Thuộc tính
Nội dung
Tiếng Anh (English)
Văn bản gốc/PDF
Lược đồ
Liên quan hiệu lực
Liên quan nội dung
Thuộc tính
Tải về
Các bản dự thảo

Đang tải văn bản...

Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 9128:2011 về Thức ăn chăn nuôi - hàm lượng carbadox - sắc ký lỏng hiệu năng cao

Số hiệu:	TCVN9128:2011	Loại văn bản:	Tiêu chuẩn Việt Nam
Nơi ban hành:	***	Người ký:	***
Ngày ban hành:	Năm 2011	Ngày hiệu lực:
ICS:	65.120	Tình trạng:	Đã biết

Thông số	Cài đặt phần khối lượng của carbadox đến 10 mg/kg	Cài đặt phần khối lượng của carbadox ≥ 10 mg/kg
Cột phân tích	ChromSpher C₁₈^a	mBondapak C₁₈^a
Tốc độ dòng thể tích pha động	0,6 ml/min	1,5 ml/min
Thể tích bơm	50 µl	20 µl
Bước sóng	365 nm	365 nm
Độ nhạy (chỉ thị)	0,005 AUFS đến 0,04 AUFS	0,02 AUFS đến 0,08 AUFS
Máy ghi	10 mV	10 mV
Tốc độ vẽ đồ thị	1,0 cm/min	1,0 cm/min
^a ChromSpher và mBondapak là những ví dụ về các sản phẩm thích hợp có bán sẵn. Thông tin này đưa ra tạo thuận tiện cho người sử dụng tiêu chuẩn và tiêu chuẩn này không ấn định phải sử dụng chúng.

Các điều kiện nếu trong Bảng 1 chỉ mang tính chỉ dẫn, vì trong thực tế việc cài đặt sẽ liên quan đến cột và detector được sử dụng

8.5.2. Cách tiến hành

8.5.2.1. Bơm dung dịch làm việc carbadox (4.9) vào máy sắc ký cho đến khi đường nền ổn định và đến khi thu được chiều cao pic hoặc diện tích pic tái lập. Đối với chiều cao pic hoặc diện tích pic, chênh lệch giữa kết quả cao nhất và thấp nhất cần nhỏ hơn 5% kết quả trung bình của ba lần bơm liên tiếp.

Trong phép phân tích hỗn hợp thức ăn chăn nuôi và thức ăn chăn nuôi chứa bằng hoặc nhiều hơn 10 mg/kg carbadox, sử dụng các dung dịch làm việc carbadox (4.9).

Trong phép phân tích thức ăn chăn nuôi chứa ít hơn 10 mg/kg carbadox, sử dụng các dung dịch làm việc carbadox nồng độ thấp hơn (4.10).

Pic của carbadox phải đối xứng (f_as < 2).

CHÚ THÍCH: f_aslà chiều rộng ở phía cuối đường vuông góc của pic, chia cho chiều rộng phía trước đường vuông góc của pic, cả hai được đo ở vị trí 10 % chiều cao pic.

8.5.2.2. Giữa các nồng độ và chiều cao pic của hai dung dịch làm việc carbadox phải có mối tương quan tỷ lệ thuận (trong phạm vi 5%). Nếu chênh lệch lớn hơn 5% thì cần phải chuẩn bị các dung dịch làm việc carbadox mới.

Bơm các chất chiết mẫu trắng, mẫu trắng thêm chuẩn và dung dịch làm việc dimetridazol (4.13), sulfadimidin (4.16) và nitrofurazon (4.9). Nếu pic carbadox không đối xứng hoặc không tách hoàn toàn khỏi các pic của chất nền hoặc pic của các dung dịch chuẩn được bơm thì cần sử dụng cột HPLC khác hoặc điều chỉnh các điều kiện sắc ký bằng cách tăng hoặc giảm hàm lượng nước của pha động (4.6).

...

Bạn phải đăng nhập hoặc đăng ký Thành Viên TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.

Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66

Chiều cao pic hoặc diện tích pic quan sát được đối với các dung dịch làm việc carbadox cần nằm trong khoảng 5% các kết quả của các dung dịch làm việc carbadox được bơm vào trước đó.

8.5.2.3. Nếu phần khối lượng carbadox trong hỗn hợp thức ăn chăn nuôi thấp hơn nhiều so với phần khối lượng dự kiến (có tính đến dung sai), thì nên lặp lại các bước phân tích theo 8.3.3 hoặc 8.3.4 có bổ sung 50 ml dung môi chiết gồm 35 ml dung môi chiết (4.2) và 15,0 ml nước.

Nếu phần khối lượng carbadox mới thu được lớn hơn 15% so với giá trị ban đầu, thì cần lặp lại phép phân tích với 50 ml dung môi chiết khác đã mô tả ở trên. Việc xác định bổ sung này cần được lặp lại cho đến khi chênh lệch kết quả của các lần xác định liên tiếp carbadox nhỏ hơn 15%.

9. Khẳng định

9.1. Yêu cầu chung

Nếu việc nhận biết của chất cần phân tích có pic trong sắc ký phổ còn chưa rõ ràng dựa vào hình dạng pic hoặc dựa vào kết quả thu được, thì việc nhận biết này cần được khẳng định lại bằng cách áp dụng đồng sắc ký hoặc detector mảng diot. Nếu khẳng định bằng đồng sắc ký thì tiến hành theo 9.2 còn sử dụng detector mảng diot thì tiến hành theo 9.3. Ngoài ra, sự có mặt của carbadox có thể được khẳng định bằng cách sử dụng việc tạo dẫn xuất sau cột với dung dịch natri hydroxit (xem 9.4).

9.2. Đồng sắc ký

Chuẩn bị dịch chiết mẫu có bổ sung chuẩn bằng cách thêm một lượng thích hợp của dung dịch làm việc carbadox (4.10) vào dịch chiết mẫu. Lượng carbadox được thêm vào phải gần bằng lượng carbadox dự kiến có trong dịch chiết mẫu.

Bơm dịch chiết mẫu, dung dịch làm việc carbadox (4.10) và dịch chiết mẫu thêm chuẩn. Chỉ có pic trong sắc ký được coi là pic của chất phân tích có tăng lên tỷ lệ thuận với mức thêm vào và việc tăng chiều rộng của pic tại một nửa chiều cao không lớn hơn ± 10% chiều rộng ban đầu.

...

9.3. Detector mảng diot

9.3.1. Điều kiện

Các điều kiện được mô tả trong 8.5.1, tuy nhiên detector mảng diot được sử dụng thay cho detector UV, xem Bảng 2.

Bảng 2

Thông số

Cài đặt

Bước sóng mẫu

365 nm

Độ rộng băng tần mẫu

...

Bước sóng đối chứng

450 nm

Độ rộng băng tần đối chứng

100 nm

Dải quang phổ

225 nm đến 400 nm

Phổ

đường nền, đỉnh, điểm uốn lên và điểm uốn xuống

9.3.2. Cách tiến hành

...

9.3.3. Đánh giá

Vẽ trong một hình các phổ khác nhau đã chuẩn hóa (mẫu – đường nền) của pic mẫu, đã ghi lại ở đỉnh và ở điểm uốn lên và điểm uốn xuống.

Vẽ trong một hình các phổ đã chuẩn hóa của pic mẫu và của pic dung dịch làm việc carbadox được ghi lại ở đỉnh.

9.3.4. Tiêu chí khẳng định

Việc nhận biết chất phân tích được khẳng định nếu thỏa mãn các tiêu chí sau đây:

a) Thời gian lưu của pic mẫu phải bằng (± 5%) thời gian lưu của pic chuẩn. Trong trường hợp còn nghi ngờ thì phải thêm chuẩn (chất chuẩn được thêm vào mẫu).

b) Đánh giá độ tinh khiết của pic mẫu theo sự phù hợp của chênh lệch phổ, được ghi lại ở đỉnh và ở điểm uốn lên và điểm uốn xuống. Ở mỗi bước sóng độ hấp thụ tương đối phải ngang bằng (trong khoảng 15%) đối với tất cả các phổ.

c) Đối với các phần của phổ với độ hấp thụ tương đối nhỏ nhất 10% chênh lệch phổ của pic mẫu và pic chuẩn được ghi lại ở đỉnh pic không được có sự khác biệt đáng kể. Tiêu chí này được đáp ứng khi các giá trị cực đại cùng có mặt trong một biên độ xác định bởi độ phân giải của hệ thống detector (điển hình từ 2 nm đến 4 nm). Không được có điểm quan sát nào có độ lệch giữa hai phổ vượt quá 15% độ hấp thụ của chất chuẩn ở bước sóng cụ thể.

9.4. Dẫn xuất sau cột

...

Bằng chứng bổ sung về sự có mặt của carbadox, đặc biệt là trong các mẫu chứa ít hơn 5 mg/kg, có thể tìm được bằng cách áp dụng dẫn xuất sau cột đặc thù cho carbadox. Trong trường hợp này tiến hành như sau.

Dùng khớp nối chữ T và một bơm nhu động (5.10.7), sau cột phân tích và trước cuộn phản ứng (5.10.8), thêm dung dịch natri hydroxit (4.23) vào pha động. Độ hấp thụ cực đại của carbadox sẽ dịch chuyển đến bước sóng 420 nm.

9.4.2. Điều kiện

Xem Bảng 3.

Bảng 3

Thông số

Cài đặt

Tốc độ dòng thể tích thuốc thử

0,23 ml/min

...

420 nm

Thể tích bơm

100 μl

10. Tính kết quả

10.1. Yêu cầu chung

Tính phần khối lượng carbadox trong mẫu bằng cách so sánh chiều cao píc hoặc diện tích píc của chất chiết mẫu với trung bình của chiều cao pic hoặc diện tích pic của các dung dịch làm việc carbadox được bơm vào trước và sau mẫu. Sử dụng các kết quả thu được với dung dịch làm việc carbadox có phần khối lượng phù hợp nhất của carbadox.

10.2. Thức ăn chăn nuôi chứa từ 0,1 mg/kg đến 10 mg/kg carbadox

Tính phần khối lượng carbadox (w_c) trong mẫu thức ăn chăn nuôi bằng công thức:

...

w_c là phần khối lượng carbadox trong mẫu thử, tính bằng miligam trên kilogam (mg/kg);

h là chiều cao pic thu được đối với chất chiết mẫu, tính bằng đơn vị độ dài;

h_s là chiều cao pic thu được đối với dung dịch làm việc carbadox, tính bằng đơn vị chiều dài;

ρ_s là nồng độ carbadox trong dung dịch làm việc carbadox, tính bằng microgram trên mililit (μg/ml);

V là thể tích tổng số của dung môi chiết được thêm vào phần mẫu thử, tính bằng mililit (ml);

m là khối lượng của phần thử, tính bằng gam (g).

Ngoài ra, có thể sử dụng diện tích pic trong tính toán thay cho chiều cao pic và sử dụng phương pháp hồi quy tuyến tính để tính hàm lượng carbadox trong chất chiết mẫu.

Làm tròn kết quả đến 0,1 mg/kg.

10.3. Thức ăn chăn nuôi chứa từ 10 mg/kg đến 100 mg/kg carbadox

...

Ý nghĩa của các ký hiệu giống như trong 10.2.

Ngoài ra, có thể sử dụng diện tích pic trong tính toán thay cho chiều cao pic và sử dụng hồi quy tuyến tính để tính hàm lượng carbadox trong chất chiết mẫu.

Làm tròn kết quả đến 1 mg/kg.

10.4. Premix chứa đến 10 % carbadox

Tính phần khối lượng carbadox (w_cp) trong mẫu premix bằng công thức:

Trong đó

w_cp là phần khối lượng carbadox trong mẫu premix, tính bằng phần trăm (%);

...

f là hệ số pha loãng của chất chiết mẫu (xem 8.3.3 hoặc 8.3.4);

f_u là hệ số hiệu chỉnh đơn vị (f_u = 1 kg.mg^-1.%).

Ý nghĩa của các ký hiệu giống như trong 10.2.

Ngoài ra, có thể sử dụng diện tích pic trong tính toán thay cho chiều cao pic và sử dụng hồi quy tuyến tính để tính nồng độ carbadox trong chất chiết mẫu.

Làm tròn kết quả đến 0,01 %.

11. Độ chụm

11.1. Thử liên phòng thử nghiệm

Các chi tiết của phép thử liên phòng thử nghiệm về độ chụm của phương pháp, bao gồm chú thích về tính hợp lệ của các số liệu độ chụm, được đưa ra trong Phụ lục B. Các giá trị thu được từ phép thử liên phòng thử nghiệm này có thể không áp dụng cho các dải nồng độ và chất nền khác với các dải nồng độ và chất nền đã nêu.

11.2. Độ lặp lại

...

a) 10 % trung bình của hai kết quả thử đối với phần khối lượng carbadox đến 50 mg/kg;

b) 14 % giá trị trung bình của hai kết quả thử đối với phần khối lượng carbadox trong khoảng từ 1% đến 10%.

11.3. Độ tái lập

Chênh lệch tuyệt đối giữa các kết quả của hai phép thử độc lập, thu được khi sử dụng cùng phương pháp, tiến hành thử trên vật liệu giống nhau trong các phòng thử nghiệm khác nhau, do các nhà phân tích khác nhau, sử dụng các thiết bị khác nhau thực hiện, không quá 5% các trường hợp lớn hơn:

a) 25% trung bình của hai kết quả thử đối với phần khối lượng carbadox đến 50 mg/kg;

b) 18% trung bình của hai kết quả thử đối với phần khối lượng carbadox trong khoảng từ 1% đến 10%.

12. Báo cáo thử nghiệm

Báo cáo thử nghiệm phải ghi rõ:

a) mọi thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ về mẫu thử;

...

c) phương pháp thử đã dùng, cũng như viện dẫn tiêu chuẩn này;

d) tất cả các chi tiết thao tác không quy định trong tiêu chuẩn này, hoặc tùy chọn cùng với các chi tiết bất thường nào khác có thể ảnh hưởng tới kết quả;

e) kết quả thử thu được, hoặc nếu độ lặp lại được kiểm tra thì nêu hai kết quả cuối cùng thu được.

...

Kết quả của phép thử liên phòng thử nghiệm

Độ chụm của phương pháp được thiết lập bởi phép thử liên phòng thử nghiệm được tiến hành ở Hà Lan phù hợp với TCVN 6910-2 (ISO 5725-2) [4]. Trong phép thử này có 8 phòng thử nghiệm tham gia và 13 mẫu được kiểm tra đánh giá.

Các dữ liệu về độ chụm thu được cho thấy số phòng thử nghiệm (7) được giữ lại sau khi trừ ngoại lệ hoàn toàn không đáp ứng được yêu cầu của IUPAC-AOAC (cần ít nhất là kết quả của 8 phòng thử nghiệm sau khi đã trừ các ngoại lệ). Tuy nhiên, các số liệu về kết quả của độ chụm có thể được chấp nhận để sử dụng trong thực tế, mặc dù mức xác suất của giới hạn độ lặp lại và độ tái lập sẽ nhỏ hơn 95%.

Bảng B.1 - Các kết quả thống kê của phép thử liên phòng thử nghiệm với thức ăn chăn nuôi

Thông số

Mẫu

Thức ăn khởi động 1

Thức ăn khởi động 2

...

Dạng viên ^a

Dạng viên ^b

Dạng bột

Dạng viên ^a

Dạng viên ^b

Số phòng thử nghiệm được giữ lại sau khi đã trừ ngoại lệ

...

Phần khối lượng trung bình của carbadox, mg/kg

50,0

49,7

46,9

47,6

49,7

48,2

...

2,9

1,6

1,5

2,7

2,1

1,6

Hệ số biến thiên lặp lại, %

5,8

3,1

...

5,6

4,3

2,9

Giới hạn độ lặp lại (r) [r = 2,8s_r], mg/kg

8,2

4,4

4,3

7,6

6,0

...

Độ lệch chuẩn tái lập (s_R), mg/kg

3,9

2,6

2,3

4,1

2,4

2,2

Hồ số biến thiên tái lập, %

7,8

...

4,8

8,7

4,9

4,6

Giới hạn độ tái lập (R) [R=2,8 s_R] mg/kg

11,1

7,3

6,4

11,7

...

6,3

^athức ăn giai đoạn khởi động cho lợn con, dạng viên không cần gia nhiệt.

^bthức ăn giai đoạn khởi động cho lợn con, dạng ép viên sau khi gia nhiệt bằng cách bơm hơi nước (ở 40°C).

Bảng B.2 – Các kết quả thống kê của phép thử liên phòng thử nghiệm với premix

Thông số

Mẫu^a

...

Số phòng thử nghiệm còn lại sau khi trừ ngoại lệ

...

Phần khối lượng trung bình của carbadox, %

0,889

0,929

0,921

0,876

9,53

9,81

10,10

...

0,037

0,028

0,044

0,463

0,502

0,449

Hệ số biến thiên lặp lại, %

4,21

...

3,01

5,05

4,84

5,10

4,45

Giới hạn lặp lại (r) [r = 2,8 s_r], %

0,106

0,079

...

1,31

1,42

1,27

Độ lệch chuẩn tái lập (s_R), %

0,037

0,028

0,040

0,055

0,463

...

0,456

Hồ sơ biến thiên tái lập, %

4,21

3,02

4,30

6,34

4,84

5,21

4,50

...

0,106

0,079

0,112

0,157

1,31

1,45

1,29

^a1,2,3 và 4: hỗn hợp thức ăn chăn nuôi với carbadox khoảng 1% khối lượng;

5,6 và 7: premix với carbadox khoảng 10% khối lượng.

...

THƯ MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO

[1] SOP A0394, State Institute for Quality Control of Agricultural Products (RIKILT-DLO). Agricultural Reseach Department, The Netherlands.

[2] LowiE, Jr., D.M., TEAGUE, Jr., R.T. QUICK, F.E., and FOSTER, C.L. J. Assoc. Off. Anal. Chem., 66, 1983, pp. 602-605.

[3] TCVN 6910-1:2001 (ISSO 5725-1:1994) Độ chính xác (độ đúng và độ chụm) của phương pháp đo và kết quả đo - Phần 1: Nguyên tắc và định nghĩa chung.

[4] TCVN 6910-2:2001 (ISO 5725-2:1994) Độ chính xác (độ đúng và độ chụm) của phương pháp đo và kết quả đo - Phần 2: Phương pháp cơ bản xác định độ lặp lại và độ tái lập của phương pháp đo tiêu chuẩn.

[5] TCVN 4325 (ISO 6497), Thức ăn chăn nuôi – Lấy mẫu.

[6] AERTS, M.M.L. and WERDMULLER, G.A. J. Assoc. Off. Anal. Chem., 71, 1988, pp. 484-490.