Thuộc tính
Nội dung
Tiếng Anh (English)
Văn bản gốc/PDF
Lược đồ
Liên quan hiệu lực
Liên quan nội dung
Thuộc tính
Tải về
Các bản dự thảo

Đang tải văn bản...

Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 7786:2007 Sữa và sản phẩm sữa - Xác định hàm lượng aflatoxin M1

Số hiệu:	TCVN7786:2007	Loại văn bản:	Tiêu chuẩn Việt Nam
Nơi ban hành:	***	Người ký:	***
Ngày ban hành:	Năm 2007	Ngày hiệu lực:
ICS:	67.100.10	Tình trạng:	Đã biết

Thông số

Yêu cầu

Kháng thể

Nguồn

Vô tính đơn dòng hoặc vô tính đa dòng

Kháng nguyên đánh dấu

Enzym đánh dấu

Kiểu

Peroxidaza cải ngựa

Aflatoxin B₁, hoặc peroxidaza cải ngựa-oxim-M₁

Dạng phân tích

Nguyên tắc hóa học miễn dịch

Kiểu

Thời gian

Phân tích enzym cạnh tranh

Phân tích vi đĩa 96 giếng

3 h đến 4 h

Độ nhạy của phép phân tích

Nồng độ AFM₁ cho độ hấp thụ tương đối ^a:

80 %

50 %

< 20 ng/l

< 50 ng/l

Tính đặc thù của phép phân tích

Khả năng phản ứng chéo với aflatoxin M₁

Khả năng phản ứng chéo với các aflatoxin khác (xuất hiện trong sữa)

100 %

< 20 %

Thiết kế thống kê

Các chuẩn

- các bản sao

- các độ pha loãng

- dải nồng độ (ng/ml)

Các mẫu

- các bản sao

- các độ pha loãng

2 hoặc nhiều hơn

6 hoặc nhiều hơn kể cả chuẩn zero

từ 5 ng/l đến 50 ng/l hoặc khoảng rộng hơn

2 hoặc nhiều hơn

nếu cần

Tính toán

Sự trùng khớp đường chuẩn

Gần với trục bậc ba, mô hình logic bốn thông số, hồi qui tuyến tính (chỉ phần tuyến tính của đường chuẩn)^b

Độ chụm

Các chuẩn

- hệ số biến thiên lặp lại của độ hấp thụ tương đối

- hệ số biến thiên tái lập của độ hấp thụ tương đối

Các mẫu

- giới hạn lặp lại (ng/kg)

- giới hạn tái lập (ng/kg)

- giới hạn phát hiện (ng/kg)

- giới hạn định lượng (ng/kg)

< 10 %

< 20 %

< 100 ng/kg ở mức 200 ng/kg (sữa bột)

< 150 ng/kg ở mức 200 ng/kg (sữa bột)

< 5 ng/kg (sữa)

< 10 ng/kg (sữa)

Chuẩn bị mẫu

Loại chất béo bằng ly tâm; hoàn nguyên sữa bột (thành dung dịch)

Độ thu hồi

> 80 % đối với dải từ 10 ng/kg đến 50 ng/kg (sữa)^c

^a Độ hấp thụ chuẩn hoặc mẫu/độ hấp thụ chuẩn zero x 100

^b Xem các thông số thống kê trong 6.3

^c Hiệu chỉnh độ thu hồi thương không cần thiết

4. Độ nhạy

Độ nhạy của bất kỳ phép phân tích miễn dịch nào cũng đều liên quan trực tiếp đến ái lực của kháng thể và có thể tính được nếu biết trước hằng số cân bằng (xem [2]). Vì phản ứng kháng nguyên-kháng thể có thể được mô tả bằng cách sử dụng phản ứng động học cũng như công thức nhiệt động học, nên thời gian và nhiệt độ cũng có ảnh hưởng đến độ nhạy của phép phân tích.

5. Tính đặc thù

Sau độ nhạy thì tính đặc thù khi thực hiện phép phân tích là quan trọng đối với phương pháp hóa học miễn dịch. Về nguyên tắc, phản ứng đặc thù trong miễn dịch học có thể xác định như sau: khi có mặt các phân tử khác nhau, thì các kháng thể đặc thù chỉ liên kết với một dạng phân tử.

Khả năng hình thành liên kết "sai" xác định tính đặc thù của phản ứng. Nói cách khác, tính đặc thù được xác định bằng cách đánh dấu ba chiều của kháng nguyên và kháng thể cũng như bằng số lượng tương tác phân tử xảy ra giữa hai phân tử. Về tính đặc thù đòi hỏi cần xem xét cả cấu trúc kháng nguyên và tính đồng nhất hoặc không đồng nhất của các kháng thể.

Việc chuẩn bị kháng thể là đồng nhất nếu các kháng thể chỉ kết hợp với một và cùng một epitop, cho dù với ái lực khác nhau. Điều kiện này được thực hiện bởi các kháng thể vô tính đơn dòng, nhưng cũng có thể bởi huyết thanh miễn dịch dựa theo các hợp chất có khối lượng phân tử thấp (haptenes). Mặt khác, việc chuẩn bị kháng thể là không đồng nhất nếu nó chứa các quần thể kháng thể khác nhau đặc trưng cho các epitop khác nhau.

Về cơ sở phân tử khả năng phản ứng chéo "thật sự" diễn tả trường hợp mà trong đó có ít nhất hai kháng nguyên khác nhau trên cùng một vị trí cạnh tranh liên kết kháng thể. Phần lớn khả năng phản ứng chéo được quan sát trong các phép thử cạnh tranh sử dụng các kháng thể vô tính đơn dòng hoặc kháng huyết thanh đối với các hợp chất phân tử thấp. Trong thực tiễn, điều này có nghĩa là nồng độ đủ cao của các chất phản ứng chéo thực sự cho kết quả giống như các chất "thích hợp" trong phân tích cạnh tranh.

Điều quan trọng cần chú ý là các ảnh hưởng không đặc thù lên phép phân tích (ví dụ: các ảnh hưởng của chất nền) thường không thể phân biệt được với ảnh hưởng đặc thù của các chất phản ứng chéo. Trong cả hai trường hợp, độ nhạy của phép phân tích là như nhau và thu được kết quả dương tính giả hoặc âm tính giả. Tuy nhiên, do nguyên lý phân tích miễn dịch, nên các kết quả âm tính giả là không giống như trong phép phân tích cạnh tranh.

6. Thông số thống kê

...

Bạn phải đăng nhập hoặc đăng ký Thành Viên TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.

Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66

Nói về các thông số thống kê ảnh hưởng đến "chất lượng" của phân tích miễn dịch thì cần chú ý rằng các phương pháp thống kê thông thường để xác định giới hạn phát hiện, giới hạn định lượng, khả năng tái lập, … cũng được áp dụng cho phép phân tích miễn dịch. Tuy nhiên, một vài thông số ảnh hưởng đến độ chụm trong phép phân tích (độ lặp lại) và độ đúng của các kết quả phân tích miễn dịch điển hình cho phân tích miễn dịch enzym dùng các vi đĩa 96 giếng.

Đối với phép phân tích thường nhật, các phương pháp này thường qui định số lượng giếng để chuẩn bị đường chuẩn và số lượng cố định về phân tích kép các chất chuẩn và các mẫu, cũng như số lượng dung dịch pha loãng đối với từng mẫu.

6.2. Độ chụm

Trong 6.1 có hai yếu tố ảnh hưởng đến độ chụm ước tính phạm vi lớn. Yếu tố thứ nhất là vị trí các giá trị độ hấp thụ quan sát được trên đường hiệu chuẩn. Yếu tố thứ hai là số lượng phép thử kép được sử dụng cho mỗi mẫu thử.

Do hình dạng không tuyến tính của đường hiệu chuẩn, mà số đọc của độ hấp thụ gần với 50 % liên kết tương đối cho nhiều kết quả chính xác hơn các số đọc gần với 100 % và 0 % liên kết không an toàn. Đối với các mục đích thực tế, các kết quả cần phải dao động từ 20 % đến 80 % "liên kết không hoàn toàn". Phép đo sẽ trở nên chính xác hơn nếu tăng số lượng phép thử kép như với bất kỳ phương pháp thử nào khác.

6.3. Độ chính xác

Độ chính xác dự đoán chủ yếu bị ảnh hưởng bởi độ chính xác của đường hiệu chuẩn. Tuy nhiên, thường không biết trước một cách chính xác đường hiệu chuẩn nhưng được dự đoán từ các số đọc độ hấp thụ của các nồng độ chuẩn trên đĩa. Do đó phương pháp trùng khớp đường chuẩn cũng như số giá trị đường hiệu chuẩn được sử dụng và nồng độ thực của các chất chuẩn xác định độ chính xác của đường hiệu chuẩn. Trong các phương pháp toán học được sử dụng để mô tả đường chuẩn phân tích miễn dịch, chỉ có mô hình logic bốn thông số và gần trục bậc ba được sử dụng để phân tích miễn dịch enzym (xem [2]). Cả hai phương pháp cho các kết quả có thể so sánh được và ít nhất một trong hai phương pháp đó được áp dụng trong nhiều chương trình sẵn có để xử lý số liệu phân tích miễn dịch.

7. Kết luận

Cho dù chất lượng tổng thể của phép phân tích miễn dịch là một hàm số phức hợp, mà khó có thể mô tả, một vài yếu tố ảnh hưởng đến các thông số chất lượng phân tích chính được thống kê trong bảng 2 theo cách đơn giản.

...

Yếu tố

Thông số chất lượng phân tích

Độ nhạy

Tính đặc thù

Độ chụm

Độ chính xác

Hóa học miễn dịch

- nguyên tắc của phương pháp

Kháng thể

...

- tính đặc thù

Thuốc thử đánh dấu

- hoạt tính

- kiểu

Có

Không

...

Có

Không

Có

Không

...

Không

...

Các chuẩn

- phép thử kép

- độ pha loãng

Các mẫu

- phép thử kép

- độ pha loãng

Trùng khớp đường chuẩn

...

Không

...

Có

Không

Có

Không

Có

...

Chuẩn bị mẫu

Có

...

THƯ MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO

[1] MARTLBAUER E. Basic principles which determine the quality of immunoassays. IDF Special Issue No. 9302, 1983, p. 137.

[2] RODBARD D., MUNSON P.J and DE LEAN A. Improved curve-fiiting, paralelism testing, characterization of sensitivity and specificity, validation and optimization for radioligand assays. In: Radioimmunoassay and ralated procedures in medicine. Vol. 1, 1977, pp. 469-514. International Atomic Energy Agency, Vienna, 1978.