Điều
kiện
|
Chi
tiết
|
Pha động
|
Nước dùng cho HPLC đã khử khí
|
Nhiệt độ detector
|
35 oC
|
Nhiệt độ bảo vệ
|
Nhiệt độ môi trường
|
Nhiệt độ cột
|
85 oC
|
Tốc độ dòng
|
0,6 ml/min
|
Thể tích tiêm
|
20 ml
|
Thời gian vận hành
|
15 min
|
Thời gian lưu D(+)-melezitoza
|
9 min ± 1 min
|
Thời gian lưu lactoza
|
11 min ± 1 min
|
Chọn cẩn thận các thông số thu được
và thông số tích phân như độ nhạy, hệ số thang đo, hằng số thời gian, chiều
rộng pic và ngưỡng. Xem Hình 1 về một ví dụ của sắc ký đồ.
Đo hiệu quả cột, còn được gọi là số
đếm lý thuyết, N, ít nhất là một tuần một lần. Giảm N là có liên quan đến
khoảng rộng dải pic thường là do hiệu năng của cột đã bị giảm. Tính N theo công
thức sau đây:
Trong đó
tR là thời gian lưu của
pic lactoza, tính bằng phút (min);
w là chiều rộng pic lactoza, tương
đương với chênh lệch thời gian tính bằng phút tại 50 % chiều cao pic.
Khi số đếm lý thuyết giảm nhiều hơn
25 % so với phép đo ban đầu, thì nên thay cột.
CHÚ THÍCH: Trong nhiều trường hợp,
tính năng của cột đã sử dụng có hiệu quả thấp có thể được phục hồi lại trạng
thái ban đầu bằng cách rửa cột bằng dung môi phục hồi nêu trong tài liệu của
nhà sản xuất cột.
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
M D(+)-melezitoza
L a-lactoza
tR thời gian lưu
U chênh lệch điện thế
Hình
1 - Ví dụ của sắc ký đồ về mẫu sữa nguyên liệu chứa chất chuẩn nội
10. Tính và
biểu thị kết quả
10.1. Tính toán
Máy tính sẽ thực hiện các phép tính
sau đây:
Thứ nhất, phần mềm máy tính (6.8)
sẽ tạo ra đồ thị, vẽ mối liên quan giữa tỷ lệ diện tích pic chuẩn lactoza, As
và chất chuẩn nội, Ais, nhân với nồng độ chất chuẩn nội, Cis,
nghĩa là (As/Ais) x cis với nồng độ lactoza cl.
Đường này là tuyến tính đi qua tọa độ.
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
10.2. Biểu thị kết quả
Biểu thị kết quả chính xác đến ba
chữ số thập phân.
11. Độ chụm
11.1. Phép thử liên phòng thử
nghiệm
Các chi tiết của phép thử liên
phòng thử nghiệm về độ chụm của phương pháp được nêu trong Phụ lục A.
Các giá trị thu được từ phép thử
liên phòng này có thể không áp dụng được cho các dải nồng độ và các chất nền
khác với các dải nồng độ và các chất nền đã nêu.
11.2. Độ lặp lại
Chênh lệch tuyệt đối giữa hai kết
quả thử nghiệm riêng rẽ độc lập, thu được khi sử dụng cùng phương pháp, tiến
hành trên vật liệu thử giống hệt nhau trong một phòng thử nghiệm, do một người
thực hiện sử dụng cùng thiết bị, trong một khoảng thời gian ngắn, không quá 5 %
các trường hợp lớn hơn:
a) sữa dạng lỏng
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
b) cream
0,06 %
c) sữa bột
0,37 %
11.3. Độ tái lập
Chênh lệch tuyệt đối giữa hai kết
quả thử nghiệm riêng rẽ, thu được khi sử dụng cùng phương pháp, tiến hành thử
trên vật liệu giống hệt nhau trong các phòng thử nghiệm khác nhau, do các người
khác nhau thực hiện, sử dụng các thiết bị khác nhau, không quá 5 % các trường
hợp lớn hơn:
a) sữa dạng lỏng
0,13 %
b) cream
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
c) sữa bột
2,94 %
12. Báo cáo
thử nghiệm
Báo cáo thử nghiệm phải ghi rõ:
a) mọi thông tin cần thiết để nhận
biết đầy đủ về mẫu thử;
b) phương pháp lấy mẫu đã sử dụng,
nếu biết;
c) phương pháp thử đã dùng, viện
dẫn tiêu chuẩn này;
d) mọi chi tiết thao tác không quy
định trong tiêu chuẩn này, hoặc tùy ý lựa chọn cùng với các chi tiết bất thường
nào khác có thể ảnh hưởng đến kết quả;
e) kết quả thử nghiệm thu được và
nếu đáp ứng được các yêu cầu về độ lặp lại thì nêu kết quả cuối cùng thu được.
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Phụ lục A
(Tham
khảo)
Kết quả của phép thử liên phòng thử nghiệm
Một phép thử cộng tác quốc tế gồm
chín phòng thử nghiệm từ năm quốc gia tham gia, tiến hành trên 18 mẫu (sáu mẫu
sữa nước, sáu mẫu cream và sáu mẫu sữa bột), tất cả đều được lấy từ ba nhà máy
sản xuất ở Québec, Canada. Phép thử này do Programme des Analysis des
Troupealux Laitiers du Quebec tổ chức.
Các kết quả thu được đã được phân tích
thống kê theo TCVN 6910-1 (ISO 5725-1) và TCVN 6910-2 (ISO 5725-2) và đưa ra dữ
liệu về độ chụm như trong các Bảng từ A.1 đến A.3. Tất cả các giá trị được biểu
thị bằng phần trăm, trừ các hệ số biến thiên được biểu thị bằng phần khối
lượng.
Bảng
A.1 - Các kết quả đối với sữa dạng lỏng
Mẫu
1
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
3
4
5
6
Trung
bình
Số lượng phòng thử nghiệm còn lại
sau khi trừ ngoại lệ
8
8
7
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
7
8
Trung bình khối lượng lactoza, %
4,530
4,466
4,718
4,644
4,364
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Độ lệch chuẩn lặp lại, sr,
%
0,025
0,023
0,017
0,035
0,011
0,018
0,022
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
0,071
0,065
0,047
0,098
0,031
0,051
0,061
Hệ số biến thiên lặp lại, %
0,559
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
0,360
0,751
0,258
0,397
0,474
Độ lệch chuẩn tái lập, SR,
%
0,042
0,056
0,044
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
0,030
0,058
0,046
Giới hạn tái lập R = 2,8 SR,
%
0,118
0,156
0,123
0,128
0,085
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
0,129
Hệ số biến thiên tái lập, %
0,931
1,249
0,929
0,986
0,692
1,273
1,010
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Mẫu
1
2
3
4
5
6
Trung
bình
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
8
8
7
8
6
6
Trung bình khối lượng lactoza, %
1,461
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
3,686
2,886
3,256
3,103
Độ lệch chuẩn lặp lại, sr,
%
0,030
0,015
0,025
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
0,009
0,007
0,020
Giới hạn lặp lại r =2,8 sr,
%
0,084
0,041
0,069
0,090
0,026
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
0,055
Hệ số biến thiên lặp lại, %
2,066
0,381
0,672
1,117
0,283
0,224
0,790
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
0,171
0,108
0,136
0,118
0,134
0,136
0,134
Giới hạn tái lập R = 2,8 SR,
%
0,479
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
0,380
0,331
0,375
0,382
0,375
Hệ số biến thiên tái lập, %
11,721
2,824
3,686
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
4,113
4,397
5,139
Bảng
A.3 - Các kết quả đối với sữa bột
Mẫu
1
2
3
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
5
6
Trung
bình
Số lượng phòng thử nghiệm còn lại
sau khi trừ ngoại lệ a
6
7
7
6
6
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Trung bình khối lượng lactoza, %
48,721
36,348
35,087
52,306
46,460
48,171
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
0,110
0,040
0,111
0,260
0,157
0,118
0,133
Giới hạn lặp lại r =2,8 sr,
%
0,308
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
0,132
0,729
0,440
0,331
0,372
Hệ số biến thiên lặp lại, %
0,226
0,109
0,138
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
0,339
0,245
0,289
Độ lệch chuẩn tái lập, SR,
%
1,130
0,801
0,773
0,709
1,461
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
1,049
Giới hạn tái lập R = 2,8 SR,
%
3,165
2,241
2,1663
1,986
4,091
3,974
2,937
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
2,322
2,202
2,202
1,356
3,456
2,946
2,362
a Chỉ có bảy phòng thử
nghiệm cung cấp các kết quả và về phép thử trên sữa bột
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
[1] TCVN 6400 (ISO 707), Sữa và sản
phẩm sữa - Hướng dẫn lấy mẫu.
[2] TCVN 6910-1 (ISO 5725-1), Độ
chính xác (độ đúng và độ chụm) của phương pháp đo và kết quả đo - Phần 1:
Nguyên tắc và định nghĩa chung.
[3] TCVN 6910-2 (ISO 5725-2), Độ
chính xác (độ đúng và độ chụm) của phương pháp đo và kết quả đo - Phần 2:
Phương pháp cơ bản xác định độ lặp lại và độ tái lập của phương pháp đo tiêu
chuẩn.
[4] BIGGS D.A., SZIJARTO, L.Method
for routine determination of lactose in milk, J. Dairy Sci. 1963, 46, pp.
1196-200
[5] HARVEY, J.A high performance
liquid chromatography method for lactose determination in milk. Austral, J.
Dairy Technol. 1988, 43, pp. 19-20.
[6] BRONS, C, OLIEMAN, C. Study of
the high-performance liquid chromatograpic separation of reducing sugars,
applied to the determination of lactose in milk. J. Chromatogr. 1983, 259, pp.
79-86
[7] KOOPS, J., OLIEMAN, C. Routine
testing of farm milk with the Milko-Scan 203.3. Comparative evaluation of
polarimetry, HPLC, enzymatic assay and reductometry for the determination of
lactose. Calibration for infra-red-analysis of lactose. Calculation of total
solids from infra-red measurements, Neth. Milk Dairy J.1985, 39, pp. 89-106.