Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 9582:2013 về Thực phẩm - Phương pháp phát hiện Staphylococcal enterotoxin

• Số hiệu: TCVN9582:2013
• Loại văn bản: Tiêu chuẩn Việt Nam
• Nơi ban hành: ***
• Người ký: ***
• Ngày ban hành: Năm 2013

(1) Nhị giá	(2) Đơn giá
1. Kháng huyết thanh tổ hợp (ví dụ kháng A và B)	1. Kháng huyết thanh (ví dụ kháng A)
2. Mẫu kiểm tra	2. Mẫu kiểm tra pha loãng
3. Enterotoxin chuẩn (ví dụ typ A)	3. Enterotoxin chuẩn (ví dụ typ A)
4. Mẫu kiểm tra	4. Mẫu kiểm tra pha loãng
5. Enterotoxin chuẩn (ví dụ typ B)	5. Mẫu kiểm tra pha loãng

Hình 2 - Sắp xếp các kháng huyết thanh và enterotoxin chuẩn tương ứng

(1) Cho thử nghiệm phát hiện sự có mặt của cả hai enterotoxin (hệ phát hiện nhị giá)

(2) Cho thử nghiệm pha loãng mẫu khi nồng độ enterotoxin trong mẫu quá cao (hệ phát hiện đơn giá)

9.2.2 Thu hồi lam kính và bản nhựa

Để thu hồi các lam kính cho sử dụng lại, rửa sạch mà không cần loại bỏ băng dính cách điện (6.2).

Rửa các lam kính bằng nước máy để loại bỏ thạch, đun sôi từ 3 min đến 5 min trong nước máy có chất tẩy nhẹ, rửa bằng nước máy và sau đó là bằng nước cất, nhúng qua cồn, và dùng gạc lau khô.

Rửa các bản nhựa (6.6) bằng nước nóng (chưa sôi) có một lượng vừa phải chất tẩy mạnh, dùng gạc để lau sạch lớp màng silicon. Sau đó lần lượt rửa bằng nước máy, nước cất, và cồn; dùng gạc lau khô và vỗ cho hết cồn trong các giếng. Không để bản nhựa đã làm sạch tiếp xúc với nhiệt độ cao hoặc các dung môi hoà tan chất dẻo. Các bản nhựa và đặc biệt là các giếng phải khô ráo trước khi sử dụng lại.

10 Diễn giải kết quả

CHÚ THÍCH: Đọc các vạch kết tủa trên lam kính bằng cách giữ hơi chếch với nguồn sáng, tương phản trên nền đen. Phản ứng dương tính khi vạch kết tủa của mẫu thử hợp nhất với vạch kết tủa chuẩn.

...

...

...

Hình 3 cho thấy thử nghiệm khuếch tán trong thạch trên lam kính thuộc hệ phát hiện nhị giá. Trong giếng 1 có kháng huyết thanh enterotoxin A và B; enterotoxin chuẩn typ A và B đã biết trong giếng 3 và 5, tương ứng tạo thành các vạch kết tủa chuẩn A và B; Mẫu thử trong giếng 2 và 4. Bốn phản ứng được diễn giải như sau:

- Không có vạch kết tủa xuất hiện giữa các mẫu thử: Không có enterotoxin A và B.

- Hợp nhất giữa vạch kết tủa của mẫu thử trong giếng 4 với vạch kết tủa của enterotoxin A chuẩn (có sự giao nhau giữa vạch kết tủa của mẫu thử với vạch kết tủa của enterotoxin B chuẩn): Không có enterotoxin A và B trong giếng 2; có enterotoxin A và không có enterotoxin B trong giếng 4.

- Có enterotoxin A và không có enterotoxin B trong cả hai giếng mẫu thử.

- Không có enterotoxin A và B trong mẫu thử ở giếng 2; có enterotoxin A và B trong mẫu ở giếng 4. Người thao tác có thể đơn giản hóa thử nghiệm bằng cách chỉ chuẩn bị một mẫu để phát hiện hai loại enterotoxin khác nhau trên cùng một bộ lam kính.

Hình 3 - Ví dụ về 4 phản ứng có thể xảy ra trong hệ phát hiện nhị giá

Xem 10.1 về việc giải thích các phản ứng.

10.2 Ảnh hưởng của nồng độ enterotoxin đến việc hình thành đường kết tủa tham chiếu

...

...

...

Hình 4 (A) cho thấy việc tạo thành vạch kết tủa chuẩn bị ức chế khi sử dụng nồng độ enterotoxin tương ứng với 10 μg/ml và 5 μg/ml. Hình 4 (B)-(F) cho thấy các dạng kết tủa khi lần lượt sử dụng enterotoxin với nồng độ thấp.

(1) Kháng huyết thanh

(1) Kháng huyết thanh

(1) Kháng huyết thanh

(1) Kháng huyết thanh

(1) Kháng huyết thanh

(1) Kháng huyết thanh

(2) 10 mg/ml enterotoxin

...

...

...

(2) 2 mg/ml enterotoxin

(2) 0,5 mg/ml enterotoxin

(2) 0,125 mg/ml enterotoxin

(3) Enterotoxin chuẩn

(3) Enterotoxin chuẩn

(3) Enterotoxin chuẩn

(3) Enterotoxin chuẩn

(3) Enterotoxin chuẩn

...

...

...

(4) 5 mg/ml enterotoxin

(4) 3 mg/ml enterotoxin

(4) 1 mg/ml enterotoxin

(4) 0,25 mg/ml enterotoxin

(4) 0,0625 mg/ml enterotoxin

Hình 4 - Ảnh hưởng của nồng độ enterotoxin trong mẫu thử đến việc hình thành các đường kết tủa tham chiếu

Xem 10.2 cho việc giải thích các phản ứng.

10.3 Trường hợp phát hiện đơn giá

...

...

...

Hình 5 cho thấy thử nghiệm khuyếch tán trong thạch trên lam kính thuộc hệ phát hiện đơn giá, trong đó kháng huyết thanh được cho vào giếng 1; enterotoxin chuẩn cho vào giếng 3; và các dịch cấy mẫu thử pha loãng (8.2.2) trong các giếng 2, 4, và 5. Không bắt đầu pha loãng dịch cấy mẫu thử (8.2.2) ở đậm độ cao tới mức vượt quá nồng độ phản ứng của enterotoxin.

Hình 5 - Biểu hiện phép thử khuếch tán trong thạch trên lam kính trong hệ phát hiện đơn giá

10.4 Trường hợp không điển hình

Đôi khi, việc xuất hiện dạng vạch kết tủa không điển hình có thể gây khó khăn trong diễn giải kết quả cho những người phân tích thiếu kinh nghiệm. Một trong những phản ứng không điển hình phổ biến nhất là việc hình thành các vạch không liên quan đến độc tố mà do các kháng nguyên khác trong mẫu thử gây ra. Các ví dụ kiểu này được chỉ rõ trong hình 6 cho hệ phát hiện nhị giá. [Xem sự sắp xếp chất phản ứng trong hình 2 (1)].

Ở dạng vạch kết tủa trong hình 6 (1), mẫu thử trong giếng 4 có phản ứng không điển hình biểu thị qua vạch kết tủa không đặc hiệu (các vạch không nhận dạng được với enterotoxin chuẩn typ A và B). Các vạch này cắt ngang vạch kết tủa của enterotoxin chuẩn.

Ở dạng vạch kết tủa trong hình 6 (2), cả hai mẫu thử (giếng 2 và 4) đều âm tính với enterotoxin A và B nhưng hình thành vạch kết tủa không đặc hiệu cắt ngang vạch kết tủa enterotoxin chuẩn typ A và B.

Hình 6 - Các kiểu vạch kết tủa không đặc hiệu trong phép thử khuếch tán trong thạch trên lam kính

...

...

...

Báo cáo thử nghiệm phải ghi rõ:

a) mọi thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ về mẫu thử;

b) phương pháp lấy mẫu đã sử dụng, nếu biết;

c) mọi sai lệch trong môi trường phân lập hoặc các điều kiện ủ đã sử dụng;

d) mọi chi tiết thao tác không qui định trong tiêu chuẩn này, hoặc tùy lựa chọn, cùng với các chi tiết bất thường khác có thể ảnh hưởng tới kết quả;

e) các kết quả thử nghiệm thu được.

1) Bình của hãng Coplin hoặc Wheaton, thông tin này đưa ra nhằm tạo thuận tiện cho người sử dụng tiêu chuẩn và không ấn định sử dụng sản phẩm này.