Phân tích bằng HPLC để xác định myo-inositol trong thức ăn công thức dành cho trẻ sơ sinh và thực phẩm dinh dưỡng cho người lớn theo TCVN 11912:2017 như thế nào?

Nội dung chính

• Thuốc thử và vật liệu thử nào được dùng để xác định myo-inositol trong thức ăn công thức dành cho trẻ sơ sinh và thực phẩm dinh dưỡng cho người lớn?
• Việc phân tích bằng HPLC để xác định myo-inositol trong thức ăn công thức dành cho trẻ sơ sinh và thực phẩm dinh dưỡng cho người lớn theo TCVN 11912:2017 như thế nào?
• Thiết bị, dụng cụ nào được sử dụng để để xác định myo-inositol trong thức ăn công thức dành cho trẻ sơ sinh và thực phẩm dinh dưỡng cho người lớn?

Thuốc thử và vật liệu thử nào được dùng để xác định myo-inositol trong thức ăn công thức dành cho trẻ sơ sinh và thực phẩm dinh dưỡng cho người lớn?

Tại Mục 4 Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 11912:2017 có quy định thuốc thử và vật liệu thử được dùng để xác định myo-inositol trong thức ăn công thức dành cho trẻ sơ sinh và thực phẩm dinh dưỡng cho người lớn bao gồm:

Trong quá trình phân tích, sử dụng thuốc thử loại tinh khiết phân tích và nước sử dụng được là nước cất hoặc nước đã loại khoáng hoặc nước có độ tinh khiết tương đương, trừ khi có quy định khác.

- Hóa chất và dung môi

+ Axit axetic băng.

+ Cloroform, có độ tinh khiết cao, dùng cho phân tích HPLC.

+ Dietyl ete khan, dùng cho phân tích HPLC.

+ Drierite (chất hút ẩm), canxi sulfat khan, 8 mesh.

+ Heli, loại zero hoặc tương đương.

+ Hexan, dùng cho phân tích HPLC.

+ Axit clohydric, đặc (36% đến 38%).

+ Axit metaphosphoric.

+ Metanol, dùng cho phân tích HPLC.

+ Myo-inositol, chất chuẩn đầu của lô hàng chính thức, được bảo quản khô. Độ tinh khiết được ghi trên nhãn.

+ Natri clorua.

+ Natri hydroxit, 50% (khối lượng), dạng carbonat thấp.

- Chuẩn bị dung dịch thuốc thử và dung dịch chuẩn

+ Yêu cầu chung

Tất cả các dung dịch được chuẩn bị ở quy mô phù hợp với thực hành phòng thí nghiệm tốt. Các dung dịch có thể được bảo quản trong tủ lạnh hoặc ở nhiệt độ phòng, đựng trong vật chứa trơ, kín khí, trừ khi có quy định khác.

+ Dung dịch chuẩn gốc myo-inositol, khoảng 2 000 mg/l.

Cân chính xác 0,100 g myo-inositol và chuyển định lượng sang bình định mức 50 ml. Pha loãng bằng nước đến vạch. Trộn kỹ. Bảo quản trong tủ lạnh, dung dịch này sử dụng được trong 3 tháng.

+ Dung dịch chuẩn trung gian myo-inositol, khoảng 200 mg/l.

Pha loãng 10,0 ml dung dịch myo-inositol gốc (4.2.2) bằng nước đến 100 ml và trộn kỹ. Loại bỏ dung dịch sau khi sử dụng.

+ Chuẩn bị các dung dịch chuẩn hiệu chuẩn

Dung dịch chuẩn hiệu chuẩn myo-inositol nồng độ cao, khoảng 4 mg/l, 2 mg/l, 1 mg/l và 0,5 mg/l.

Pha loãng các lượng: 2,0 ml, 1 ml và 0,5 ml dung dịch chuẩn trung gian myo-inositol (4.2.3) bằng nước đến 100 ml đựng trong các bình định mức riêng. Pha loãng 0,5 ml dung dịch chuẩn trung gian myoinositol (4.2.3) bằng nước đến 200 ml. Dung dịch này sử dụng được trong 2 tuần.

Dung dịch chuẩn hiệu chuẩn myo-inositol nồng độ thấp, khoảng 0,2 mg/l và 0,05 mg/l.

Pha loãng các lượng: 4 ml và 1 ml dung dịch chuẩn hiệu chuẩn myo-inositol 0,5 mg/l bằng nước đến 10 ml đựng trong các bình định mức riêng. Dung dịch này sử dụng được trong 2 tuần.

+ Dung dịch axit clohydric, 0,5%

Cho 1,25 ml axit clohydric đặc vào khoảng 200 ml nước đựng trong bình định mức 250 ml. Thêm nước đến vạch và trộn kỹ. Dung dịch này sử dụng được trong 6 tháng.

+ Dung dịch natri clorua, 1 mol/l

Hòa tan 5,8 g natri clorua và pha loãng bằng nước đến 100 ml. Dung dịch này sử dụng được trong 1 tháng.

+ Dung dịch natri hydroxit, 0,12% hoặc 30 mmol (Bơm 1).

Cân nhanh 4,8 g ± 0,1 g natri hydroxit 50% cho vào bình định mức 2000 ml có chứa khoảng 1 900 ml nước. Điều quan trọng là natri hydroxit không hấp thụ carbon dioxit từ không khí. Xoay bình để trộn kỹ. Thêm nước đến vạch và trộn kỹ lại. Dung dịch này sử dụng được trong 1 tháng.

+ Dung dịch natri hydroxit, 4,0% hoặc 1 mmol (Bơm 2).

Cân nhanh 160 g ± 3 g natri hydroxit 50% cho vào bình định mức 2000 ml có chứa khoảng 1900 ml nước. Điều quan trọng là natri hydroxit không hấp thụ carbon dioxit từ không khí. Xoay bình để trộn kỹ. Thêm nước đến vạch và trộn kỹ lại. Dung dịch này sử dụng được trong 1 tháng.

+ Axit metaphosphoric, 6%

Cân 6,0 g axit metaphosphoric cho vào bình định mức 100 ml. Hòa tan và thêm nước đến vạch và trộn kỹ lại. Bảo quản trong tủ lạnh. Dung dịch này sử dụng được trong 1 tuần.

+ Dung dịch chiết phosphatidylinositol, chuẩn bị dung dịch mới trong ngày sử dụng.

Cloroform:metanol (2:1). Trộn 60 ml cloroform với 30 ml metanol.

Hexan:dietyl ete (80:20). Trộn 80 ml hexan với 20 ml dietyl ete.

Hexan:dietyl ete (50:50). Trộn 50 ml hexan với 50 ml dietyl ete.

Metanol:cloroform:nước (75:15:10). Trộn 75 ml metanol, 15 ml cloroform và 10 ml nước.

Phân tích bằng HPLC để xác định myo-inositol trong thức ăn công thức dành cho trẻ sơ sinh và thực phẩm dinh dưỡng cho người lớn theo TCVN 11912:2017 như thế nào? (Hình từ Internet)

Việc phân tích bằng HPLC để xác định myo-inositol trong thức ăn công thức dành cho trẻ sơ sinh và thực phẩm dinh dưỡng cho người lớn theo TCVN 11912:2017 như thế nào?

Tại Tiểu mục 6.3 Mục 6 Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 11912:2017 có quy định việc phân tích bằng HPLC để xác định myo-inositol trong thức ăn công thức dành cho trẻ sơ sinh và thực phẩm dinh dưỡng cho người lớn như sau:

(1) Điều kiện hoạt động của thiết bị

(2) Cài đặt PAD có điện cực bằng vàng

Dải analog: 1 μC

Chương trình detector: Dionex ICS 3000 hoặc ICS 50003)

Thời gian tích phân: 0,20 s đến 0,40 s.

Ví dụ sắc ký đồ chuẩn điển hình được nêu trong Phụ lục A.

(3) Khởi động thiết bị

Chuẩn bị các pha động. Nếu cần, thổi khí heli các pha động và/hoặc điều áp các bể pha động. Làm sạch và làm bóng điện cực làm việc bằng vàng.

Bật detector và bơm pha động khắp cột ở tốc độ dòng 0,40 ml/min trong ít nhất 30 min để cân bằng hệ thống, nếu cần. Kiểm tra độ ổn định của detector trước khi bắt đầu phân tích. Bơm 20 μl dung dịch chuẩn có nồng độ cao nhất ít nhất 5 lần và ghi lại diện tích hoặc chiều cao pic.

Nếu hệ thống đã cân bằng, thì độ lệch chuẩn tương đối (RSD) của diện tích hoặc chiều cao pic của ba lần bơm sau cùng cần ≤ 2,0%.

(4) Phân tích chất chuẩn và mẫu

Khi hệ thống đã cân bằng, bơm một chất chuẩn của mỗi nồng độ (4.2.4 và 4.2.5). Sau khi bơm xong dãy chất chuẩn, có thể bơm các mẫu kiểm soát và mẫu thử trước khi bơm dãy chất chuẩn khác.

(5) Tắt hệ thống

Sau khi phân tích xong tất cả các mẫu chuẩn và mẫu thử, bơm 20 μl nước để làm sạch kim và ống của bộ lấy mẫu tự động. Bảo quản cột phân tích trong pha động [natri hydroxit 0,12% (30 mmol/l)]. Tắt cuvet điện hóa. Dùng nước thổi sạch đầu bơm để loại hết natri hydroxit.

Thiết bị, dụng cụ nào được sử dụng để để xác định myo-inositol trong thức ăn công thức dành cho trẻ sơ sinh và thực phẩm dinh dưỡng cho người lớn?

Tại Mục 5 Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 11912:2017 có quy định thiết bị, dụng cụ được sử dụng để để xác định myo-inositol trong thức ăn công thức dành cho trẻ sơ sinh và thực phẩm dinh dưỡng cho người lớn bao gồm:

- Cân phân tích, có thể cân được ít nhất 0,000 1 g.

- Máy ly tâm.

- Bình hút ẩm.

- Bộ làm bay hơi nitơ, có nồi cách thủy hoặc dụng cụ tương đương.

- Tủ sấy, có thể duy trì nhiệt độ ở 120 °C.

- Máy đo pH, do được pH 4 và 7 dung dịch đệm.

- Đĩa xoay, nhiều vị trí có các thanh khuấy.

- Ống hút chân không.

- Máy trộn vortex.

- Hệ thống HPLC, có các bộ phận chống ăn mòn bao gồm bộ lấy mẫu tự động, hai bơm đẳng dòng, van chuyển đổi 6 cổng, detector đo ampe xung có điện cực bằng vàng và ống nối PEEK hoặc polytetrafluoroetylen (PTFE) đường kính trong 0,18 mm đến 0,25 mm (0,007 in đến 0,01 in). Bộ lấy mẫu tự động có thể bơm được 20 μl.

- Cột, Dionex CarboPac1) MA1 (4 mm x 250 mm) P/N, 44066, MA1 (4 mm x 50 mm) P/N 44067 và PA1 (4 mm x 50 mm) P/N 43096 hoặc tương đương.

- Cốc có mỏ, các loại dung tích khác nhau.

- Ống ly tâm, dung tích 50 ml, có nắp phủ polytetrafluoroetylen (PTFE).

- Bộ lọc xyranh, polyamid, cỡ lỗ 0,45 μm và 0,2 μm.

- Giấy lọc, Whatman 2V1) hoặc tương đương.

- Bình nón, dung tích 50 ml hoặc 125 ml hoặc tương đương.

- Bình định mức, các loại dung tích khác nhau.

- Phễu, thích hợp để sử dụng với giấy lọc.

- Pipet định mức, các loại dung tích khác nhau.

- Cột chiết pha rắn (SPE), 1 g silica2).

- Xyranh, dung tích 1 ml dùng một lần và dung tích 25 ml bằng thủy tinh kín khí có kim bằng thép không gỉ 100 mm (4 in).

Trân trọng!