Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 8400-8:2011 về bệnh động vật - quy trình chẩn đoán

• Số hiệu: TCVN8400-8:2011
• Loại văn bản: Tiêu chuẩn Việt Nam
• Nơi ban hành: ***
• Người ký: ***
• Ngày ban hành: Năm 2011

Loài	Khuẩn lạc	Kính hiển vi (nhuộm LPCB)
		Cuống đính Tiểu bào bào tử	Tiểu bào	Thể bình	Bào tử đính
A. fumigatus	Lúc đầu dẹt có lông tơ màu trắng, rồi nhanh chóng chuyển sang màu xanh lục ở trung tâm. Khuẩn lạc già có màu xám khói, nhưng quanh rìa vẫn màu trắng. Bề mặt khuẩn lạc có thể mềm mượt, có mào lông hoặc nếp gấp. Mặt sau của khuẩn lạc thường không màu.	Trơn, nhẵn Có hình mái không màu vòm, đường hoặc xanh kính nhạt, đường từ 20 µm kính từ 5 µm đến 30 µm. đến 8 µm, có tế bào chân điển hình ở gốc.	Có hình mái vòm, đường kính từ 20µm đến 30 µm	Có 1 lớp thể bình thứ cấp bao trùm trên 1/2 đến 2/3 tiểu bào, thể bình dài 6 µmđến 8 µm.	Hình cầu hoặc gần cầu màu xanh lá cây, có gai, xếp thành chuỗi mọc lên từ thể bình. Các chuỗi này có xu hướng cuốn vào phía trong. Đường kính từ 2 µm đến 3 µm.
A. flavus	Lúc đầu trằng, rồi chuyển sang vàng tới vàng xanh, xung quanh rìa màu trắng. Khi trưởng thành khuẩn lạc có thể có màu lục vàng. Khuẩn lạc có thể có nếp nhăn tỏa tròn hoặc dẹt. Mặt sau có màu: từ không màu đến hồng nhạt, từ nâu cho đến nâu xám.	Dài, có thành Lúc đầu dày, nhám và thon dài không màu, hơn, sau có đường kính từ hình cầu, 10 µm đến đường kính 20µm. từ 25 µm đến 65 µm.	Lúc đầu thon dài hơn, sau có hình cầu, đường kính từ 25 µm đến 65 µm	Có 1 đến 2 lớp thể bình (sơ cấp và thứ cấp) bao phủ trên toàn bộ bề mặt tiểu bào.	Hình cầu hoặc elip, có gai, màu hơi vàng nâu, đường kính từ 3 µm đến 5 µm.
A. niger	Lúc đầu có màu trắng sau có những chấm đen trên bề mặt giống như được rắc hạt tiêu. Mặt sau có màu vàng sẫm hoặc màu kem.	Dài, gầy, nhẵn, Hình cầu, trong suốt, nâu đường kính sáng, đường từ 45 µm kính từ 15 µm đến 100 µm. đến 20 µm.	Hình cầu, đường kính từ 45 µm đến 100 µm	Có 2 lớp thể bình (lớp sơ cấp ở dưới thứ cấp) trên tiểubào.	Hình cầu màu đen và nhám.

Kiểm tra hình thái sợi nấm bằng cách làm tiêu bản từ khuẩn lạc và nhuộm với thuốc nhuộm LPCB (xem Phụ lục B).

Kiểm tra đặc điểm hình thái khuẩn lạc nấm, có thể dùng kính lúp để soi.

6. Kết luận

Gia cầm được xác định là mắc bệnh nấm phổi mắc bệnh có các đặc điểm dịch tễ, triệu chứng lâm sàng và bệnh tích đặc trưng và phát hiện trong phòng thí nghiệm.

PHỤ LỤC A

(Quy định)

CHUẨN BỊ TIÊU BẢN VỚI DUNG DỊCH KALI HYDROXYT (KOH)

A.1 Thuốc thử

...

...

...

A.2 Cách tiến hành

Cho từ 1 giọt đến 2 giọt dung dịch KOH 20 % lên phiến kính.

Lấy bệnh phẩm (tổ chức tổn thương hay u cục) hòa đều vào dung dịch KOH.

Đưa nhẹ nhàng phiến kính qua ngọn lửa (không được sôi hoặc quá nóng) để làm nhanh quá trình tiêu protein.

Đặt lam kính lên mẫu, ấn nhẹ xuống.

Để từ 1 h đến 2 h hoặc để qua đêm trong hộp có khả năng giữ ẩm (cho một chút nước hay một miếng bong thấm nước vao trong hộp). Thời gian để tùy thuộc vào độ dày của mẫu, KOH sẽ làm tiêu các mảnh protein.

A.3. Xem tiêu bản

Xem tiêu bản bằng kính hiển vi quang học.

Quan sát được các sợi nấm, hình thái bào tử nấm đặc trưng trong các mô bị nhiễm.

...

...

...

PHỤ LỤC B

(Quy định)

CHUẨN BỊ TIÊU BẢN DÙNG THUỐC NHUỘM LACTOPHENOL COTTON BLUE

B.1 Thuốc thử

Thuốc nhuộm lactophenol cotton blue, có thành phần như sau:

Phenol tinh thể                                                  20 g

Thuốc nhuộm cotton blue                                  0,05 g

Glyxerin                                                            40 ml

Axit lactic                                                          20 ml

...

...

...

Hòa tan phenol tinh thể, glyxerin, axit lactic với nước trong nồi cách thủy, sau đó cho thuốc nhuộm cotton blue rồi trộn đều.

B.2 Cách tiến hành

Cho một giọt thuốc nhuộm LPCB lên phiến kính.

Lấy khoảng 2 mm đến 3 mm khuẩn lạc nấm cho vào giọt thuốc nhuộm. Đặt lam kính lên mẫu, ấn nhẹ xuống.

Đưa nhẹ nhàng phiến kính qua ngọn lửa (không được để quá nóng) để đẩy bớt bọt khí ra ngoài.

B.3 Xem tiêu bản

Xem tiêu bản bằng kính hiển vi quang học.