn Thực phẩm Pháp xuất bản.

Bảng A.1 - Giá trị enzym trung bình (mU/l) của mỗi mức nghiên cứu trong mỗi nền mẫu

Loại mẫu

Mức enzym đích

20

40

100

...

...

...

500

(mU/l)

(mU/l)

(mU/l)

(mU/l)

(mU/l)

Sữa bò nguyên chất

24

40

...

...

...

350

488

Sữa bò tách một phần chất béo

27

40

124

345

479

Sữa bò tách chất béo

...

...

...

42

96

349

449

Sữa bò bổ sung hương vị^a

-

54

108

436

...

...

...

Sữa cừu nguyên chất

31

47

110

428

608

Sữa dê nguyên chất

22

47

...

...

...

407

570

Sữa dê tách một phần chất béo

29

57

110

317

474

a Sữa bổ sung hương vị dâu

...

...

...

Loại mẫu

Mức enzym đích^b

20

40

100

350

500

(mU/l)

(mU/l)

...

...

...

(mU/l)

(mU/l)

Sữa bò nguyên chất

9

11

17

32

37

Sữa bò tách một phần chất béo

...

...

...

16

18

30

45

Sữa bò tách chất béo

17

11

12

25

...

...

...

Sữa bò bổ sung hương vị^a

-

20

16

59

59

Sữa cừu nguyên chất

10

16

...

...

...

97

100

Sữa dê nguyên chất

9

8

26

43

29

Sữa dê tách một phần chất béo

...

...

...

9

12

26

22

a Sữa bổ sung hương vị dâu;

b Các giá trị này liên quan đến giá trị trung bình nêu trong bảng A.1 và không phải giá trị đích

Bảng A.3 - Các giá trị giới hạn tái lập, R

Loại mẫu

Mức enzym đích^b

...

...

...

40

100

350

500

(mU/l)

(mU/l)

(mU/l)

(mU/l)

(mU/l)

...

...

...

-10

16

18

70

100

Sữa bò tách một phần chất béo

14

18

27

...

...

...

86

Sữa bò tách chất béo

28

21

19

86

75

Sữa bò bổ sung hương vị^a

-

...

...

...

35

131

169

Sữa cừu nguyên chất

17

20

47

170

233

...

...

...

11

21

29

128

88

Sữa dê tách một phần chất béo

18

26

20

...

...

...

62

a Sữa bổ sung hương vị dâu;

b Các giá trị này liên quan đến giá trị trung bình nêu trong bảng A.1 và không phải giá trị đích

Bảng A.4 - Hệ số biến thiên lặp lại, Cv,r

Các giá trị tính bằng phần trăm

Loại mẫu

Mức enzym đích^b

20

40

...

...

...

350

500

(mU/l)

(mU/l)

(mU/l)

(mU/l)

(mU/l)

Sữa bò nguyên chất

13

...

...

...

5

3

2

Sữa bò tách một phần chất béo

8

14

5

3

3

...

...

...

19

9

4

3

2

Sữa bò bổ sung hương vị^a

-

13

5

...

...

...

3

Sữa cừu nguyên chất

12

12

11

8

6

Sữa dê nguyên chất

14

...

...

...

7

4

2

Sữa dê tách một phần chất béo

10

6

4

3

2

...

...

...

b Các giá trị này liên quan đến giá trị trung bình nêu trong bảng A.1 và không phải giá trị đích

Bảng A.5 - Hệ số biến thiên tái lập, C_V.R,

Các giá trị tính bằng phần trăm

Loại mẫu

Mức enzym đích^b

20

40

100

350

...

...

...

(mU/l)

(mU/l)

(mU/l)

(mU/l)

(mU/l)

Sữa bò nguyên chất

15

14

5

...

...

...

7

Sữa bò tách một phần chất béo

18

16

8

8

6

Sữa bò tách chất béo

31

...

...

...

7

9

6

Sữa bò bổ sung hương vị^a

-

22

11

10

10

...

...

...

19

15

15

14

13

Sữa dê nguyên chất

17

15

8

...

...

...

5

Sữa dê tách một phần chất béo

22

16

6

7

5

a Sữa bổ sung hương vị dâu;

b Các giá trị này liên quan đến giá trị trung bình nêu trong bảng A.1 và không phải giá trị đích

...

...

...

THƯ MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO

[1 ] TCVN 6400 (ISO 707), Sữa và sản phẩm sữa - Hướng dẫn lấy mẫu.

[2] TCVN 6910-1:2001 (ISO 5725-1:1994), Độ chính xác (độ đúng và độ chụm) của phương pháp đo và kết quả đo - Phần 1: Nguyên tắc và định nghĩa chung.

[3] TCVN 6910-2:2001 (ISO 5725-2:1994), Độ chính xác (độ đúng và độ chụm) của phương pháp đo và kết quả đo - Phần 2: Phương pháp cơ bản xác định độ lặp lại và độ tái lập của phương pháp đo tiêu chuẩn.

[4] International Union of Biochemistry Nomenclature. JAMA. 1988, 260 (73).

[5] HARDING, F and GARRY, E. Collaborative evaluation of a fluorimetric method for measuring alkaline phosphatase activity in cow’s, sheep’s and goat’s milk. J. Food Prot. 2005, 68 (5) pp. 1047-53.

1) Các thuốc thử quy định trong 4.1 đến 4.5 và các dụng cụ quy định trong 5.1 đến 5.4 (trừ 5.3) có sẵn như Hệ thống thử nghiệm Fluorophos của Hãng Advanced istruments Inc., Two technology Way, Norwood, MA 02062, USA. Nhà sản xuất có thể thay đổi hình dạng bao gói do Hệ thống thử nghiệm Fluorophos cung cấp. Người sử dụng cần tham khảo các chỉ dẫn của nhà sản xuất về chuẩn bị thuốc thử nếu nó khác với quy định trong tiêu chuẩn này. Fluorophos và Fluoroyellow là nhãn hiệu thương mại đã đăng ký của Hãng Advanced Instruments Inc và là các ví dụ của sản phẩm thương mại phù hợp sẵn có. Thông tin này được đưa ra để tiện lợi cho người sử dụng tiêu chuẩn và Không ấn định phải sử dụng những sản phẩm này.

2) Các hướng dẫn kiểm soát và đánh giá hiệu năng của thiết bị là sản phẩm được áp dụng của hãng Advanced Instruments, Inc.,Two Technology Way, Norwood, Massachusetts 02062, USA. Thông tin này được đưa ra để tiện lợi cho người sử dụng tiêu chuẩn và Không ấn định phải sử dụng những sản phẩm này. Các sản phẩm tương tự có thể được sử dụng nếu có thể đưa ra các kết quả tương đương.