Tên
chỉ tiêu
|
Mức
trong 1 g sản phẩm
|
1. Tổng số vi sinh vật hiếu khí
không lớn hơn
2. Escherichia coili
3. Staphilococcus aureus
4. Salmonella, Shigela
5. Số trực khuẩn Coli (coliform)
không lớn hơn
|
50
000
Không
cho phép
Không
cho phép
Không
cho phép
200
|
2. PHƯƠNG PHÁP THỬ
2.1. Dụng cụ, hóa chất và môi
trường kiểm nghiệm
Máy nghiền hoặc cối nghiền có bi thủy
tinh;
Đèn cồn hoặc đèn khí (gaz);
Que cấp các loại;
Dao, kéo, panh, thìa nhôm to, nhỏ,
Khay men hoặc thép không gỉ 350 x
250 mm;
Ống nghiệm các loại 12; 16 và 18
mm;
Đĩa petri;
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Pipet pattơ;
Bông thấm nước;
Cồn etylic 70 và 900;
Môi trường các loại dùng kiểm tra
vi sinh vật;
Các hóa chất đã quy định trong kiểm
tra vi sinh vật hải sản;
Lọ đựng dung dịch sát trùng sunfocrômic,
natrihyđroxyt để bỏ các pipet đã dùng;
Các loại tủ ấm có nhiệt độ 37 và 44
± 0,50C;
Kính hiển vi và các dụng cụ để
nhuộm, soi tiêu bản;
Cân kỹ thuật;
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Tủ hấp vô trùng (autoclave).
Chú thích: Toàn bộ dụng cụ
kiểm nghiệm phải bảo đảm vô trùng
2.2. Lấy mẫu: theo TCVN 2068 - 77.
2.3. Chuẩn bị mẫu
2.3.1. Xử lý mẫu kiểm tra
Mẫu thủy sản đưa về phòng thí
nghiệm được mở ra cho vào các khay vô trùng, đưa vào buồng vô trùng để pha mẫu
trực tiếp và tiến hành kiểm nghiệm.
2.3.2. Chọn và pha loãng mẫu để
nuôi cấy vi sinh vật.
Dùng dụng cụ vô trùng cắt chọn mẫu
hải sản (trên mỗi mẫu cắt từ 4 hoặc 5 điểm khác nhau. Lượng mẫu ban đầu lấy
khoảng 50 đến 100 g cho vào cối sứ vô trùng nghiền nát.
Cân 10g mẫu đã nghiền nát cho vào
bình tam giác (erlenmeyer) có 90ml dung dịch nước muối sinh lý (NaCl 8,5 %) có
bi thủy tinh, lắc đều, để lắng cặn. Dung dịch mẫu này được coi là có đậm độ pha
loãng 10-1
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Mục đích pha loãng nhằm làm thế nào
để khi nuôi cấy ở mỗi đĩa petri chỉ mọc khoảng 30 - 300 khuẩn lạc.
Lắc đều các mẫu pha loãng để chuẩn
bị nuôi cấy vi sinh vật.
2.4. Kiểm tra tổng số vi sinh vật
hiếu khí.
2.4.1. Dùng thạch thường đun nóng
chảy, đổ vào các đĩa petro, để nguội đến 450C, cấy sản phẩm và lắc
nhẹ để trộn đều. Mỗi lần kiểm tra phải nuôi cấy 3 đậm độ pha loãng mẫu, mẫu đậm
độ cấy 1 ml dung dịch vào 15 - 20 ml thạch thường để trong tủ ấm ở nhiệt độ 370C,
đọc kết quả sau 24 giờ.
2.4.2. Nuôi cấy vi sinh vật
Tốt nhất nên dùng mỗi pipet cho một
đậm độ pha loãng, nếu ít pipet có thể dùng một pipet hút sản phẩm nuôi cấy
nhưng phải tôn trọng nguyên tắc cấy từ đậm độ loãng đến đậm độ đặc. Dung dịch
nuôi cấy phải được nhỏ vào trung tâm đĩa petri. Từ lúc nhỏ dung dịch nuôi cấy
đến khi đổ thạch, không để lâu quá 15 phút. Thạch được đun nóng chảy và để
nguội đến 450C.
Sau khi đổ thạch lắc nhẹ đĩa petri
cho dung dịch nuôi cấy và thạch trộn đều sau đó lắc vòng tròn theo chiều kim
đồng hồ 5 vòng và lắc ngược lại 5 vòng (trên mặt bàn nuôi cấy). Để thạch nguội
cho vào tủ ấm 370C trong thời gian 24 giờ.
2.4.3. Đọc kết quả.
Dùng mắt thường hoặc kính lúp có độ
phóng đại 2 - 3 lần để đếm khuẩn lạc mọc trên các đĩa petri. Chỉ đếm số khuẩn
lạc trên các đĩa có từ 30 - 300 khuẩn lạc.
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
2.5. Kiểm tra trực khuẩn coli
(coliform)
2.5.1. Dùng thạch Tudo, Istrati,
V.B.L.R, Desoxyclolate, lactose.
Phương pháp phát hiện giống như mục
2.4.
2.5.2. Nuôi cấy vi sinh vật
Tùy mức độ nhiễm bẩn của mẫu để
quyết định sử dụng các đậm độ pha loãng khác nhau. Nhất thiết không dùng 1 đậm
độ pha loãng để nuôi cấy.
Dùng pipet hút 1ml dung dịch pha
loãng được chọn, đổ ra đĩa petri, đổ 15 - 20 ml thạch đã đun và để nguội ở 450C,
lắc đều. Để các đĩa petri vào tủ ấm ở 370C trong thời gian 24 - 48
giờ.
2.5.3. Đọc kết quả
Các khuẩn lạc vi sinh vật mọc ở đĩa
Endo có màu đỏ, có hoặc không có ánh kim, hoặc các khuẩn lạc mọc trên đĩa
Istrati có màu vàng đều được coi là trực khuẩn coli.
Đếm số khuẩn lạc coliform: Nhân số
khuẩn lạc coliform đếm được trên mỗi đĩa thạch với nồng độ pha loãng tương ứng
rồi lấy trung bình cộng của các nồng độ khác nhau để tính tổng số coliform
trong 1g mẫu. Nhuộm gram 1 số khuẩn lạc có màu trong các đĩa thạch để xác định
những vi sinh vật gram âm và kết luận.
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
2.6.1. Phương pháp định tính:
2.6.1.1. Dùng: Canh thang mật bò
lục sáng lactose 2%;
Nước pepton;
Thạch Endo, Istrati, V.B.L.R,
Desoxycholate lactose;
Thạch Simmons (natri xitrat).
2.6.1.2. Nuôi cấy vi sinh vật:
Nhỏ vài giọt mẫu vào một ống canh
thang mật bò lục sáng lactose 2% để ở 440C trong 24 giờ, đọc kết quả
sơ bộ căn cứ vào sự lên men đường lactose (sinh hơi hoặc không sinh hơi).
Nhuộm gram.
Cấy truyền sang một ống nước pepton
(để thử Indol), một đĩa thạch Istrati (hoặc Endo, V.B.L.R…) một ống thạch
Simmons và giữ ở 440C trong 24 giờ.
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Canh thang mật bò lục sáng lactose
2%: (+);
Trực khuẩn gram âm;
Indol (+)
Thạch Istrati: trên các vết cấy có
khuẩn lạc màu vàng;
Thạch Endo: Trên các vết cấy có
khuẩn lạc màu đỏ (có hoặc không có ánh kim);
Thạch Simmons: khuẩn lạc màu xanh
lục (-).
BẢNG
PHÂN BIỆT CÁC E.COLI CÓ NGUỒN GỐC TỪ PHÂN
Vi
sinh vật
Lactose
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Simmons
Ghi
chú
E.Coli
Có
hơi
+
-
E.coli
phân
E.Coli
Không
hơi
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
-
E.coli
phân
E.Coli interme-dium
Có
hơi
+
hay -
+
Không
từ phân
E.Coli freundi
Có
hơi
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
+
nt
Aerobacter
Có
hơi
-
+
nt
Chú thích: Có thể tiếp tục
làm các phản ứng liên kết với những kháng huyết thanh đặc hiệu.
2.6.2. Kiểm tra định lượng
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Nước pepton;
Thạch Simmons;
Thạch Istrati, Endo, V.B.L.R.
2.6.2.2. Nuôi cấy vi sinh vật
Mỗi mẫu hải sản kiểm tra dùng 9 ống
canh thang mật bò lục sáng lactose 2% cứ 3 ống nuôi cấy một đậm độ pha loãng,
để tủ ấm 44 ± 0,50C trong 24 giờ.
Căn cứ sự lên men đường lactose
(sinh hơi hoặc không sinh hơi) nhuộm gram xem có phải là trực khuẩn gram âm
không. Cứ mỗi ống canh thang mật bò lục sáng lactose 2% dương tính được cấy
truyền sang một đĩa thạch Istrati hoặc Endo, một ống pepton và một ống thạch
Simmons, để ở 44 ± 0,50C trong 24 giờ. Đánh giá sự có mặt của E.coli
dựa theo Test Mac kenzie. Cụ thể tính số lượng E.coli theo bảng Maccrady:
BẢNG
MACCRADY
Số
ống dương tính
Ước
lượng số coli
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Ước
lượng số coli
Nguyên
chất
1/10
1/100
Nguyên
chất
1/10
1/100
0
0
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
0
0
1
1
1
1
1
1
1
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
2
2
2
2
2
2
2
0
0
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
1
2
0
0
0
1
1
2
2
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
0
0
0
1
1
1
2
0
1
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
1
0
0
1
2
0
1
0
1
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
0
1
2
0
1
2
0
0,0
0,3
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
0,6
0,6
0,4
0,7
1,1
0,7
1,1
1,1
1,5
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
0,9
1,4
2,0
1,5
2,0
3,0
2,0
2
2
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
2
2
2
3
3
3
3
3
3
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
3
3
3
3
3
3
3
3
2
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
2
3
3
3
0
0
0
1
1
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
1
2
2
2
2
3
3
3
3
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
2
3
0
1
2
0
1
2
0
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
2
3
0
1
2
3
0
1
2
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
3,0
3,5
4,0
3,0
2,5
4,5
2,5
4,0
6,5
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
7,5
11,5
16,5
9,5
15,0
20,0
30,0
25,0
45,0
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
140,0
Bảng trên đây dùng để tính kết quả
với các đậm độ pha loãng: nguyên chất; 1/10 và 1/100.
2.7. Kiểm tra Staphylococcus
Aureus:
2.7.1. Môi trường:
Môi trường tăng sinh: Canh thang
mặn NaCl;
Môi trường Chapmana;
Huyết tương thỏ để thử coagulaza,
2.7.2. Nuôi cấy vi sinh vật:
Cấy 10ml mẫu pha loãng 1/10 vào môi
trường canh thang mặn NaCl để ở 370C trong 24 giờ.
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
2.7.3. Đọc kết quả
Chọn khuẩn lạc vàng da cam thể
Smooth (tròn nhẵn, bờ đều);
Lên men đường mannit
Nhuộm gram: Khuẩn lạc tụ cầu hình
chùm nho;
Tiếp tục làm phản ứng Coagulaza:
Hút 0,5 ml huyết tương thỏ vào ống
nghiệm 12 mm, cho vào ống vài giọt canh trùng hoặc khuẩn lạc nghi vấn đã nuôi cấy
24 giờ, để tủ ấm nhiệt độ 370C thời gian 24 giờ, đọc kết quả sau 6
giờ.
Chú thích: Thí nghiệm phải
kèm theo 2 ống nghiệm đối chứng:
- Một ống đối chứng âm tính không
có vi khuẩn mà chỉ cấy với huyết tương thỏ vài giọt nước muối sinh lý (NaCl 8,5
%), Kết quả dương tính được xác định khi huyết tương thỏ đã cấy vi khuẩn bị động.
Phản ứng DNA có thể thay thế phản ứng Cosgulaja
- Một ống nghiệm đối chứng đã cấy
tụ cầu khuẩn gây bệnh chuẩn có sẵn trong phòng thí nghiệm.
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66