TIÊU CHUẨN VIỆT
NAM
TCVN
5282:1990
THỨC
ĂN CHĂN NUÔI
PHƯƠNG
PHÁP XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG METIONIN
Animal feeding stuffs
Method for
determination of metionin content
1.
Nguyên tắc của phương pháp:
Phương pháp dựa trên
việc oxy hoá metionin bằng hỗn hợp hyđro peoxyt và axit foócmic để chuyển về
dạng bền vững metionin sunfon và tách nó trên cột sắc ký trao đổi ion sau khi
thủy phân bằng axit clohyđric 6 mol/l. Cường độ màu của phức tạo thành trong
phản ứng với thuốc thử ninhydrin tỷ lệ thuận với hàm lượng axit amin có trong
dung dịch.
2.
Lấy mẫu:
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
3.
Dụng cụ và hoá chất:
3.1. Dụng cụ:
- Máy phân tích axit
amin;
- Máy nghiền mẫu;
- Máy cắt mẫu thực
vật;
- Rây với đường kính
lỗ rây 1mm theo TCVN 2230 - 77;
- Nồi hấp;
- Tủ sấy tự ngắt có
nhiệt độ 110 ± 20C;
- Cân phân tích có độ
chính xác đến 0,0002 g;
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
- Bộ định lượng dung
tích 10 ml;
- Máy đo pH ;
- Ampun thủy tinh có
chỗ thắt, dung tích 20 ml;
- ống nghiệm thủy
tinh dung tích 20 ml;
- Bình định mức dung
tích 50 ; 100 ; 1000 ml;
- Phễu thủy tinh
đường kính 2 - 3 cm;
- Bát sứ để làm bay
hơi;
- Pipet chia độ dung
tích 1 ; 2 ; 5 ; 10 ml;
- Đũa thủy tinh;
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
3.2. Hoá chất :
- Bộ thuốc thử cho
máy phân tích axit amin ;
- Axit amin chuẩn (-
metioninsunfon) ;
- Axit clohydric đặc
(d = 1,19g/ml), THKH;
- Cồn etylíc;
- Natri xitrat, TKPT
hay TKHH;
- Phenol, TKPT;
- Natri hydroxyt,
TKHH;
- Hydro peoxyt, TKPT;
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
- Nước cất hay nước
có độ tinh khiết tương đương;
4.
Chuẩn bị thử :
4.1. Chuẩn bị mẫu để
thử :
Mẫu cỏ khô, thức ăn
ủ, thức ăn xanh được cắt thành từng đoạn dài 1 - 3 cm. Thức ăn củ quả được cắt
thành lát mỏng có độ dày 0,8 cm; Đảo đều mẫu đã cắt trên mảnh nilon và từ những
chỗ khác nhau lấy một lượng mẫu để sao cho sau khi sấy có được khoảng 100g. Sấy
mẫu trong tủ sấy ở nhiệt độ 60 - 650C đến khối lượng không đổi
(trạng thái khô không khí). Sau khi sấy, nghiền mẫu và sàng qua dây có đường
kính lỗ rây là 1mm. Phần còn lại không lọt qua rây được cắt bằng kéo hoặc
nghiền lại trong cối sứ và sau đó đem trộn đều với phần đã lọt qua rây.
Mẫu thức ăn hỗn hợp,
hạt ngũ cốc, khô dầu, bột từ thân lá cây xanh được nghiền nhỏ không cần sấy
trước và sàng qua rây.
Những mẫu đã chuẩn bị
được bảo quản trong bình thủy tinh hay bình polyetylen có nút đậy kín, để ở nơi
khô ráo.
4.2. Chuẩn bị hỗn hợp
oxy hoá.
Rót 9ml axit foomic
vào 1ml hydro peoxyt. Dung dịch được chuẩn bị trong ngày tiến hành phân tích.
4.3. Chuẩn bị dung
dịch axit clohydric 6 mol/l.
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
4.4. Chuẩn bị dung
dịch đệm có pH = 2,2.
Hoà tan 19,6 natri
xitrat trong 200 - 300ml nước cất, thêm vào đó 16,6ml axit clohydric đặc, 1g
phenol và đưa thể tích đến 1000ml bằng nước cất. Nồng độ ion hydro được kiểm
tra trên máy đo pH và khi cần thiết, điều chỉnh pH bằng dung dịch NaOH 50% hay
axit clohydric đặc.
4.5. Chuẩn bị dung
dịch chuẩn metionin sunfon.
Dung dịch gốc metionin sunfon được chuẩn bị
bằng cách hoà tan 181 mg metionin sunfon trong 100 ml dung dịch axit clohydric
0,1mol/l (3,1 ml axit clohydric đặc hòa tan vào 1000 ml nước cất).
Dung dịch chuẩn sử
dụng khi phân tích của axit amin này được tiến hành như sau: pha loãng 25 ml
dung dịch gốc metionin sunfon đến thể tích 100 ml bằng dung dịch axit clohydric
0,1mol/1.1ml dung dịch này chứa 2,5 mmol
metionin sunfon .
5.
Tiến hành thử.
5.1. Oxy hoá những
axit amin có lưu huỳnh (metionin và xistin) trong mẫu thử.
Cân 100 mg mẫu ở trạng thái khô không khí với
độ chính xác đến 0,0002g cho vào bát sứ nhỏ, đổ vào đó 5 ml hỗn hợp oxy hoá vừa
mới chuẩn bị xong và tiến hành làm bay hơi trên nồi chưng cách thủy, thỉnh
thoảng khuấy mẫu.
5.2. Thủy phân mẫu đã
oxy hoá.
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Rót vào phần cặn khô
nhận được (theo mục 5.1) 10 ml dung dịch axit clohydric 6mol/lít và chuyển toàn
bộ vào ampun thủy tinh, thêm 2 - 3 giọt cồn etylic. Hàn ampun tại chỗ thắt trên
ngọn lửa ga, sau đó đặt vào giá và cho vào tủ sấy đã được đốt nóng trước có
nhiệt độ 1100C. Tiến hành thủy phân trong 16 giờ.
5.2.2. Thủy phân
trong nồi hấp.
Rót vào phần cặn khô
thu được (theo mục 5.1) 10 ml dung dịch axit clohydric 6mol/lít và chuyển toàn
bộ vào ống nghiệm có dung tích 20ml, thêm vào đó 2 - 3 giọt cồn etylic, đậy ống
nghiệm bằng nút thủy tinh hay phễu nhỏ để tránh sự bắn toé axit trong quá trình
thủy phân. Đặt ống nghiệm vào nồi hấp và thực hiện thủy phân trong 3 giờ ở
nhiệt độ 1370C và áp suất 25 . 104 Pa.
5.3. Sau khi kết thúc
thủy phân,
ống nghiệm (hay ampun) được làm lạnh đến nhiệt độ phòng, lắc đều và lọc qua
phễu thủy tinh với giấy lọc không tro. Phần nước lọc được cho vào bát sứ nhỏ,
tráng ống nghiệm 2-3 lần bằng một lượng không nhiều nước cất và rửa phễu lọc
bằng chính lượng nước tráng này. Đặt bát sứ lên nồi chưng cách thủy có nhiệt độ
50 - 600C và làm bay hơi dịch lọc đến trạng thái còn hơi ẩm, trong
quá trình làm bay hơi thỉnh thoảng khấy đều mẫu.
Rót vào phần cặn khô
nhận được trong bát sứ 5 - 10ml dung dịch đệm có pH bằng 2,2 và dùng đũa thủy
tinh khuấy cẩn thận đến tan hoàn toàn. Sau đó lọc dung dịch một lần nữa. Dịch
thủy phân được bảo quản trong tủ lạnh.
5.4. Tiến hành phân
tích trên máy.
Nạp dịch thủy phân
vào cột sắc ký của máy phân tích axit amin. Để xây dựng sắc ký đồ chuẩn cần nạp
lên cột dung dịch chuẩn metionin sunfon với một lượng đúng bằng thể tích dịch
thủy phân của mẫu thử đã nạp trên máy. Việc phân tích được thực hiện tuần tự
theo quy trình trên máy phân tích axit amin.
Kết quả được sắc ký
đồ với các pic có diện tích tỷ lệ thuận với nồng độ axit amin. Diện tích S của
pic được tính như diện tích hình tam giác - chiều cao của pic x 1/2 chiều rộng.
Và tính hàm lượng axit amin dựa vào kết quả so sánh diện tích pic của axit amin
chuẩn với diện tích pic của mẫu phân tích.
6.
Tính toán kết quả.
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Trong đó:
C - Nồng độ dung dịch
chuẩn metionin sunfon, tính bằng mg/ml ;
Stp- Diện
tích píc metionin sunfon của mẫu phân tích, tính bằng mm2 ;
V - Thể tích cuối
cùng của dịch thủy phân, tính bằng ml ;
Stc- Diện
tích píc metionin sunfon của dung dịch chuẩn, tính bằng mm2 ;
m - Khối lượng mẫu
thử lấy để thủy phân, tính bằng mg ;
0,823 - Hệ số chuyển
metionin sunfon về mationin.
Kết quả cuối cùng là
trị số trung bình của hai lần xác định song song. Sự sai khác cho phép giữa hai
lần xác định song song ở xác suất tin cậy P = 0,95 không được vượt quá 10% giá
trị trung bình.
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Trong đó :
X - Hàm lượng
metionin trong mẫu thử ở dạng khô không khí, tính bằng g/kg;
W - Độ ẩm của mẫu
thử, tính bằng %.