Thử nghiệm in vitro là gì? Yêu cầu chung đối với thử nghiệm in vitro lên các chất kháng nấm theo TCVN 13417:2021 như thế nào?

Nội dung chính

• Thử nghiệm in vitro là gì?
• Yêu cầu chung đối với thử nghiệm in vitro lên các chất kháng nấm theo TCVN 13417:2021 như thế nào?
• Quy trình thử nghiệm in vitro lên các chất kháng nấm có các bước nào?
• Kiểm soát chất lượng thử nghiệm in vitro lên các chất kháng nấm bằng cách nào?

Thử nghiệm in vitro là gì?

Thử nghiệm in vitro (IVT) là một kỹ thuật khoa học được sử dụng để nghiên cứu các tế bào và mô sống trong môi trường được kiểm soát bên ngoài cơ thể. IVT có nghĩa là "trong thủy tinh", đề cập đến việc sử dụng các đĩa petri, ống nghiệm và các dụng cụ thủy tinh khác để nuôi cấy tế bào.

Mặt khác theo Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 13417:2021 các thử nghiệm tính nhạy in vitro được thực hiện trên các vi sinh vật bị nghi ngờ gây bệnh, đặc biệt nếu sinh vật được cho là thuộc về loài có thể biểu hiện khả năng kháng thuốc đối với các thuốc kháng sinh sử dụng thường xuyên.

Thử nghiệm in vitro là gì? Yêu cầu chung đối với thử nghiệm in vitro lên các chất kháng nấm theo TCVN 13417:2021 như thế nào? (Hình từ Internet)

Yêu cầu chung đối với thử nghiệm in vitro lên các chất kháng nấm theo TCVN 13417:2021 như thế nào?

Căn cứ theo Mục 3 Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 13417:2021, yêu cầu chung đối với thử nghiệm in vitro lên các chất kháng nấm liên quan đến các bệnh nhiễm trùng là phải được thực hiện trong các khay vi pha loãng bằng nhựa sử dụng một lần. Phương pháp này dựa trên việc chuẩn bị các dung dịch làm việc chứa chất kháng nấm với độ mạnh tăng lên gấp đôi ở thể tích 100 μl mỗi giếng và bổ sung chất cấy cũng với thể tích 100 μl.

Mặt khác, môi trường nuôi chất kháng nấm liên quan đến các bệnh nhiễm trùng bằng phương pháp thử nghiệm in vitro phải đảm bảo các điều kiện sau:

[1] Yêu cầu chung: Phải sử dụng canh thang RPMI-1640 (xem Phụ lục A để biết chi tiết về việc chuẩn bị hai phiên bản canh thang đường glucose RPMI 1640).

[2] Cách đọc trực quan bằng mắt:

Môi trường RPMI-1640 cần chứa 0,2 % glucose. Chuẩn bị canh thang RPMI-1640 và chia thành các dung dịch cùng thể tích với mức pha loãng gấp đôi chất kháng nấm và cung cấp chất cấy vào thể tích tương đương canh thang RPMI-1640.

[3] Cách đọc quang phổ kế:

Môi trường RPMI-1640 cần chứa 2 % glucose. Chuẩn bị canh thang RPMI-1640 và các chất kháng nấm ở độ mạnh thay đổi gấp đôi, sau đó thêm chất cấy chứa trong cùng một thể tích nước cất.

Quy trình thử nghiệm in vitro lên các chất kháng nấm có các bước nào?

Căn cứ theo Mục 3 Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 13417:2021, quy trình thử nghiệm in vitro lên các chất kháng nấm liên quan đến các bệnh nhiễm trùng bao gồm các bước như sau:

- Yêu cầu chung

- Yêu cầu đối với môi trường nuôi

- Yêu cầu đối với chất kháng nấm

- Bảo quản các khay vi pha

- Chuẩn bị chất cấy - yêu cầu chung

- Cấy vào các khay vi pha loãng

- Ủ các khay vi pha loãng

- Đọc kết quả MIC

- Diễn giải MIC

Kiểm soát chất lượng thử nghiệm in vitro lên các chất kháng nấm bằng cách nào?

Theo quy định tại Mục 4 Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 13417:2021, kiểm soát chất lượng thử nghiệm in vitro lên các chất kháng nấm bằng cách sử dụng đồng thời các chủng đối chứng (quy định tại Bảng 4 và Bảng 5).

- Các chủng đối chứng gốc phải được bảo quản đông khô hoặc đông lạnh (-70 °C đối với phương pháp đọc trực quan; -60 °C đối với phương pháp đọc quang phổ).

- Chuẩn bị các nuôi cấy làm việc bằng cách nuôi các chủng gốc trên môi trường thạch không ức chế.

- Chỉ có thể tạo ra các nuôi cấy phụ nữa từ nuôi cấy làm việc ban đầu. Thường xuyên thay thế chúng bằng các tủ đông nghiêng mới được chuẩn bị từ nguồn cung trong tủ đông ít nhất hai tuần một lần.

- Khi có sẵn, mỗi ngày nên thử nghiệm ít nhất hai chủng QC liên quan đến thử nghiệm đang tiến hành.

- Các khuẩn lạc thử nghiệm của các mẫu cấy đối chứng được xử lý giống như các mẫu nuôi thông thường. MIC của các chất kháng nấm đối với vi sinh đối chứng phải nằm trong phạm vi quy định trong Bảng 4 và bảng 5.

- Nếu gặp phải giá trị nằm ngoài các giá trị đối chứng, nên lặp lại thử nghiệm để xác định xem các bước thiết yếu của quy trình hiện đã được kiểm soát tốt chưa.

- Nếu tiếp tục quan sát thấy các giá trị ngoài đối chứng thì phải kiểm tra cẩn thận tất cả các khía cạnh của quy trình và tạm dừng thử nghiệm thêm tham chiếu cho đến khi các giá trị đối chứng lại nằm trong phạm vi chính xác.

Trân trọng!