Tiêu chuẩn TCVN 14110:2024 về Xác định hàm lượng vitamin nhóm K bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao

• Số hiệu: TCVN14110:2024
• Loại văn bản: Tiêu chuẩn Việt Nam
• Nơi ban hành: ***
• Người ký: ***
• Ngày ban hành: Năm 2024

Hàm lượng vitamin K tổng số (bao gồm các vitamin K₁, K₂, K₃, K₄) trong mẫu, X, biểu thị bằng miligam trên kilogam (mg/kg), được tính theo công thức 2:

X = ∑X_i    (2)

Trong đó:

X_0i là nồng độ của vitamin K_i trong mẫu tính theo đường chuẩn, tính bằng miligam trên lit (mg/l);

V_E là thể tích của dịch chiết n-hexan (7.1.2) hoặc hỗn hợp n-hexan : dietyl ete (7.1.3), tính bằng mililit (ml);

V_A là thể tích của dịch chiết được đem đi loại bỏ dung môi, tính bằng mililit (ml);

V_B là thể tích cuối cùng của mẫu thử, tính bằng mililit (ml);

h là hệ số pha loãng của mẫu thử trong trường hợp phải pha loãng nếu nồng độ mẫu thử nằm ngoài đường chuẩn (7.4);

m là khối lượng mẫu thử, tính bằng gam (g);

...

...

...

Kết quả phép thử là giá trị trung bình các kết quả của ít nhất hai lần thử được tiến hành song song, lấy 2 chữ số có nghĩa sau dấu phẩy. Nếu sai lệch giữa các lần thử lớn hơn 5% giá trị tương đối thì phải tiến hành làm lại.

9  Báo cáo thử nghiệm

Báo cáo thử nghiệm phải ghi rõ:

a) mọi thông tin cần thiết về việc nhận biết đầy đủ mẫu thử;

b) phương pháp thử đã sử dụng và viện dẫn tiêu chuẩn này;

c) mọi thao tác không được quy định trong tiêu chuẩn này, hoặc những điều được coi là tự chọn, và bất kỳ chi tiết nào có ảnh hưởng tới kết quả;

d) kết quả thử nghiệm thu được.

Phụ lục A

...

...

...

Thông tin về hoạt chất vitamin K

A.1  Giới thiệu hoạt chất vitamin K₁

- Công thức cấu tạo:

- Tên hoạt chất:

Phytomenadione

- Tên hoá học:

2-methyl-3-[(E,7R,11 R)-3,7,11,15-tetramethylhexadec-2-enyl]naphthalene-1,4-dione

- Công thức phân tử:

...

...

...

- Khối lượng phân tử:

450,7 g/mol

- Nhiệt độ nóng chảy:

-20 °C

- Nhiệt độ sôi:

140 °C

- Độ tan:

tan dễ dàng trong chloroform, n-hexan; tan trong các dung môi hữu cơ như etanol, dimethyl sulfoxide và dimethyl formanmide khoảng 25 mg/ml và không tan trong nước.

- Dạng bên ngoài:

...

...

...

A.2  Giới thiệu hoạt chất vitamin K₂

- Công thức cấu tạo:

- Tên hoạt chất:

menatetrenone

- Tên hoá học:

2-methyl-3-[(2E,6E,10E)-3,7,11,15-tetramethylhexadeca-2,6,10,14-tetraenyl]naphthalene-1,4-dione

- Công thức phân tử:

C₃₁H₄₀O₂

...

...

...

444,6 g/mol

- Độ tan:

tan dễ dàng trong n-hexane, tan trong etanol, tan ít trong metanol và không tan trong nước

- Dạng bên ngoài:

tinh thể màu vàng

A.3  Giới thiệu hoạt chất vitamin K₃

- Công thức cấu tạo:

- Tên hoạt chất:

...

...

...

- Tên hoá học:

2-methylnaphthalene-1,4-dione

- Công thức phân tử:

C₁₁H₈O₂

- Khối lượng phân tử:

172,18 g/mol

- Độ tan:

không tan trong nước, tan dễ dàng trong n-hexane tan trong etanol (1g/60ml), benzene (1g/10ml)

- Dạng bên ngoài:

...

...

...

A.4  Giới thiệu hoạt chất vitamin K₄

- Công thức cấu tạo:

- Tên hoạt chất:

acetomenaphthone

- Tên hoá học:

(4-acetyloxy-3-methylnaphthalen-1-yl) acetate

- Công thức phân tử:

C₁₅H₁₄O₄

...

...

...

258,27 g/mol

- Nhiệt độ nóng chảy:

113 °C

- Nhiệt độ sôi:

388,9 °C

- Độ tan:

tan dễ dàng trong n-hexane, tan trong dimethyl sulfoxide (48,9 mg/ml), etanol (22,7 mg/ml) và không tan trong nước

- Dạng bên ngoài:

tinh thể màu trắng

...

...

...

Phụ lục B

(Tham khảo)

Thông tin về sắc ký đồ điển hình, hiệu suất thu hồi và giới hạn định lượng của hoạt chất vitamin K

B.1  Sắc ký đồ của hoạt chất vitamin K

Hình B1 - Sắc ký đồ của chất chuẩn vitamin K₁ và K₂ MK4 nồng độ khoảng 5 mg/l

Hình B2 - Sắc ký đồ mẫu thử vitamin K₁ và K₂ MK4

...

...

...

Hình B4 - Sắc ký đồ của mẫu thử vitamin K₃ và K₄

B.2  Hiệu suất thu hồi và giới hạn định lượng

- Hiệu suất thu hồi vitamin K₁ ở mức nồng độ 20 mg/kg: từ 94,8% đến 98,0%

- Hiệu suất thu hồi vitamin K₂ MK4 ở mức nồng độ 20 mg/kg: từ 93,5% đến 97,5%

- Hiệu suất thu hồi vitamin K₃ ở mức nồng độ 20 mg/kg: từ 89,9% đến 99,9%

- Hiệu suất thu hồi vitamin K₄ ở mức nồng độ 20 mg/kg: từ 97,6% đến 104,7%

- Giới hạn định lượng của phương pháp với từng loại vitamin nhóm K: 20 mg/kg.

...

...

...

[1] Siji Joseph, “Analysis of fat-soluble vitamins from food matrix for nutrition lebeling”, Agilent Application Note, publication number: 5990-8668EN.

[2] TCVN 8974:2011 (EN 14148:2003) về Thực phẩm - Xác định vitamin K₁ bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC).

[3] AOAC Official Method 999.15 Vitamin K in Milk and Infant Formulas Liquid Chromatographic Method, 1999.