Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 9300:2014 về Vi sinh vật - hoạt tính đối kháng Ralstonia solanacearum héo xanh

• Số hiệu: TCVN9300:2014
• Loại văn bản: Tiêu chuẩn Việt Nam
• Nơi ban hành: ***
• Người ký: ***
• Ngày ban hành: Năm 2014

Bước tiến hành	Công thức đối chứng	Công thức thí nghiệm
Bước 1	Nhiễm môi trường dịch thể đã chuẩn bị sẵn (3.2.1) 30 min trước khi gieo (trồng), lượng tương đương với lượng nhiễm vi sinh vật đối kháng (5.2) ở công thức thí nghiệm.	Nhiễm dịch vi sinh vật đối kháng (5.2) vào đất đã được khử trùng (4.5.1) 30 min trước khi gieo (trồng); đảm bảo mật độ tế bào vi sinh vật không nhỏ hơn 10^6 CFU/g đất.
Bước 2	Ngâm hạt hoặc củ giống (4.5.3) trong dịch vi khuẩn Ralstonia solanacearum Smith gây bệnh héo xanh (5.1) có mật độ tế bào không nhỏ hơn 10^8 CFU/ml trong thời gian 30 min.	Ngâm hạt hoặc củ giống (4.5.3) trong dịch vi khuẩn Ralstonia solanacearum Smith gây bệnh héo xanh (5.1) có mật độ tế bào không nhỏ hơn 10^8 CFU/ml trong thời gian 30 min.
Bước 3	Gieo/trồng hạt/củ đã nhiễm vi khuẩn Ralstonia solanacearum Smith gây bệnh héo xanh vào đất đã chuẩn bị.	Gieo/trồng hạt/củ đã nhiễm vi khuẩn Ralstonia solanacearum Smith gây bệnh héo xanh vào đất đã chuẩn bị.

Thí nghiệm được chăm sóc theo qui trình phù hợp với từng đối tượng cây chủ; đảm bảo sự phát sinh, phát triển của vi khuẩn Ralstonia solanacearum Smith gây bệnh héo xanh, độ ẩm tương đối (RH) không nhỏ hơn 70 % (sử dụng nước vô trùng để giữ ẩm độ) và nhiệt độ đạt từ 25 °C đến 30°C;

Quan sát và theo dõi triệu chứng héo của cây sau 5 ngày đến 21 ngày gieo trồng, ghi lại những đánh giá về tình trạng mắc bệnh héo xanh của cây trồng (có hoặc không có triệu chứng mắc bệnh).

CHÚ THÍCH: Thử nghiệm phải bảo đảm hạn chế tối đa ảnh hưởng của các yếu tố phi thí nghiệm.

5.3.2.3. Tính kết quả

Tỷ lệ cây bị bệnh (%) được tính theo công thức (2):

Tỷ lệ cây bị bệnh (%) =

Số cây bị bệnh

x 100

(2)

...

...

...

So sánh tỷ lệ cây bị bệnh giữa công thức thí nghiệm với công thức đối chứng và đánh giá hoạt tính đối kháng của vi sinh vật theo các cấp độ nêu trong Bảng 1.

Bảng 1 - Mức độ hoạt tính đối kháng của vi sinh vật

Tỷ lệ cây bị bệnh (%)

Cấp độ đối kháng

Mức độ hoạt tính đối kháng

Không lớn hơn 30

1

Cao

Từ 31 đến 50

...

...

...

Khá

Từ 51 đến 70

3

Trung bình

Từ 71 đến 80

4

Yếu

Không nhỏ hơn 81

5

...

...

...

6. Báo cáo thử nghiệm

Báo cáo thử nghiệm cần bao gồm đầy đủ các thông tin sau:

- mọi thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ về mẫu thử;

- phương pháp lấy mẫu đã sử dụng, nếu biết;

- tất cả các thao tác không qui định trong tiêu chuẩn này, cùng với các chi tiết bất thường nào khác có thể ảnh hưởng đến kết quả;

- các kết quả thử nghiệm thu được;

- nếu độ lặp lại được kiểm tra, thì nêu kết quả cuối cùng thu được.

PHỤ LỤC A

...

...

...

THÀNH PHẦN MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY

A.1. Môi trường SP (Sucrose - Peptone)

Sacaroza (C₁₂H₂₂O₁₁)

20,0 g

Pepton

5,0 g

Dikali hydro phosphat (K₂HPO₄)

0,5 g

Magie sulphat ngậm bảy phân tử nước (MgSO₄.7H₂O)

...

...

...

Nước cất vừa đủ

1000 ml

pH

6,8 đến 7,0

CHÚ THÍCH: Nếu môi trường thạch đĩa thì bổ sung 20,0 g thạch.

A.2. Môi trường Thịt – Pepton

Chất chiết thịt bò

5,0 g

Pepton

...

...

...

Natri clorua (NaCl)

5,0 g

Nước cất vừa đủ

1000 ml

pH

6,8 đến 7,0

A.3. Môi trường Czapek - Dox

Sacaroza (C₁₂H₂₂O₁₁)

30,0 g

...

...

...

2,0 g

Kali clorua (KCI)

1,0 g

Kali dihydro phosphat (KH₂PO₄)

1,0 g

Magie sulphat ngậm bảy phân tử nước (MgSO₄.7H₂O)

0,5 g

Sắt sulphat ngậm bảy phân tử nước (FeSO₄.7H₂O)

0,01 g

...

...

...

1000 ml

pH

6,0 đến 6,5

CHÚ THÍCH:

1) pH môi của trường được điều chỉnh bằng axit axetic 1N

2) Nếu môi trường thạch đĩa thì bổ sung 20,0 g thạch.

A.4. Môi trường PD (Potato Dextrose)

Dextrose (C₆H₁₂O₆)

20,0 g

...

...

...

200,0 g

Thạch

20,0 g

Nước cất vừa đủ

1000 ml

pH

6,0 đến 6,5

CHÚ THÍCH:

1) Khoai tây thái nhỏ, cho vào 1 lít nước và đun sôi trong 20 min; sau đó lọc lấy nước trong để sử dụng làm môi trường;

...

...

...

3) Nếu môi trường thạch nghiêng hoặc thạch đĩa thì bổ sung 20,0 g thạch.

A.5. Môi trường Gauze

Tinh bột tan (C₆H₁₀O₅)_n)

20,0 g

Kali nitrat (KNO₃)

1,0 g

Kali dihydro phosphat (KH₂PO₄)

0,5 g

Magie sulphat ngậm bảy phân tử nước (MgSO₄.7H₂O)

...

...

...

Natri clorua (NaCI)

0,5 g

Sắt sulphat ngậm bảy phân tử nước (FeSO₄.7H₂O)

0,01 g

Nước cất vừa đủ

1000 ml

pH

7,0 đến 7,2

CHÚ THÍCH: Nếu môi trường thạch nghiêng hoặc thạch đĩa thì bổ sung 20,0 g thạch.

...

...

...

Tinh bột tan (C₆H₁₀O₅)_n)

10,0 g

Kali dihydro phosphat (KH₂PO₄)

1,0 g

Magie sulphat ngậm bảy phân tử nước (MgSO₄.7H₂O)

1,0 g

Natri clorua (NaCI)

1,0 g

Amoni sulphat (NH₄)₂SO₄

...

...

...

Canxi cacbonat (CaCO₃)

1,0 g

Nước cất vừa đủ

1000 ml

pH

7,0 đến 7,2

CHÚ THÍCH: Nếu môi trường thạch nghiêng hoặc thạch đĩa thì bổ sung 20,0 g thạch.

THƯ MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO

...

...

...