Thuộc tính
Nội dung
Tiếng Anh (English)
Văn bản gốc/PDF
Lược đồ
Liên quan hiệu lực
Liên quan nội dung
Thuộc tính
Tải về

Đang tải văn bản...

Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 8905:2011 về Nước rau quả - hàm lượng axit axetic bằng enzym - đo phổ NAD

Số hiệu:	TCVN8905:2011	Loại văn bản:	Tiêu chuẩn Việt Nam
Nơi ban hành:	***	Người ký:	***
Ngày ban hành:	Năm 2011	Ngày hiệu lực:
ICS:	67.080.01, 67.160.20	Tình trạng:	Đã biết

Dùng pipet cho vào cuvet	Mẫu trắng, ml	Mẫu thử, ml
Dung dịch đệm (5.15) Dung dịch NAD/CoA (5.16) Dung dịch ATP (5.17) Dung dịch mẫu thử (7.1) Nước	1,00 0,10 0,10 – 2,00	1,00 0,10 0,10 0,10 1,90
Trộn và đọc độ hấp thụ A₀ của dung dịch sau khoảng 3 min, sau đó thêm:
Dung dịch MDH/CS (5.18)	0,02	0,02
Trộn và đọc độ hấp thụ A₁ của dung dịch sau khoảng 2 min. Bắt đầu phản ứng bằng cách thêm:
Huyền phù ACS (5.19)	0,01	0,01
Trộn và sau khi phản ứng kết thúc (khoảng 15 min), đọc độ hấp thụ A₂ của mẫu trắng và mẫu thử. Nếu phản ứng chưa kết thúc sau 15 min, cứ sau 2 min tiếp tục đọc độ hấp thụ, cho đến khi độ hấp thụ tăng đều trong 10 min.

Chỉnh phản ứng "phụ" có thể xảy ra bằng cách ngoại suy độ hấp thụ về thời điểm thêm ACS (xem Phụ lục B).

Xác định chênh lệch độ hấp thụ đối với mẫu trắng và mẫu thử (A₁ – A₀) và (A₂ – A₀).

Với các phản ứng chỉ thị trước, không có mối quan hệ tuyến tính giữa chênh lệch độ hấp thụ đo được và nồng độ axit axetic.

Công thức sau dùng để tính ΔA_axit
axetic:

8. Tính kết quả

Hàm lượng axit axetic, ρ, biểu thị bằng miligam trên lít (mg/l) được tính theo công thức sau:

(6)

Trong đó:

...

Bạn phải đăng nhập hoặc đăng ký Thành Viên TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.

Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66

M là khối lượng phân tử của axit axetic (60,05 g/mol);

F là hệ số pha loãng dung dịch mẫu thử;

V₂ là thể tích của dung dịch mẫu thử, tính bằng mililit (ml);

d là chiều dài đường quang của cuvet, tính bằng centimet (cm);

ε là hệ số hấp thụ của NADH

tại bước sóng 340 nm, ε = 6,3 [l × mmol^–1 × cm^{– 1}];

tại bước sóng 365 nm, ε = 3,4 [l × mmol^{– 1} × cm^{– 1}];

tại bước sóng 334 nm, ε = 6,18 [l × mmol^{– 1} × cm^{– 1}].

Nếu không thay đổi các thể tích trong 7.2.2 và 7.2.3, thì tính hàm lượng axit axetic bằng miligam trên lít (mg/l) của mẫu theo công thức sau:

...

Khi sử dụng bộ kit thử phức hợp có bán sẵn trên thị trường, thì hệ số 1 940 trong công thức (7) nêu trên có thể thay đổi.

Trong phần tính kết quả, cần tính đến hệ số pha loãng và mối tương quan giữa giá trị với thể tích hoặc khối lượng. Nếu sản phẩm cô đặc đã được pha loãng đến nồng độ đơn thì ghi lại tỉ trọng tương đối của mẫu nồng độ đơn.

Tính hàm lượng axit axetic theo miligam trên lít đến số nguyên hoặc theo miligam trên kilogam, phụ thuộc vào việc chuẩn bị mẫu (7.1).

9. Độ chụm

Chi tiết về phép thử liên phòng thử nghiệm về độ chụm của phương pháp được đưa ra trong Phụ lục A. Các giá trị thu được từ phép thử liên phòng này có thể không áp dụng được cho các dải nồng độ và chất nền khác với dải nồng độ và chất nền nêu trong Phụ lục A.

9.1. Độ lặp lại

Chênh lệch tuyệt đối giữa hai kết quả thử riêng rẽ thu được khi sử dụng cùng phương pháp, tiến hành trên vật liệu thử giống hệt nhau, do một người thực hiện, sử dụng cùng thiết bị, trong một khoảng thời gian ngắn, không được quá 5 % các trường hợp vượt quá giá trị độ lặp lại r.

Giá trị độ lặp lại:

r = 19 mg/l.

...

Chênh lệch tuyệt đối giữa hai kết quả thử riêng rẽ thu được khi sử dụng cùng phương pháp, tiến hành thử trên vật liệu giống thử hệt nhau, trong các phòng thử nghiệm khác nhau, do những người khác nhau thực hiện, sử dụng các thiết bị khác nhau, không được quá 5 % các trường hợp vượt quá giá trị độ tái lập R.

Giá trị độ tái lập:

R = 49 mg/l.

10. Báo cáo thử nghiệm

Báo cáo thử nghiệm phải ghi rõ:

– mọi thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ về mẫu thử (loại mẫu, nguồn gốc của mẫu, tên gọi);

– viện dẫn tiêu chuẩn này;

– ngày và phương pháp lấy mẫu, nếu biết;

– ngày nhận mẫu;

...

– kết quả thử và đơn vị biểu thị kết quả;

– độ lặp lại, nếu được kiểm tra;

– bất kỳ điểm ngoại lệ nào quan sát được trong khi thực hiện phép thử;

– mọi thao tác không quy định trong phương pháp hoặc tùy chọn mà có thể ảnh hưởng đến kết quả.

PHỤ LỤC A

(Tham khảo)

Kết quả thống kê phép thử liên phòng thử nghiệm

Theo ISO 5725:1986*, các thông số sau đây đã được xác định trong một phép thử liên phòng thử nghiệm (Thư mục tài liệu tham khảo). Phép thử được tiến hành bởi Intermational Federal of Fruit Juice Producers (IFU), Paris, Pháp.

...

Số lượng phòng thử nghiệm tham gia:

Số lượng mẫu thử:

1991/1

1991/2

Bảng A.1

...

Số lượng phòng thử nghiệm còn lại sau khi trừ ngoại lệ

Số lượng ngoại lệ (phòng thử nghiệm) Số lượng kết quả được chấp nhận

...

–

Giá trị trung bình () (mg/l)

...

325

249

215

Độ lệch chuẩn lặp lại (s_r) (mg/l)

Độ lệch chuẩn tương đối lặp lại (RSD_r) (%)

7,65

3,0

8,28

2,6

...

2,1

5,11

2,4

Giới hạn lặp lại (r) (mg/l)

Độ lệch chuẩn tái lập (s_R) (mg/l)

...

18,69

7,4

23,62

7,3

11,69

4,7

15,55

7,2

Giới hạn tái lập (R) (mg/l)

...

Tên mẫu:

A – nước cà chua,

B – nectar anh đào,

C – nước táo,

D – nước cam.

...

(Tham khảo)

Thông tin về cách xử lí các phản ứng "phụ"

Các phản ứng "phụ" nói chung do tác dụng phụ của enzym, sự có mặt của các enzym khác trong chất nền mẫu thử, hoặc do tương tác của một hoặc một số thành phần của chất nền với thuốc thử của phản ứng enzym.

Trong phản ứng thông thường, độ hấp thụ thu được là giá trị không đổi sau khoảng thời gian xác định, thông thường từ 10 min đến 20 min, phụ thuộc vào tốc độ của phản ứng enzym cụ thể. Tuy nhiên, khi phản ứng xảy ra, mà độ hấp thụ không đạt được giá trị không đổi mà tăng đều theo thời gian và dạng phản ứng này được gọi chung là phản ứng "phụ".

Nếu có phản ứng "phụ" xuất hiện, thì độ hấp thụ của dung dịch phải được đo trong các khoảng thời gian cách đều (2 min đến 5 min) sau thời gian cần thiết để dung dịch đạt độ hấp thụ cuối cùng. Khi độ hấp thụ tăng theo tỉ lệ không đổi (dA/dt = hằng số), đọc từ 5 lần đến 6 lần và sau đó ngoại suy, dùng biểu đồ hoặc dùng phép tính, để thu được độ hấp thụ của dung dịch tại thời điểm cuối cùng khi enzym được thêm vào (T_o). Chênh lệch của độ hấp thụ ngoại suy tại thời điểm này (A_f – A_i) được sử dụng để tính nồng độ chất nền.

Hình B.1 – Phản ứng phụ

THƯ MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO

...

[2] Determination of acetic acid: Enzymatic method, No. 66,1996, Analyses [Collection] International Federation of Fruit Juice Producers. Loose-leaf edition, as of 1996. Zug: Swiss Fruit Union.

[3] Determination of acetic acid: Enzymatic method, Methods of biochemical analysis and food analysis using single reagents. Boehringer Mannheim.

* ISO 5725:1986 hiện nay đã hủy, được thay bằng ISO 5725 (gồm có 6 phần) và đã được biên soạn thành bộ TCVN 6910 (gồm có 6 phần).