TCVN-13298-2021-Thuc-an-cong-thuc-danh-cho-tre-so-sinh-Xac-dinh-ham-luong-lutein

• Số hiệu: TCVN13298:2021
• Loại văn bản: Tiêu chuẩn Việt Nam
• Nơi ban hành: ***
• Người ký: ***
• Ngày ban hành: Năm 2021

TIÊU CHUẨN QUỐC GIA

TCVN 13298:2021

THỨC ĂN CÔNG THỨC DÀNH CHO TRẺ SƠ SINH VÀ SẢN PHẨM DINH DƯỠNG DÀNH CHO NGƯỜI LỚN - XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG LUTEIN VÀ BETA-CAROTEN BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG SIÊU HIỆU NĂNG PHA ĐẢO (RP-UPLC)

Infant formula and adult nutritionals - Determination of lutein and β-carotene contents by reversed-phase ultra-high-performance liquid chromatographic (RP-UPLC) method

Lời nói đầu

TCVN 13298:2021 được xây dựng trên cơ sở tham khảo AOAC 2016.13 Lutein and β-carotene in infant formula and adult nutritionals. Reversed-phase ultra-high-performance liquid chromatography;

TCVN 13298:2021 do Viện Kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm quốc gia biên soạn, Bộ Y tế đề nghị, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng thẩm định, Bộ Khoa học và Công nghệ công bố.

...

...

...

Infant formula and adult nutritionals - Determination of lutein and β-carotene contents by reversed-phase ultra-high-performance liquid chromatographic (RP-UPLC) method

CẢNH BÁO: Việc áp dụng tiêu chuẩn này có thể liên quan đến các vật liệu, thiết bị và các thao tác nguy hiểm. Tiêu chuẩn này không thể đưa ra được hết tất cả các vấn đề an toàn liên quan đến việc sử dụng chúng. Người sử dụng tiêu chuẩn này phải tự thiết lập các thao tác an toàn thích hợp và xác định khả năng áp dụng các giới hạn quy định trước khi sử dụng tiêu chuẩn.

1  Phạm vi áp dụng

Tiêu chuẩn này quy định phương pháp xác định các đồng phân cis- và all-trans-lutein; all-trans-β- caroten và đồng phân cis của β-caroten trong thức ăn công thức dành cho trẻ sơ sinh và thực phẩm dinh dưỡng dành cho người lớn bằng sắc ký lỏng siêu hiệu năng pha đảo (RP-UPLC) sử dụng detector UV-Vis.

Giới hạn định lượng của phương pháp là từ 1 μg/100 g đến 1300 μg/100 g.

Phương pháp này không áp dụng đối với mẫu thử có chứa β-apo-8'-carotenal.

2  Nguyên tắc

Mẫu thử (dạng bột, dạng lỏng uống liền, dạng lỏng đậm đặc) được thêm chất nội chuẩn, sau đó xà phòng hóa bằng dung dịch kali hydroxit. Dịch mẫu sau khi xà phòng hóa được chiết lỏng - lỏng bằng metyl tert-butyl ete (MTBE) và tetrahydrofuran (THF), sau đó là n-hexan. Phần dung môi hữu cơ phía trên được tách riêng và làm khô bằng khí nitơ. Phần cặn được hòa tan bằng 2-propanol (isopropanol). Quá trình tách được thực hiện bằng sắc ký pha đảo với cột pha tĩnh C30. Tất cả các all-trans-lutein và β-caroten được tách khỏi các dạng đồng phân cis và cũng tách khỏi zeaxanthin, α-caroten, lycopen.

3  Thuốc thử

...

...

...

3.1  Nước cất, có độ dẫn điện >18 MΩ/cm

3.2  Metanol (CH₃OH)

3.3  Metyl tert-butyl ete (MTBE)

3.4  n-Hexan

3.5  Kali hydroxit (KOH)

3.6  Thuốc thử ancol (etanol biến tính) (ROH)

3.7  α-tocopherol, độ tinh khiết 95 %

3.8  Axit pyrogallic (pyrogallol)

3.9  Isopropanol

...

...

...

3.11  Amoni axetat, độ tinh khiết 98 %

3.12  Dung dịch kali hydroxit, 50 % (khối lượng)

Dùng cân (4.6) để cân 50 g kali hydroxit (3.5) và chuyển từ từ vào cốc có mỏ 250 mL (4.19) có chứa sẵn 50 mL nước, khuấy đều đến khi tan hết. Để nguội, sau đó chuyển vào chai và bảo quản ở nhiệt độ phòng.

Dung dịch đã chuẩn bị sử dụng trong 6 tháng.

3.13  Dung dịch α-tocopherol trong MTBE (MTBE/a-tocopheroI)

Hòa tan 2,2 g d-tocopherol (3.7) trong 500 mL MTBE (3.3).

Bảo quản dung dịch này trong tủ lạnh và sử dụng trong 1 tháng.

3.14  Dung dịch pyrogallol (axit pyrogallic 0,2 M trong etanol)

Hòa tan 6,3 g axit pyrogallic (3.8) trong 250 mL thuốc thử alcohol (3.6).

...

...

...

3.15  Dung dịch chiết (α-tocopherol 10 mM trong MTBE-THF tỷ lệ 1:1)

Hòa tan 2,2 g α-tocopherol (3.7) trong 250 mL MTBE (3.3) và 250 mL THF (3.10).

Bảo quản dung dịch này trong tủ lạnh và sử dụng trong 1 tháng.

3.16  Dung dịch hoà cắn (α-tocopherol 10 mM trong isopropanol)

Hòa tan 4,4 g α-tocopherol (3.7) trong 1,0 L isopropanol (3.9).

Bảo quản dung dịch này trong tủ lạnh và sử dụng trong 1 tháng.

3.17  Pha động dùng cho hệ thống LC

3.17.1  Pha động A, amoni axetat 20 mM trong metanol-nước (98:2)

Hòa tan 1,54 g amoni axetat (3.11) trong hỗn hợp chứa 980 mL metanol (3.2) và 20 mL nước (3.1), trộn kỹ.

...

...

...

3.17.2  Pha động B, MTBE.

3.18  Chất chuẩn

3.18.1  Lutein, ví dụ: Part No. ASB-00012453 (ChromaDex) 1).

3.18.2  β-caroten, ví dụ: USP Part No. 1065480 ^1).

3.18.3  Apocarotenal (β-apo-8’-carotenal) (nội chuẩn), ví dụ: USP Part No.1040854 ^1^).

3.18.4  Lutein chứa khoảng 10 % zeaxanthin, ví dụ: USP Part No 1370804 ^1).

3.18.5  β-caroten chuẩn đối chứng (để kiểm tra độ phù hợp của hệ thống), ví dụ: USP Part No. 1065491 ^1).

3.19  Dung dịch chuẩn

3.19.1  Dung dịch chuẩn gốc carotenoid, 20 000 μg/100 mL

...

...

...

Dung dịch chuẩn gốc được bảo quản ở -20 °C và sử dụng trong 6 tháng. Mỗi lần sử dụng dung dịch này cần đo lại nồng độ và kiểm tra độ tinh khiết dùng cho sắc ký.

3.19.2  Dung dịch chuẩn để kiểm tra độ hấp thụ UV-Vis, 200 μg/100 mL

Lấy 1,0 mL dung dịch chuẩn gốc lutein và β-caroten (3.19.1) vào bình định, mức 100 mL (4.15), pha loãng và định mức đến vạch bằng dung dịch MTBE (3.3).

Chuẩn bị dung dịch mới cho mỗi lần sử dụng.

3.19.3  Dung dịch chuẩn làm việc carotenoid riêng kiểm tra độ tinh khiết sắc ký, 200 μg/100 mL

a) Đối với lutein và β-caroten: chuyển 100 μL từng chất chuẩn (3.19.1) vào bình định mức 10 mL riêng rẽ (4.15), pha loãng và định mức đến vạch bằng dung môi hoà cắn (3.16).

Chuẩn bị dung dịch mới cho mỗi lần sử dụng.

b) Đối với apocarotenal: chuyển 1,0 mL dung dịch chuẩn gốc (3.19.1) vào bình định mức 100 mL (4.15), pha loãng và định mức đến vạch bằng dung môi hoà cắn (3.16).

Bảo quản ở -20 °C trong 1 tháng và sử dụng làm dung dịch nội chuẩn.

...

...

...

Lấy chính xác 3,0 mL dung dịch apocarotenal gốc (3.19.1) vào bình định mức 50 mL (4.15) và pha loãng đến vạch bằng dung môi hoà cắn (3.16).

Bảo quản ở -20 °C để sử dụng trong 1 tháng.

3.19.5  Dung dịch chuẩn trung gian hỗn hợp carotenoid, 400 μg/100mL

Lấy chính xác 2,0 mL từng dung dịch chuẩn gốc lutein và β-caroten (3.19.1) vào bình định mức 100 mL (4.15) và pha loãng đến vạch bằng dung môi hoà cắn (3.16).

Bảo quản ở -20 °C để sử dụng trong 1 tháng.

3.19.6  Dãy dung dịch chuẩn làm việc carotenoid

Từ dung dịch chuẩn trung gian apocarotenal (3.19.4) và dung dịch chuẩn trung gian hỗn hợp carotenoid (3.19.5), pha dãy dung dịch chuẩn làm việc với nồng độ lutein và beta-caroten khoảng từ 4,0 μg/100 mL đến 240 μg/100 mL, nồng độ nội chuẩn apocarotenal là 96 μg/100 mL, sử dụng dung môi hoà cắn (3.16).

Bảo quản ở -20 °C để sử dụng trong 1 tháng.

4.3  Cột bảo vệ C30, kích thước 10 mm x 2,1 mm, cỡ hạt 3 μm, ví dụ: Part No. CT99S03-01Q1GC (YMC) 3).

...

...

...

4.5  Máy đo quang phổ có dải bước sóng từ 200 nm đến 700 nm với cuvet thạch anh chiều dài đường quang 1 cm.

4.6  Cân, có thể cân chính xác đến 0,1 g.

4.7  Cân phân tích, có thể cân chính xác đến 0,01 mg.

4.8  Bể rung siêu âm cách thủy 40 kHz.

4.9  Máy lắc Vortex, tốc độ 200 r/min.

4.10  Bộ hóa hơi có cung cấp khí nitơ sạch.

4.11  Máy ly tâm, thích hợp với ống ly tâm 50 mL.

4.12  Ống ly tâm polypropylen 50 mL.

4.13  Xyranh, dung tích 1 mL.

...

...

...

4.15  Bình định mức, có các dung tích thích hợp, trong suốt, tối màu.

4.16  Lọ thủy tinh thiêu kết, dung tích 12 mL.

4.17  Lọ HPLC tối màu với ống lồng 300 μL.

4.18  Pipet, có thể phân phối các thể tích khác nhau.

4.19  Cốc có mỏ, dung tích 250 mL.

5  Lấy mẫu

Tiêu chuẩn này không quy định việc lấy mẫu. Tham khảo các tiêu chuẩn cụ thể về lấy mẫu sản phẩm. Trong trường hợp chưa có tiêu chuẩn cụ thể liên quan đến sản phẩm, việc lấy mẫu theo thỏa thuận giữa các bên liên quan.

Mẫu gửi đến phòng thử nghiệm phải là mẫu đại diện và không bị hư hỏng hoặc biến đổi trong suốt quá trình vận chuyển và bảo quản.

3.19.7  Dung dịch chuẩn β-caroten để kiểm tra sự phù hợp hệ thống

...

...

...

Bảo quản dung dịch trong tủ lạnh và sử dụng trong 3 tháng.

3.19.8  Dung dịch lutein để kiểm tra sự phù hợp hệ thống

Cân chính xác 10 mg chuẩn đối chứng phù hợp hệ thống lutein (3.19.4) vào bình định mức 100 ml (4.15), pha loãng và định mức đến vạch bằng thuốc thử alcohol (3.6), lắc đều. Lấy 1 ml dung dịch cho vào bình định mức 50 ml (4.15). Thêm khoảng 35 ml isopropanol (3.9), đậy nắp, đun nóng trong bể cách thủy (4.8) ở 80 °C trong 2 h. Để nguội đến nhiệt độ phòng, thêm 250 μl dung dịch chuẩn gốc apocarotenal (3.19.1), pha loãng và định mức đến vạch bằng isopropanol (3.9).

Bảo quản dung dịch trong tủ lạnh và sử dụng trong 3 tháng.

3.20  Dung dịch nội chuẩn (ISTD), được chuẩn bị ngay trước khi sử dụng

3.20.1  Đối với mẫu thức ăn công thức dành cho trẻ sơ sinh có hàm lượng carotenoid thấp (< 100 μg/100 g)

Lấy 4,0 mL dung dịch chuẩn làm việc apocarotenal (3.19.3) vào bình định mức 50 mL (4.15), pha loãng và định mức đến vạch bằng dung dịch pyrogallol (3.8). Lượng dung dịch này đủ để phân tích cho chín mẫu thử.

3.20.2  Đối với mẫu có hàm lượng carotenoid cao (≥ 100 μg/100 g)

Lấy 4,0 ml dung dịch apocarotenal trung gian (3.19.4) vào bình định mức 50 mL (4.15), pha loãng và định mức đến vạch bằng dung dịch pyrogallol (3.8).

...

...

...

Sử dụng các thiết bị, dụng cụ của phòng thử nghiệm thông thường và cụ thể như sau:

4.1  Hệ thống sắc ký lỏng siêu hiệu năng (UPLC) gồm bơm hai kênh, bộ bơm mẫu tự động, bộ điều nhiệt cột, detector UV-Vis, và phần mềm xử lý dữ liệu hoặc tương đương

4.2  Cột phân tích carotenoid C30, kích thước 250 mm x 2,0 mm, cỡ hạt 3 μm, ví dụ: Part No. CT99S03-2502WT (YMC) 2).

6  Cách tiến hành

6.1  Chuẩn bị mẫu thử

6.1.1  Chuẩn bị mẫu sơ bộ

a) Mẫu dạng bột

Cân chính xác khoảng 625 mg mẫu vào ống ly tâm 50 mL (4.12). Thêm 5 mL nước (3.1), đậy nắp và lắc đều trên máy lắc Vortex (4.9) đến khi tan hết. Để yên 15 min ở nhiệt độ phòng.

CHÚ THÍCH: Trong trường hợp mẫu bột không đồng nhất, trước tiên, hòa tan 25 g mẫu vào 200 mL nước (ghi lại khối lượng của mẫu bột và nước), sau đó chuyển khoảng 5 g mẫu đã hoàn nguyên vào ống ly tâm 50 mL (4.12).

...

...

...

Lắc đều 10 min trước khi mở vật chứa. Cân 5 g mẫu vào ống ly tâm 50 mL (4.12).

c) Mẫu dạng lỏng có hàm lượng carotenoid > 200 μg/100 g

Lắc đều 10 min trước khi mở vật chứa. Cân 2 g mẫu vào ống ly tâm 50 mL (4.12). Thêm 3 mL nước, đậy nắp và lắc Vortex 10 s. Để yên 15 min ở nhiệt độ phòng.

d) Mẫu thực phẩm công thức dạng cô đặc dành cho trẻ sơ sinh

Lắc đều 10 min trước khi mở vật chứa. Cân 2,5 g mẫu vào ống ly tâm 50 mL (4.12), thêm 2,5 mL nước (3.1), đậy nắp và lắc đều trên máy lắc Vortex trong 10 s. Để yên 15 min ở nhiệt độ phòng.

6.1.2  Xử lý mẫu

Dùng pipet (4.18) hút 5,0 mL dung dịch nội chuẩn thích hợp (3.20) vào mỗi ống. Thêm 1,5 mL dung dịch kali hydroxit (3.12) vào mỗi ống, lắc đều trong 5 min. Thêm 8 mL dung dịch chiết (3.15) vào mỗi ống, lắc trong 10 min. Thêm 10 mL nước (3.1) và 10 mL hexan (3.4) vào mỗi ống, lắc trong 1 min. Ly tâm với tốc độ 1 000 r/min trong 5 min.

Chuyển một phần dịch nổi phía trên sau khi ly tâm vào lọ thủy tinh (4.16).

- Mẫu có hàm lượng carotenoid đơn lẻ ≤ 50 μg/100 g: sử dụng 10 mL dịch nổi;

...

...

...

Làm khô bằng khí nitơ ở nhiệt độ ≤ 40 °C. Hòa tan phần còn lại bằng dung môi hoà cắn (3.16), lắc Vortex:

- Mẫu có hàm lượng carotenoid đơn lẻ ≤ 100 μg/100 g: thêm 0,5 mL dung môi chiết mẫu;

- Mẫu có hàm lượng carotenoid đơn lẻ trong khoảng từ 100 đến 500 μg/100 g: thêm 1,0 mL dung môi chiết mẫu;

- Mẫu có hàm lượng carotenoid đơn lẻ trong khoảng từ 500 đến 1 000 μg/100 g: thêm 2,0 mL dung môi chiết mẫu;

- Mẫu có hàm lượng carotenoid đơn lẻ trong khoảng từ 1000 đến 1 500 μg/100 g: thêm 3,0 mL dung môi chiết mẫu.

Lọc mẫu qua xyranh có màng lọc PTFE 0,2 μm trước khi phân tích trên hệ thống HPLC.

6.2  Xác định bằng UPLC

6.2.1  Điều kiện vận hành UPLC

Các điều kiện vận hành sau đây được cho là thích hợp:

...

...

...

- Nhiệt độ cột: 30 °C

- Pha động A: Amoni axetat 20 mM trong Metanol:nước (98:2 thể tích)

- Pha động B: MTBE (3.17.2)

Chương trình rửa giải gradient như sau:

Thời gian (min)

Tỷ lệ % kênh B

0

5

1

...

...

...

8

15

25

100

25,5

5

32

5

- Tốc độ dòng:              0,25 mL/min;

...

...

...

- Bước sóng phát hiện: 450 nm.

CHÚ THÍCH: Các thông số về tỷ lệ pha động, thể tích mẫu bơm, tốc độ dòng, nhiệt độ buồng cột có thể được điều chỉnh tùy thuộc vào điều kiện thực tế của thiết bị HPLC được sử dụng.

6.2.2  Kiểm tra sự phù hợp hệ thống

a) Độ phân giải giữa các đồng phân cis và trans-lutein

Bơm dung dịch lutein để kiểm tra sự phù hợp hệ thống (3.19.8) và xác định độ phân giải giữa hai dạng đồng phân cis và all-trans-lutein.

Độ phân giải như sau;

- giữa các 13-cis và 13’-cis-lutein: ≥ 1,4

- giữa các 13’-cis và all-trans-lutein: ≥ 2,2

b) Độ phân giải giữa các all-trans-lutein, zeaxanthin và apocarotenal:

...

...

...

- giữa các all-trans-lutein và zeaxanthin: ≥ 3,7

- giữa các zeaxanthin và apocarotenal: ≥ 2,5

c) Độ phân giải giữa các β-caroten đồng phân cis và trans và α-caroten

Bơm dung dịch β-caroten để kiểm tra sự phù hợp hệ thống (3.19.7) và xác định độ phân giải của hai dạng đồng phân cis-β-caroten, all-trans-β-caroten và α-caroten.

Độ phân giải như sau:

- giữa các 13-cis-β-caroten và cis/trans-α-caroten: ≥ 1,7

- giữa các all-trans-β-caroten và 9-cis-β-caroten: ≥ 2,6

6.2.3  Dựng đường chuẩn

Bơm lặp lại dãy dung dịch chuẩn làm việc hỗn hợp (3.19.6) trước và sau mỗi lô mẫu thử (tối đa 12 mẫu thử một lô). Tính độ dốc sử dụng dung dịch nội chuẩn (3.20). Xác định hệ số R^2 đối với mỗi đường chuẩn phải lớn hơn 0,995. Độ dốc của hai đường chuẩn chênh lệch không quá 2,0 %.

...

...

...

7.1  Xác định độ tinh khiết của các chất chuẩn lutein và β-caroten

a) Độ tinh khiết quang phổ (SP) được đo cho từng dung dịch chuẩn (3.19.2), dựa vào mẫu trắng MTBE (3.3) ở bước sóng có độ hấp thụ tối đa (444 nm đối với lutein và 450 nm đối với β-caroten).

Tính độ tinh khiết quang phổ (SP) của từng dung dịch chuẩn đối chứng theo độ hấp thụ quan sát so với độ hấp thụ dự kiến, theo Công thức (1):

(1)

Trong đó:

A_MS là độ hấp thụ của dung dịch chuẩn;

50 000 là hệ số pha loãng;

E là hệ số tắt (đối với lutein trong MTBE, E = 2 589 ở 444 nm; đối với β-caroten trong MTBE, E = 2 588 ở 450 nm);

...

...

...

SP thường lớn hơn 0,90 (tức là 90 %).

b) Bơm các dung dịch chuẩn làm việc (3.19.3), ít nhất ba lần. Độ tinh khiết sắc ký (CP) được tính theo Công thức (2):

(2)

Trong đó:

S_all-trans là diện tích pic của tất cả các all-trans-carotenoid;

∑S là tổng diện tích tất cả các pic có liên quan.

Các pic có liên quan bao gồm tất cả các pic trong sắc ký đồ HPLC, trừ các pic dung môi. CP thường lớn hơn 0,95 (tức là 95 %).

c) Độ tinh khiết P của từng chất chuẩn đối chứng, tính theo Công thức (3):

...

...

...

(3)

Trong đó:

SP là độ tinh khiết quang phổ, tính theo Công thức (1);

CP là độ tinh khiết sắc ký, tính theo Công thức (2);

100 là hệ số chuyển đổi thập phân thành phần trăm.

7.2  Tính nồng độ của từng chất phân tích carotenoid

Nồng độ của từng chất phân tích carotenoid ở dạng all-trans trong mỗi dung dịch hiệu chuẩn (3.19.6), C_i (ví dụ: C_Lut đối với lutein), tính bằng microgam trên 100 mL (μg/100 mL), theo Công thức (4):

(4)

...

...

...

W_i là khối lượng chất phân tích (ví dụ: lutein) được sử dụng để chuẩn bị dung dịch chuẩn gốc, tính bằng miligam (mg);

2 là hệ số chuyển đổi 50 mL thành 100 mL;

P là độ tinh khiết của chất chuẩn đối chứng của all-trans-Iutein, tính theo Công thức (3);

100 là hệ số chuyển đổi từ phần trăm sang số thập phân;

1 000 là hệ số chuyển đổi từ miligam sang microgam;

(2/100) là hệ số pha loãng dung dịch chuẩn gốc thành dung dịch chuẩn trung gian hỗn hợp carotenoid;

V_MC là thể tích dung dịch trung gian hỗn hợp carotenoid (3.19.5) được sử dụng, tính bằng mililit (ml);

V_T là thể tích pha loãng, tính bằng mililit (ml).

7.3  Tính nồng độ của dung dịch nội chuẩn apocarotenal

...

...

...

(5)

Trong đó:

W_A là khối lượng apocarotenal được sử dụng để tạo ra dung dịch gốc, tính bằng miligam (mg);

2 là hệ số chuyển đổi 50 ml thành 100 mL;

CP_A là độ tinh khiết sắc ký của apocarotenal tính theo Công thức (2);

1000 là hệ số chuyển đổi miligam thành microgam;

(3/50) là hệ số pha loãng dung dịch gốc thành dung dịch trung gian apocarotenal;

V_AI là thể tích dung dịch trung gian apocarotenal (3.19.4), được sử dụng, tính bằng mililit (ml);

...

...

...

7.4  Tính tỷ lệ diện tích pic và tỷ lệ nồng độ mỗi chất phân tích trong mỗi dung dịch hiệu chuẩn

a) Tỷ lệ diện tích pic (RS_i) của mỗi chất phân tích được tính theo Công thức (6):

(6)

Trong đó:

S_i là diện tích pic của all-trans lutein hoặc-caroten;

S_IS là diện tích pic của chất nội chuẩn.

b) Tỷ lệ nồng độ (RC_i) của mỗi chất phân tích được tính theo Công thức (7):

...

...

...

Trong đó:

C_i là nồng độ all-trans lutein hoặc-caroten;

C_IS là nồng độ của chất nội chuẩn.

Dựng đường chuẩn năm điểm với dung dịch nội chuẩn (3.20) từ các tỷ lệ diện tích (RS_i) so với tỷ lệ nồng độ (RG_i), với nồng độ tương đối trên trục x.

Độ chính xác trên các điểm hiệu chuẩn phải là 100 % ± 10 % và hệ số xác định (R^2) phải lớn hơn 0,995.

Có thể sử dụng phần mềm của thiết bị để tính toán và xử lý dữ liệu.

7.5  Tính khối lượng apocarotenal được thêm vào phần mẫu thử

Tính khối lượng apocarotenal (M_A) được thêm vào phần mẫu thử, biểu thị bằng microgam (μg), theo Công thức (8):

...

...

...

Trong đó:

C_A là nồng độ của chất nội chuẩn trong dung dịch chuẩn trung gian hoặc dung dịch chuẩn làm việc apocarotenal được sử dụng, tính bằng microgam trên 100 ml (μg/100 ml);

V_A là thể tích của chất nội chuẩn được thêm vào từng mẫu, tính bằng mililit (ml);

4 là thể tích dung dịch chuẩn trung gian hoặc dung dịch chuẩn làm việc apocarotenal được sử dụng, tính bằng mililit (ml);

50 là tổng thể tích chất nội chuẩn đã sử dụng, tính bằng mililit (ml).

7.6  Tính hàm lượng all-trans-lutein, các đồng phân cis của lutein và lutein tổng số trong mẫu thử

Để nhận diện pic, tham khảo thời gian lưu tương đối của các pic trong Hình A.1, Hình A.2 và Hình A.3.

a) Hàm lượng all-trans-lutein trong mẫu thử, X₁, tính bằng microgam trên 100 g (μg/100 g), theo Công thức (9):

...

...

...

Trong đó:

M_A là khối lượng apocarotenal được thêm vào phần mẫu thử, tính bằng microgam (μg) theo Công thức (8);

M_S là khối lượng mẫu thử, tính bằng gam (g);

A_Lut là diện tích pic all-trans-lutein trong sắc đồ mẫu thử;

A_a là diện tích pic apocarotenal trong sắc đồ mẫu thử;

I_Lut là giao điểm y với đường chuẩn đối với all-trans-lutein;

RF_Lut là độ dốc của đường chuẩn đối với all-trans-lutein.

b) Hàm lượng các đồng phân cis của lutein trong mẫu thử, X₂, tính bằng microgam trên 100 g (μg/100 g), theo Công thức (10):

...

...

...

Trong đó:

 như trong Công thức (9);

 lần lượt là diện tích các pic 13-cis-lutein, 13'-cis-lutein, 9-cis-lutein và 9'-cis-lutein trong sắc đồ mẫu thử;

c) Hàm lượng lutein tổng số trong mẫu thử, X_Lut, tính bằng microgam trên 100 g (μg/100 g), theo Công thức (11):

(11)

7.7  Tính hàm lượng all-trans-β-caroten, các đồng phân cis của β-caroten và caroten tổng số trong các mẫu thử

a) Hàm lượng all-trans-β-caroten trong mẫu thử, X₃, tính bằng microgam trên 100 g (μg/100 g), theo Công thức (12):

...

...

...

Trong đó:

M_A, M_S, A_A như trong Công thức (9);

A_BC là diện tích pic all-trans-β-caroten trong sắc đồ mẫu thử;

I_bc là giao điểm của y với đường chuẩn đối với all-trans-β-caroten;

RF_BC là độ dốc của đường chuẩn đối với all-trans-caroten.

b) Hàm lượng các đồng phân cis của β-caroten trong mẫu thử, X₄, tính bằng microgam trên 100 g (μg/100 g), theo Công thức (13):

(13)

Trong đó:

...

...

...

I_bc, RF_BC như trong Công thức (12);

A_15cisBC, A_13cisBC, A_9cisBC, A_XcisBC lần lượt là diện tích các pic 15-cis-β-caroten13-cis-β-caroten, 9-cis-β-caroten và pic các đồng phân cis không xác định của β-caroten trong sắc đồ mẫu thử;

c) Hàm lượng β-caroten tổng số trong mẫu thử, X_BC, tính bằng microgam trên 100 g (μg/100 g), theo Công thức (14):

(14)

8  Báo cáo thử nghiệm

Báo cáo thử nghiệm phải bao gồm ít nhất các thông tin sau đây:

a) mọi thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ về mẫu thử;

b) phương pháp lấy mẫu, nếu biết;

...

...

...

d) mọi điều kiện thao tác không quy định trong tiêu chuẩn này hoặc được xem là tùy chọn, cùng với mọi tình huống bất thường có thể ảnh hưởng đến kết quả;

e) kết quả thử nghiệm thu được.

Phụ lục A

(Tham khảo)

Các ví dụ về sắc ký đồ

CHÚ DẪN:

Lut = Lutein, Zea = zeaxanthin và Apo = apocarotenal

...

...

...

CHÚ DẪN:

AC = α-Caroten và BC = β-caroten

Hình A.2 - Sắc đồ của dung dịch chuẩn β-caroten để kiểm tra sự phù hợp hệ thống (3.19.8)

CHÚ DẪN:

Lut = Lutein, Zea = zeaxanthin, Apo = apocarotenal và BC = β-caroten

Hình A.3 - Sắc đồ phân tích mẫu sữa công thức dành cho trẻ sơ sinh

...

...

...

Lut = Lutein, Zea = zeaxanthin, Apo = apocarotenal, AC = α-caroten và BC = β-caroten

Hình A.4 - Sắc ký đồ của mẫu sữa công thức cho trẻ ăn dặm

CHÚ DẪN:

Lut = Lutein, Apo = apocarotenal, AC = α-caroten và BC = β-caroten

Hình A.5 - Sắc ký đồ của mẫu sản phẩm dinh dưỡng ăn liền dành cho người lớn

1) Đây là ví dụ về sản phẩm thương mại sẵn có và thích hợp. Thông tin này đưa ra để thuận tiện cho người sử dụng tiêu chuẩn và không ấn định phải sử dụng các sản phẩm này. Có thể sử dụng các sản phẩm tương tự nếu cho kết quả tương đương.

3) Đây là ví dụ về sản phẩm thương mại sẵn có và thích hợp. Thông tin này đưa ra để thuận tiện cho người sử dụng tiêu chuẩn và không ấn định phải sử dụng các sản phẩm này. Có thể sử dụng các sản phẩm tương tự nếu cho kết quả tương đương.

2) Đây là ví dụ về sản phẩm thương mại sẵn có và thích hợp. Thông tin này đưa ra để thuận tiện cho người sử dụng tiêu chuẩn và không ấn định phải sử dụng các sản phẩm này. Có thể sử dụng các sản phẩm tương tự nếu cho kết quả tương đương.