Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 6189-2:1996 chất lượng nước - Phát hiện và đếm khuẩn liên cầu phân

• Số hiệu: TCVN6189-2:1996
• Loại văn bản: Tiêu chuẩn Việt Nam
• Nơi ban hành: Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường chất lượng
• Người ký: ***
• Ngày ban hành: 27/11/1996

Proteose pepton	10,0 g
Cao men	10,0 g
Natri clorua (NaCl)	5,0 g
Natri glycerophotphat	10,0 g
Mantoza	20,0 g
Lactoza	1,0 g
Natri nitrua (NaN3)	0,4 g
Bromocresol tía [dung dịch cồn etanol (15 g/l)]	1 ml
Thạch	12 – 20 g1)
Nước	1 000 ml

Hòa các thành phần trong nước bằng cách đun sôi trong nồi cách thủy.

Sau khi hòa tan hoàn toàn, đun thêm 5 phút.

Để nguội đến 50^oC – 60^oC.

6.2.1.2. Dung dịch TTC

2,3,5 – triphenyltetrazolium clorua

1 g

Nước

100 ml

Hòa tan thuốc nhuộm trong nước bằng cách lắc.

...

...

...

Bảo quản dung dịch khỏi tác động của ánh sáng.

6.2.1.3. Dung dịch hoàn chỉnh

Dung dịch cơ bản (6.2.1.1)

1 000 ml

Dung dịch TTC (6.2.1.2)

10 ml

Thêm dung dịch TTC vào dung dịch cơ bản đã được làm nguội đến 50^oC ¸ 60^oC. TTC kém bền vững với nhiệt vì vậy tránh để quá nhiệt độ trên.

Nếu cần, điều chỉnh pH đến 7,2 bằng dung dịch natri cacbonat đã khử trùng (100 g/l).

Rót môi trường vào đĩa petri để có được độ dày môi trường ít nhất 3 mm và để yên trên một mặt phẳng nằm ngang, chỗ mát.

...

...

...

6.2.2. Thạch m-enterococcus (Slanetz và Bartley)

6.2.2.1. Môi trường cơ bản

Tryptoza

20,0 g

Cao men

5,0 g

Glucoza

2,0 g

Dikali hidrophotphat (K₂HPO₄)

...

...

...

Natri nitrua (NaN₃)

0,4 g

Thạch

15,0 g

Nước

1 000 ml

Hòa tan các thành phần trong nước bằng cách đun trong nồi cách thủy.

Sau khi hòa tan hoàn toàn đun thêm 5 phút.

Làm nguội đến 50^oC ¸ 60^oC.

...

...

...

Xem 6.2.1.2.

6.2.2.3. Môi trường hoàn chỉnh

Môi trường cơ bản (6.2.2.1)

1 000 ml

Dung dịch TTC (6.2.2.2)

10 ml

Thêm dung dịch TTC vào dung dịch cơ bản đã làm nguội đến 50^oC ¸ 60^oC.

Nên cần, điều chỉnh pH đến 7,2 bằng dung dịch natri cacbonat (100 g/l).

Rót 20 ml vào các đĩa Petri đường kính 9 cm (hoặc lượng tương đương vào các đĩa có kích thước khác) và để yên trên một mặt phẳng nằm ngang, chỗ mát.

...

...

...

6.2.3. Thạch – Mật asculin – nitrua

Trypton

17,0 g

Pepton

3,0 g

Cao men

5,0 g

Mật bò khô

10,0 g

...

...

...

5,0 g

Asculin

1,0 g

Amoni-sắt (III) xitrat

0,5 g

Natri nitrua (NaN₃)

0,15 g

Thạch

12 – 20 g1)

...

...

...

1 000 ml

Hòa tan các thành phần trong nước bằng cách đun sôi.

Điều chỉnh pH sao cho sau khi khử trùng pH là 7,1 ± 0,1 ở 25^oC.

Phân phối vào các chai có dung tích 500 ml, có nút xoáy, mỗi chai 250 ml.

Khử trùng 15 phút ở 121^oC ± 1^oC.

Làm nguội đến 50^oC ¸ 60^oC và rót vào các đĩa Petri sao cho độ dày môi trường ít nhất 3 mm và để yên trên một mặt phẳng nằm ngang, chỗ mát.

6.3. Hidro peroxit, dung dịch 30 g/l.

7. Thiết bị

Các thiết bị của phòng thí nghiệm phân tích vi sinh thông thường, và

...

...

...

7.2. Màng lọc khử trùng với kích thước lỗ danh định 0,45 mm

Chất lượng màng lọc của các hãng và giữa các lô có thể khác nhau. Do đó, nên kiểm tra chất lượng theo qui định của ISO 7704.

7.3. Tủ ấm, có thể duy trì được nhiệt độ ở 35^oC ± 1^oC hoặc 37^oC ± 1^oC.

7.4. Tủ ấm, có thể duy trì được nhiệt độ ở 44^oC ± 0,5^oC.

7.5. Nồi hấp áp lực, có thể duy trì được nhiệt độ 121^oC ± 1^oC.

8. Lấy mẫu

Xem ISO 5667-1; TCVN 5992:1995 (ISO 5667-2) và TCVN 5993:1995 (ISO 5667-3).

9. Cách tiến hành

9.1. Xử lý mẫu

...

...

...

9.2. Lọc và nuôi cấy

Các qui định chung của kỹ thuật màng lọc sẽ được xây dựng thành tiêu chuẩn trong thời gian tới.

Lọc một thể tích nước thích hợp.

Đặt màng lọc lên mặt thạch – KF streptococcus (6.2.1) hoặc thạch m-enterococcus (6.2.2).

Nuôi các đĩa ở 35^oC ± 1^oC hoặc ở 37^oC ± 1^oC trong 44 giờ ± 4 giờ.

9.3. Đếm

Sau khi nuôi, đếm tất cả các khuẩn lạ đã mọc có màu nâu đỏ hoặc màu hồng từ trung tâm hoặc toàn bộ khuẩn lạc. Các khuẩn lạc này được coi là liên cầu phân giả định.

Chú thích – Đôi khi các vi khuẩn khác nhóm liên cầu khuẩn nhóm D có thể sinh ra loại khuẩn lạc này. Việc nâng nhiệt độ ủ đến 44^oC ± 0,5^oC sau khi ủ giai đoạn đầu ở 37^oC ± 1^oC trong 5 giờ ± 1 giờ có thể ngăn ngừa sự sinh trưởng của các loại vi sinh vật này.

9.4. Khẳng định

...

...

...

Nuôi ở 44^oC ± 0,5^oC trong 48 giờ.

Xem xét tất cả các đĩa cho thấy các khuẩn lạc có màu từ nâu đến đen và/hoặc môi trường bao quanh có màu nâu hay đen như là loại cho phản ứng dương tính.

9.5. Phép thử catalaza

Nhỏ một giọt dung dịch oxi già (hidro peoxit) (6.3) lên các khuẩn lạc trên môi trường thạch-mật asculin nitrua (6.2.3). Sự xuất hiện các bọt nhỏ của oxy chứng tỏ các sinh vật catalaza dương tính. Chỉ có các khuẩn lạc catalaza âm tính mới được coi là liên cầu phân.

Chú thích – Để loại trừ các sai lầm do phản ứng catalaza âm tính giả có thể xảy ra trên môi trường thạch-mật asculin nitrua, phép thử này có thể lặp lại trên một mẫu cấy truyền lên môi trường không chọn lọc khác.

10. Biểu thị kết quả

Qui định chung về biểu thị kết quả và tính số vi khuẩn có trong mẫu sẽ được xây dựng thành tiêu chuẩn trong thời gian tới.

11. Báo cáo kết quả

Báo cáo kết quả bao gồm các thông tin sau:

...

...

...

b) mọi chi tiết cần thiết để nhận biết đầy đủ về mẫu;

c) môi trường chọn lọc, nhiệt độ nuôi cấy, và bất kỳ phép thử khẳng định nào đã sử dụng;

d) kết quả như đã nêu ở điều 10 theo số liên cầu phân giả định trên một thể tích mẫu;

e) số khuẩn lạc đã thử cũng như số liên cầu phân được khẳng định.