Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 5287:1994 về thủy sản đông lạnh - phương pháp thử vi sinh vật do Bộ Khoa học Công nghệ và Môi trường ban hành

- Cách pha chế: Hòa tan muối trong nước cất, thanh trùng bằng nồi hấp ở 121 ± 1^oC trong 15 phút.

A.1.2. Nước pepton

- Thành phần:

Pepton

:

1,0g;

Natriclorua

:

8,5g;

...

...

...

:

đủ 1000ml.

- Cách pha chế:

Hòa tan các thành phần trên trong nước cất, điều chỉnh pH là 7,0 ± 0,2 ở 25^oC chứa trong ống nghiệm hoặc bình có dung tích phù hợp tiệt trùng bằng nồi hấp ở 121 ± 1^oC trong 15 phút, nếu chứa dùng cần bảo quản trong tối ở ở 0 – 5^oC không quá một tháng.

A.1.3. Dung dịch đệm pepton

- Thành phần:

Pepton

:

10g;

...

...

...

:

5g;

Dinatri hydrophotphat (Na₂HPO₄)

:

9g

Kali dihydrophotphat (KH₂PO₄)

:

1,5g;

Nước cất

...

...

...

đủ 1000ml.

- Cách pha chế: Đun để hòa tan các thành phần trên, chỉnh pH là 7,0 ± 0,2 ở 25^oC. Rót vào các bình hoặc ống nghiệm với dung tích phù hợp, thanh trùng ở 121 ± 1^oC trong 15 phút. Nếu chưa dùng, cần bảo quản trong tối ở 0 – 5^oC không quá một tháng.

A.2. Môi trường thạch trypton glucoza

- Thành phần:

Trypton

:

5g;

Cao men

:

...

...

...

D-Glucoza khan

:

1,0g;

Agar

:

12 – 18g;

Nước cất

:

Đủ 1000ml.

...

...

...

A.3. Thạch màng

- Thành phần:

Thạch

:

12 – 18g;

Nước cất

:

đủ 1000ml.

- Cách pha chế: như mục 2

...

...

...

- Thành phần:

Pepton

:

7g

Cao men

:

3g

Lactoza

:

...

...

...

Natriclorua

:

5g

Muối mật

:

1,5g

Đỏ trung tính

:

0,03g

...

...

...

:

0,002g

Thạch

:

15g

Nước cất

:

đủ 1000 ml.

- Pha chế:

...

...

...

A.5. Môi trường BGBL 2% (Brilliant Green Bile lactose 2%)

- Thành phần:

Pepton

:

10g

Lactosa

:

10g

Mật bò

...

...

...

20g

Dung dịch 0,1% Brilliant Green

:

13,3ml

Nước cất, đủ

:

1000ml

- Pha chế: Hòa tan pepton và lactosa trong 500ml nước cất. Hòa 20g mật bò trong 200ml nước cất, trộn hai dung dịch, thêm nước cất tới 975ml. Chỉnh pH 7,4 ± 0,1 ở 25^oC. Cho thêm 13,3ml dung dịch Brilliant Green 0,1% trong nước cất. Thêm nước cất cho đủ 100ml. Rót vào ống nghiệm cỡ 16mm có chuông Durham, hấp thanh trùng ở 121 ± 1^oC trong 15 phút.

A.5. Canh Lauryl sulfate tryptose

...

...

...

Tryptosa

:

10g

Lactosa

:

5g

Dikaly hydrophotphat

:

2,75g

...

...

...

:

5g

Natri lauryl sunfat

:

0,1g

Nước cất, đủ

:

1000ml

- Cách pha: Đun để hòa tan thành phần trên trong nước cất, rót vào các ống nghiệm có dung tích phù hợp, hấp thanh trùng ở 121 ± 1^oC trong 15 phút. Chỉnh pH là 6,8 ± 0,1 ở 25^oC.

...

...

...

- Thành phần:

Pepton

:

10g

Lactosa

:

10g

Dikalihydrophotphat

:

...

...

...

Eosinf

:

0,4g

Methylen xanh

:

0,065g

Thạch

:

15g

...

...

...

:

1000ml

- Cách pha: Đun để hòa tan thành phần trên trong nước cất, hấp thanh trùng ở 121^oC trong 15 phút. Điều chỉnh pH là 7,2 ± 0,1 ở 25^oC.

A.8. Môi trường thạch Endo

- Thành phần:

Pepton

:

10g

Lactosa

...

...

...

10g

Cao thịt

:

10g

Natriclorua

:

5g

Fushsine basic

:

...

...

...

Natrisunfit (Na₂SO₃)

:

2,5g

Aga

:

15g

Nước cất, đủ

:

1000ml

...

...

...

A.9. Môi trường MRVP (Metyl Red Voges Prokauer)

- Thành phần:

Pepton

:

5 g

Dikali hydrofotfat

:

5 g

Dextrosa hoặc glucosa

...

...

...

5 g

Nước cất, đủ

:

1000 ml

- Cách pha: Đun để hòa tan thành phần trên trong nước cất, rót vào các ống nghiệm có dung tích phù hợp, hấp thanh trùng ở 121 ±1^oC trong 15 phút. Điều chỉnh pH là 7,5 ± 0,1 ở 25^oC.

A.10. Môi trường thạch Simons Citrate

- Thành phần:

Amonidihydro photphat

:

...

...

...

Dikali hydro photphat

:

1 g

Natriclorua

:

5 g

Natricitrat

:

2 g

...

...

...

:

0,2 g

Bromothymol xanh

:

0,08 g

Aga

:

12,5 g

Nước cất, đủ

...

...

...

1000 ml

- Cách pha: Đun để hòa tan thành phần trên trong nước cất, hấp thanh trùng ở 121 ±1^oC trong 15 phút. Điều chỉnh pH là 6,6 ± 0,1 ở 25^oC.

A.11. Thuốc thử Kovac (để thử phản ứng indol)

Hòa 5 g P – Dimethylaminobenzaldehyt vào 75 ml Amyl alcohol, đun nhẹ ở 50 – 55^oC đến tan hết, để nguội và cho thêm 25 ml axit sulfuaric đậm đặc.

A.12. Thuốc nhuộm Gram

A.12.1. Dung dịch tím tinh thể

Hòa tan 2g tím tinh thể trong 20 ml cồn 95% và 0,8 g amoni axalat trong 80 ml nước cất. Trộn đều hai dung dịch, để lắng sau 24 h và lọc bằng giấy lọc thô.

A.12.2. Dung dịch iot

Hòa tan 1g tinh thể iot và 2 g Kaliiodua trong 300 ml nước cất ss. Nếu có cặn, lọc bằng giấy lọc thô.

...

...

...

Hòa tan 0,5g safranin O trong 100 ml nước cất, lọc bằng giấy lọc thô.

A.13. Môi trường thạch Tellurit – Glyrin

- Thành phần:

Môi trường gốc

:

90 ml (a)

Dung dịch Kalitelurit

:

1 ml (b)

...

...

...

:

5 ml (c)

Huyền phù lòng đỏ trứng

:

5 ml (d)

Sunfamezatin, dung dịch 0,2%

:

27,5 ml

(Bổ sung sunfamezatin khi nghi có mặt proteus).

...

...

...

a) Môi trường gốc :

Trypton

:

10 g

Nước chiết men

:

1 g

Cao thịt

:

...

...

...

Glykin

:

12 g

Aga

:

15 – 20 g

Nước cất, đủ

:

1000 ml

...

...

...

b) Dung dịch Kalitelurit

Kalitelurit

:

1 g

Nước cất, đủ

:

100 ml

Đun nóng vừa phải để hòa tan Kalitelurit trong nước cất, thanh trùng bằng phương pháp lọc.

c) Dung dịch natri pyruvat

...

...

...

:

20 g

Nước cất, đủ

:

100 ml

Hòa tan natripyruvat trước trong một lượng nước, thêm nước tới đủ, thanh trùng bằng lọc.

d) Huyền phù lòng đỏ trứng (nồng độ khoáng 20%)

Dùng trứng gà tươi, tách lấy lòng đỏ trộn kỹ với nước theo tỉ lệ 1 trứng / 4 nước. Đun nóng ở nồi chưng cách thủy ở 45 ± 0,5^oC trong 2h và sau đó để ở 0 – 5^oC trong 18 – 24h để lắng cặn, gạn dần chất lỏng ở trên và lọc thanh trùng. Có thể bảo quản ở 0 – 5^oC không quá 72h.

e) Dung dịch sunfamezatin

...

...

...

:

0,2 g

Natri hydroxit, dung dịch 0,1M/l

:

10 ml

Nước cất, đủ

:

100 ml

Hòa tan sunphamezatin trong dung dịch natri hydroxit, thêm nước cất cho đủ 100 ml.

...

...

...

Đun sôi để hòa tan môi trường gốc, làm nguội tới 50^oC trong nồi cách thủy, lần lượt cho thêm các dung dịch kalitelurit, natri pyruvat, huyền phù lòng đỏ trứng và sunfamezatin (nếu cần).

Cho vào mỗi đĩa petri 15 – 20 ml môi trường thạch telurit glyxin. Các đĩa có thể để ở 0 – 5^oC trong 24h trước khi làm khô.

Làm khô: mở nắp đĩa petri, lật úp đặt vào tủ sấy ở 50 ± 1^oC trong 30 phút.

A.14. Môi trường B.H.I

- Thành phần:

Pepton

:

10 g

Bột não bê khô

...

...

...

12,5 g

Bột tim bò khô

:

5 g

Glucoza

:

2 g

Natri clorua

:

...

...

...

Dinatri hydrophotphat

:

2,5 g

Nước cất, đủ

:

1000 ml

- Cách pha: Đun sôi để hòa tan thành phần trên trong nước, chỉnh pH là 7,4 ± 0,1 ở 25^oC. Cho từng lượng 10 ml vào ống nghiệm có dung tích phù hợp, hấp thanh trùng ở 121 ±1^oC trong 15 phút.

A.15. Huyết tương thỏ

Dùng huyết tương khô có bán trên thị trường và hoàn nguyên lại theo hướng dẫn của nhà sản xuất và thêm vào 0,1 dung dịch EDTA.

...

...

...

Trước khi dùng cần kiểm tra hiệu lực bằng các chủng St.aureus cho phản ứng đông vón dương tính mạnh, yếu và âm tính.

A.16. Selenite Brotl

- Thành phần:

Natri hydroselenit

:

4 g

Pepton

:

5 g

...

...

...

:

4 g

Dinatri hydrophotphat

:

9,5 g

Natri dihydro photphat

:

9,5 g

Nước cất, đủ

...

...

...

1000 ml

Đun nóng nước cất tới 80^oC hòa tan theo thứ tự liệt kê của thành phần trên, thanh trùng bằng hấp sôi cách thủy trong 15 phút. Chỉnh pH là 7,1 ± 0,1 ở 25^oC.

A.17. Môi trường Muller Kauffmann (Tetrathionate Brilliant Gram)

- Thành phần:

+ Nhóm a

Cao thịt

:

...

...

...

Pepton

:

4,5 g

Cao nấm men

:

1,8 g

Natriclorua

:

4,5 g

...

...

...

:

25 g

Natri thiosunfat (Na₂S₂O₃)

:

40,7 g

Mật bò

4,75 g

+ Nhóm b

...

...

...

• Dung dịch iot :

Kaliiodua

:

5 g

Iod

:

...

...

...

Nước cất, đủ

:

20 ml

• Brilliant green, dung dịch 0,1%

:

10 ml

- Cách pha: Hòa thành phần của nhóm a trong 950 ml nước cất, thanh trùng bằng đun sôi nhanh.

Trước khi dùng, thêm nhóm b theo tỉ lệ:

20 ml dung dịch iot và Kaliiodua

...

...

...

Chuẩn bị dung dịch iod và Kaliiodua như sau: Hòa 5 g Kaliiodua vào 5 ml nước cất, thêm 4 g iot, đun nhẹ cho tan, thêm nước cất vô trùng cho đủ 20 ml. Dung dịch được bảo quản trong chai màu nâu.

Chuẩn bị dung dịch brilliant green như sau: Cho 0,1 g brilliant green vào 100 ml nước cất lắc dung dịch khi đang nguôi dần để chất màu tan hết. Dung dịch được bảo quản trong chai màu nâu ở nơi tối.

A.18. Môi trường thạch SS (Salmonella – shigella Agar)

- Thành phần:

Cao thịt

:

5 g

Pepton

:

...

...

...

Lactosa

:

10 g

Mật bò

:

8,5 g

Natri Citrat

:

8,5 g

...

...

...

:

8,5 g

Sắt citrat

:

1,0 g

Brilliant green, dung dịch 0,1%

:

0,33 ml

Đỏ trung tính, dung dịch 1%

...

...

...

2,5 ml

Agar

:

13,5 g

Nước cất, đủ

:

1000 ml

- Cách pha: Đun sôi để hòa tan hoàn toàn thành phần trên trong nước cất, để nguội tới 45 ± 0,5^oC trong nồi cách thủy, rót vào mỗi đĩa petri 15 – 20 ml môi trường. Không hấp thanh trùng môi trường. Chỉnh pH 7,0 ± 0,1 ở 25^oC.

A.19. Môi trường thạch Mac Conkey

...

...

...

Pepton

:

20 g

Lactosa

:

10 g

Natriclorua

5 g

...

...

...

:

1,5 g

Tim tinh thể, dung dịch 0,1%

:

1 ml

Đỏ trung tính, dung dịch 1%

:

3 ml

Agar

...

...

...

13,5 g

Nước cất, đủ

:

1000 ml

- Cách pha: Đun sôi để hòa tan các thành phần trên trong nước cất, chỉnh pH là 7,2 ± 0,2 ở 25^oC. Hấp thanh trùng ở 121 ± 1^oC trong 15 phút.

A.20. Môi trường thạch Bismuth sulfite

- Thành phần:

Cao thịt

:

...

...

...

Pepton

:

10 g

Glucosa

:

5 g

Dinatri hydro photphat

:

4 g

...

...

...

:

0,3 g

(FeSO₄-7H₂O)

Chỉ thị Bismuth sulfit

:

8 g

Brilliant Green, dung dịch 0,5%

...

...

...

5 ml

Aga

:

20 g

Nước cất, đủ

:

1000 ml

- Cách pha: Đun sôi để hòa tan thành phần trên trong nước cất, để nguội tới 45 ± 0,5^oC trong nồi cách thủy, điều chỉnh pH là 7,5 ± 0,1 ở 25^oC. Rót khoảng 15 -20ml môi trường vào mỗi đĩa petri, không hấp thanh trùng.

A.21. Môi trường thạch KIA (Kligler’s Iron Agar)

...

...

...

Cao thịt

:

3 g

Cao nấm men

:

3 g

Pepton

:

15 g

...

...

...

:

5 g

Natriclorua

:

5 g

Lactosa

:

10 g

Glucosa

...

...

...

1 g

Sắt sunfat

:

0,2 g

Natri thiosunfat

:

0,3 g

Đỏ trung tính, dung dịch 0,5%

:

...

...

...

Aga

:

12 g

Nước cất, đủ

:

1000 ml

- Cách pha: Đun sôi để hòa tan hoàn toàn thành phần trên trong nước cất, để nguội đến 45 ± 0,5^oC trong nồi cách thủy, điều chỉnh pH là 7,4 ± 0,1 ở 25^oC. Rót vào các ống nghiệm  16mm để làm thạch nghiêng sao cho khi môi trường đông lại thể tích phần đáy gấp đôi phần nghiêng.

A.22. Môi trường thạch TSI (Triple Sugar Iron Agar)

- Thành phần:

...

...

...

:

4 g

Pepton

:

4 g

Dextrosa

:

1 g

Lactosa

...

...

...

10 g

Sacarosa

:

10 g

Natriclorua

:

5 g

Natrithiosunfat

:

...

...

...

Natrisunfit

:

0,4 g

Sắt sunfat

:

0,2 g

Đỏ trung tính, dung dịch 1%

:

2,5 ml

...

...

...

:

15 g

Nước cất, đủ

:

1000 ml

- Cách pha: Đun sôi để hòa tan thành phần trên trong nước cất, để nguội tới 45 ± 0,5^oC, chỉnh pH là 7,3 ± 0,1 ở 25^oC. Hấp thanh trùng ở 121 ± 1^oC trong 15 phút. Rót vào ống nghiệm để làm môi trường nghiêng như KIA.

A.23. Môi trường MIU (Motility Indol Urea Medium)

- Thành phần:

Trypton

...

...

...

30 g

Kali dihydrophotphat

:

1 g

Natriclorua

:

5 g

Đỏ phenol, dung dịch 0,25%

:

...

...

...

Aga

:

4 g

Nước cất, đủ

:

1000 ml

- Cách pha: Đun sôi để hòa tan thành phần trên trong nước cất, lọc qua giấy lọc và hấp thanh trùng ở 121 ± 1^oC trong 15 phút điều chỉnh pH là 6,8 ± 0,1 ở 25^oC.

Để nguội tới 45 ± 0,5^oC trong nồi cách thủy. Cho thêm vào môi trường nóng chảy một lượng dung dịch Ure 20% theo tỉ lệ 1 ure/9 môi trường. Rót vào ống nghiệm có dung tích phù hợp từng lượng 5ml và để thẳng đứng.

Dung dịch Ure được pha bằng nước cất và khử trùng bằng lọc khuẩn.