DOANH NGHIỆP

Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 7682:2007: Vi sinh vật trong thực phẩm và thức ăn chăn nuôi-Phản ứng chuỗi polymeraza

Tham vấn bởi luật sư Nguyễn Thụy Hân

Chuyên viên pháp lý Văn Ngọc

15:02 08/03/24

Hiện nay Tiêu chuẩn Quốc gia nào về Vi sinh vật trong thực phẩm và thức ăn chăn nuôi? Phản ứng chuỗi polymeraza được quy định như thế nào? – Hồng Hải (TP Hồ Chí Minh).

>> Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 7050:2020: Thịt chế biến không qua xử lý nhiệt

>> Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 7037:2002: hạt tiêu trắng (Piper nigrum L)-quy định kỹ thuật

Hiện nay, đang áp dụng Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 7682:2007: Vi sinh vật trong thực phẩm và thức ăn chăn nuôi - Phản ứng chuỗi polymeraza. Theo đó, Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 7682:2007 có một số nội dung nổi bật như sau:

1. Tài liệu viện dẫn của Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 7682:2007

Các tài liệu viện dẫn sau là rất cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn. Đối với các tài liệu viện dẫn ghi năm ban hành thì áp dụng phiên bản được nêu. Đối với các tài liệu viện dẫn không ghi năm ban hành thì áp dụng phiên bản mới nhất, bao gồm cả các sửa đổi.

ISO 16140, Microbiology of food and animal feeding stuffs - Protocol for the validation of alternative methods (Vi sinh vật trong thực phẩm và thức ăn chăn nuôi - Thủ tục đánh giá xác nhận các phương pháp thay thế)

ISO 22174 : 2005 Microbiology of food and animal feeding stuffs - Polymerase chain reaction (PCR) for the detection of food-borne pathogens - General requirements and definitions (Vi sinh vật trong thực phẩm và thức ăn chăn nuôi - Yêu cầu chung và định nghĩa).

Toàn văn File Word Luật Tiêu chuẩn và Quy chuẩn kỹ thuật cùng các văn bản hướng dẫn (đang có hiệu lực thi hành)

Ảnh chụp một phần Lược đồ Luật Tiêu chuẩn và Quy chuẩn kỹ thuật 2006

2. Nguyên tắc của Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 7682:2007

Phân tích định tính bao gồm sàng lọc và/hoặc phát hiện đặc hiệu các trình tự axit nucleic đích trong mẫu thử. Tính đặc thù có thể ở mức giống, loài hoặc ở mức phân loại (taxon) thấp hơn.

Kết quả định tính phải nêu rõ sự có mặt hay không có mặt trình tự đích đang nghiên cứu, liên quan đến các phép kiểm chứng thích hợp và nằm trong giới hạn phát hiện của phương pháp được sử dụng và phần mẫu cần phân tích.

Phép phân tích nhìn chung bao gồm:

- Khuếch đại các trình tự đích đặc hiệu bằng PCR;

- Phát hiện các sản phẩm PCR;

- Khẳng định việc nhận dạng của sản phẩm PCR và/hoặc;

- Khẳng định bằng phương pháp cấy vi sinh vật chuẩn (ví dụ: tiêu chuẩn quốc tế).

3. Thuốc thử của Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 7682:2007

Trong mọi trường hợp, chỉ sử dụng các thuốc thử tinh khiết phân tích thích hợp cho các ứng dụng sinh học phân tử. Nhìn chung, nên lấy các lượng cần thiết của các dung dịch phản ứng cho phép thử PCR và bảo quản chúng trong các điều kiện thích hợp, ví dụ: ở nhiệt độ -20 °C.

- ADN polymeraza

Polymeraza chịu nhiệt (có thể bao gồm hoạt tính transcriptaza phiên mã ngược) được dùng cho PCR. Polymeraza chịu nhiệt có thể đã được tinh sạch, emzym tự nhiên, hoặc dạng enzym kết hợp của công nghệ gen đã được tinh sạch.

Sử dụng theo hướng dẫn của nhà sản xuất.

Mỗi một ADN polymeraza có thể cần đến các điều kiện thực nghiệm khác nhau, ví dụ: dung dịch đệm, nhiệt độ.

- Transcriptaza phiên mã ngược

Emzym này được sử dụng để sao chép ARN trong ADN (cADN) đơn bội bổ sung có thể khuếch đại bằng các PCR tiếp theo.

Sử dụng theo hướng dẫn của nhà sản xuất.

- Dung dịch đệm phản ứng

Dung dịch đệm thích hợp cần sử dụng theo hướng dẫn của nhà sản xuất. Các thuốc thử đã chuẩn bị sẵn có bán sẵn trên thị trường. Các vật liệu được dùng để chuẩn bị dung dịch đệm PCR phải ổn định ở điều kiện bảo quản và điều kiện chu trình nhiệt.

Sử dụng theo hướng dẫn của nhà sản xuất.

- Dung dịch deoxyribonucleosit triphosphat (dNTP) cho PCR

Cần sử dụng các dung dịch chứa dATP, dCTP, dGTP, dTTP và/hoặc dUTP loại sinh học phân tử thích hợp. Các dung dịch này phải bền trong quá trình bảo quản và trong các điều kiện PCR. Các dung dịch này có bán sẵn trên thị trường.

- Mồi

Mồi được chọn dựa theo trình tự đặc biệt để phát hiện ADN của vi sinh vật đích.

- Nước

Đối với phản ứng khuếch đại, chỉ sử dụng nước không chứa DNaza và RNaza. Nước tinh khiết thích hợp có bán sẵn trên thị trường.

- Magie clorua (MgCl2)

Muối này là một thành phần của dung dịch đệm phản ứng hoặc dung dịch tách chiết.

- Hóa chất để phát hiện các sản phẩm PCR

Hóa chất được dùng cho hệ thống phát hiện được mô tả trong phương pháp PCR phải có chất lượng phù hợp.

- Các thuốc thử bổ sung tùy chọn

+ Dầu khoáng

Loại dầu này được pha vào hỗn hợp phản ứng để giảm sự bay hơi trong chu trình nhiệt.

+ Chất xúc tác

Các chất như polyetylen glycol hoặc albumin huyết thanh bò có thể được bổ sung vào phản ứng PCR để giảm ức chế do các chất nền [1] gây ra.

+ Chất ức chế RNaza

Các chất này được bổ sung vào RT-PCR để tránh việc suy giảm chất lượng của ARN đích do enzym RNaza gây ra, mà có thể làm nhiễm bẩn thuốc thử hoặc dụng cụ bằng chất dẻo trong qui trình tách chiết. Các chất ức chế này có bán sẵn trên thị trường.

+ Thuốc thử để ngăn ngừa việc lây nhiễm từ các sản phẩm PCR

Để tránh làm nhiễm bẩn tiếp theo, hệ thống khử nhiễm (ví dụ: dựa vào psoralen, dUTP và UNG) có thể bao gồm trong hệ thống PCR để giảm thiểu nguy cơ lây nhiễm từ các sản phẩm PCR được tạo ra trong các phản ứng PCR trước đó.

- Nội dung nêu trên là phần giải đáp, tư vấn của chúng tôi dành cho khách hàng của Pháp luật doanh nghiệp. Nếu quý khách còn vướng mắc, vui lòng gửi về Email khoinghiep@thuvienphapluat.vn.

- Nội dung bài viết mang tính chất tham khảo;

- Điều khoản được áp dụng có thể đã hết hiệu lực tại thời điểm bạn đang đọc.