TIÊU CHUẨN VIỆT NAM
TCVN 5561:1991
THỰC PHẨM -
PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH ĐỊNH TÍNH SACARIN1
Foodstuffs - Method for qualitative
identification of sacarin
Tiêu chuẩn này quy định phương
pháp xác định định tính Sacarin trong các loại sản
phẩm thực phẩm bằng phương pháp sắc ký
lớp mỏng.
1. Lấy mẫu
Theo quy định đối với từng
loại sản phẩm cụ thể.
2. Nội dung của phương pháp
Chiết tách Sacarin từ dung dịch loãng của
thực phẩm hoặc từ các loại đồ uống
bằng etyl axetat. Làm bay hơi dịch chiết. Phần cặn
còn lại hoà tan vào hỗn hợp dung môi amonisc - nước
– etanola (1:1:2). Sau đó chấm dung dịch này lên bản sắc
ký lớp mỏng, so sánh Rf và cường độ huỳnh
quang với dung dịch saccarin chuẩn dưới đèn tử
ngoại có bước sóng ngắn 254nm.
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
3.1. Ngoài các dụng cụ thông thường
trong phòng thí nghiệm ra còn dùng đến:
- Micropipet có chia vạch tới microlit hoặc
ống mao quản
- Bình định mức, dung tích 10, 50, 250ml
- Bình chiết, dung tích 250ml.
- Ống nghiệm chia độ, dung tích
250ml.
- Máy cắt quay chân không
- Bình chạy sắc ký
- Tấm kính để tránh lớp mỏng,
kích thước 20 x 20cm hoặc dùng bản mỏng tráng sẵn
Sil.H
- Máy sấy tóc
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
- Bếp cách thuỷ
3.2. Hoá chất
Tất cả các loại hoá chất đều
phải là loại tinh khiết.
3.2.1. Axit sunfuric, dung dịch 1:1
3.2.2. Natri hydroxit, dung dịch 50%
3.2.3. Amoniac, dung dịch 25%
3.2.4. Ete dầu hoả có điểm sôi
40-700C
3.2.5. Etyl axetat
3.2.6. Etanola 96%
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
3.2.8. Hệ dung môi triển khai
n-butanol-etanola-amoniac-nước theo tỷ lệ
thể tích là 40:4:1:9.
3.2.9. Hỗn hợp: amoniac-nước-etanola
theo tỷ lệ thể tích là 1:1:2.
4. Chuẩn bị bản mỏng và dung dịch
sacarin chuẩn.
4.1. Trộn 30g silicagen H với 75ml nước
cất, lắc trong 30 giây để có một dung dịch
treo đều. Từ dung dịch treo đều này tráng ra
5 bản mỏng với kích thước 20 x 20cm có độ
dầy lớp silicagen H là 0,25mm. Để khô tự nhiên
trong phòng thí nghiệm trong 36 giờ. Không được làm
khô trong tủ sấy. Không được bảo quản
trong bình hút ẩm.
4.2. Chuẩn bị dung dịch sacarin chuẩn
Cân chính xác 10mg Natri saccarinat cho vào bình định
mức, dung tích 10ml và định mức bằng hỗn hợp
(3.2.9) lắc đều. (1ml dung dịch này chứa 1mg
sacarin).
5. Tiến hành thử
5.1. Chuẩn bị mẫu
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
5.1.2. Đồ uống có cồn: lấy
50ml đồ uống cho vào một cốc thuỷ tinh
đun trên bếp cách thuỷ để đuổi hết
cồn. Sau đó làm nguội phần còn lại, rồi
đổ vào bình định mức dung tích 50ml. Dùng nước
cất tráng cốc, nước tráng dồn cả vào bình
định mức trên. Cuối cùng dùng nước cất
định mức tới vạch mức lắc đều.
5.1.3. Đối với thực phẩm ở
dạng rắn: nghiền nhỏ mẫu. Cân khoảng 5g mẫu
cho vào một cốc thuỷ tinh. Trộn đều lượng
cân trên với 200ml nước sôi và giữ trong 2 giờ.
Trong thời gian này thỉnh thoảng quấy đều.
Sau đó lọc qua giấy lọc gấp nếp vào bình
định mức dung tích 250ml. Tráng giấy lọc vài lần
bằng nước cất, dùng nước cất định
mức tới vạch mức và lắc đều.
5.2. Chiết tách sacarin (điều kiện tiến
hành ở phòng mát)
Axit hoá 50ml mẫu thử đã được
chuẩn bị ở phần (5.1) bằng 10ml dung dịch
axit sunfuric (3.2.1) sau đó cho vào bình chiết, chiết bằng
50ml ete dầu hoả (3.2.4) lắc đều, chờ phân lớp.
Thu phần lớp dưới có chứa sacarin sang một
bình chiết khác. Tiến hành chiết lần nữa phần
còn lại ở bình chiết đầu bằng 1 lượng
thuốc thử như trên. Gom các phần có sacarin vào cùng 1
bình chiết rồi thêm vào bình chiết đó 5ml dung dịch
Natri hydroxit (3.2.2) và tiến hành chiết tách 2 lần mỗi
lần bằng 50ml ethyl axetat (3.2.5). Lọc dung dịch chiết
ethyl axetat vào bình cầu của máy cất quay chân không, qua
bông thuỷ tinh đã được rửa trước bằng
ethyl axetat. Cất chân không cho tới khi còn 2-3ml thì chuyển
sang ống nghiệm dung tích 10ml. Tráng rửa bình cầu bằng
ethyl axetat, phần tráng này cũng gom vào ống nghiệm.
Làm bay hơi dung dịch trong ống nghiệm trên bếp
cách thuỷ, tốt nhất là dưới luồng khí
nitơ nhẹ. Sau đó hoà tan cặn thu được bằng
2,5ml hỗn hợp dung dịch (3.2.9). Đậy kín ống
nghiệm để chạy sắc ký lớp mỏng.
5.3. Tiến hành chấm và chạy sắc ký
5.3.1. Tiến hành chấm sắc ký:
Bản mỏng sau khi đã được
chuẩn bị theo mục (4.1), trước khi chấm sắc
ký phải cọ sạch lớp silicagen ở cạnh
đáy và hai cạnh bên của bản sắc ký với chiều
rộng 5mm để tránh hiện tượng mao dẫn.
Dùng bút chì nhọn và thước kẻ đánh dấu vạch
xuất phát cách mép dưới của bản mỏng 2,5cm.
Dùng micropipet chấm 5 điểm dung dịch mẫu thử
và dung dịch chất chuẩn: Các điểm cách mép của
bản sắc ký và cách nhau 2,5cm. Đường kính mỗi
vết chấm không được quá 0,5cm nên mỗi lần
chỉ chấm khoảng 1ml,
làm khô bằng máy sấy tóc rồi chấm tiếp cho đến
khi chấm hết lượng dung dịch cần phải
chấm.
Chấm các vết theo thứ tự từ
trái sang phải như sau:
2,5ml dung dịch sacarin chuẩn
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
5ml dung dịch chiết của
mẫu thử
5ml dung dịch chiết của
mẫu thử đã được pha loãng gấp đôi bằng
hỗn hợp dung dịch (3.2.9)
10ml dung dịch sacarin chuẩn
Chấm xong để bản mỏng khô trong
không khí.
5.3.2. Tiến hành chạy sắc ký
Dùng một tờ giấy lọc đã
được tẩm ướt bằng hỗn hợp
dung môi triển khai (3.2.8) phủ xung quanh thành bình phía trong.
Sau đó đổ hỗn hợp dung môi triển khai vào
bình với độ cao 1cm. Đậy kín nắp bình và
để yên 30 phút để có được trạng
thái bão hoà dung môi trong bình. Đặt bản mỏng sắc
ký đã chấm mẫu và được làm khô vào bình chạy
sắc ký, đậy nắp lại để khí quyển
trong bình luôn bão hoà dung môi. Khi đường mức dung môi
đạt độ cao 10cm (khoảng 1 giờ), nhấc bản
mỏng ra, đánh dấu chính xác mức dung môi và làm bay
hơi dung môi cho tới khi không nhìn thấy vạch (khoảng
10 phút). Sau đó quan sát bản sắc ký dưới ánh đèn
tử ngoại có bước sóng ngắn 254nm. Và khoanh vùng vết
sacarin phát huỳnh quang (Rf 0,5).
5.4. Đánh giá sắc ký đó:
So sánh sắc ký đó của mẫu thử với
mẫu sacarin chuẩn về:
- Giá trị Rf gần bằng nhau
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Thì có thể kết luận là sắc ký
đó của 2 chất giống nhau.