Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 8685-21:2018 về Quy trình kiểm nghiệm vắc xin - Phần 21

• Số hiệu: TCVN8685-21:2018
• Loại văn bản: Tiêu chuẩn Việt Nam
• Nơi ban hành: ***
• Người ký: ***
• Ngày ban hành: Năm 2018

EID50 CAM

Embryo Infective Dose 50 % Chorioallantoic Membrance

4  Nguyên tắc

Vắc xin được kiểm tra các chỉ tiêu cảm quan, độ vô trùng bằng phương pháp phân tích trong phòng thử nghiệm và các chỉ tiêu an toàn, hiệu lực được đánh giá trên động vật thí nghiệm.

5  Vật liệu và thuốc thử

5.1  Gà 1 - 2 tuần tuổi, gà khỏe, âm tính với kháng thể kháng vi rút Avipox

5.2  Nước muối sinh lý, đã được hấp tiệt trùng, nồng độ 0,9 %

5.3  Trứng gà sạch, có phôi từ 9 ngày tuổi đến 11 ngày tuổi

6  Thiết bị, dụng cụ

Sử dụng các thiết bị, dụng cụ của phòng thí nghiệm thông thường và cụ thể như sau:

6.1  Tủ ấm duy trì nhiệt độ 37 °C

...

...

...

6.3  Đèn soi trứng

6.4  Đĩa Petri vô trùng

6.5  Micropipet, dung tích từ 100 µl đến 1000 µl

6.6  Dao, kéo, panh kẹp vô trùng

6.7  Lọ thủy tinh dung tích 5 ml vô trùng

6.8  Bơm tiêm dung tích 1 ml, 3 ml, 5 ml

7  Cách tiến hành

7.1  Kiểm tra cảm quan

Quan sát bằng mắt thường, vắc xin đạt chỉ tiêu kiểm tra cảm quan khi lọ kín, không rạn nứt, chế phẩm xốp, màu đồng nhất, hòa tan hoàn toàn trong nước muối sinh lý sau 2 min có lắc nhẹ.

...

...

...

7.2.1  Kiểm tra tạp nhiễm vi khuẩn. Theo TCVN 8684:2011

7.2.2  Kiểm tra tạp nhiễm nấm mốc. Theo TCVN 8684:2011

7.3  Kiểm tra tính an toàn

- Chủng vắc xin vào dưới da cánh cho 10 gà (5.1), mỗi con 10 liều vắc xin ghi trên nhãn.

- Theo dõi toàn bộ gà thí nghiệm trong 14 ngày.

Vắc xin đạt chỉ tiêu kiểm tra tính an toàn nếu tất cả gà sống khỏe, phát triển bình thường và không có biểu hiện triệu chứng của bệnh Đậu như các nốt mụn mọc ở niêm mạc mắt, miệng và đầu.

7.4  Kiểm tra hiệu lực

Sử dụng 1 trong 2 cách sau:

7.4.1  Miễn dịch

...

...

...

+ Nhóm 1: gồm 10 gà, mỗi con được chủng 1 liều vắc xin ghi trên nhãn, theo đường chủng dưới da cánh;

+ Nhóm 2: sử dụng nước muối sinh lý (5.2) để chủng cánh cho 10 gà với liều lượng như gà nhóm 1.

- Kiểm tra mụn đậu tại vị trí chủng của gà nhóm 1 và gà nhóm 2 trong 3 ngày đến 5 ngày sau khi chủng. Vắc xin đạt chỉ tiêu kiểm tra hiệu lực khi ít nhất 90 % gà hiệu lực có mụn đậu tại vị trí chủng.

7.4.2  Chuẩn độ hiệu giá vi rút

Vắc xin đạt chỉ tiêu kiểm tra hiệu lực khi mỗi liều vắc xin có hiệu giá vi rút ≥ 10^2 EID₅₀ (xem phụ lục A).

8  Kết luận

Vắc xin đạt tiêu chuẩn kiểm nghiệm khi đạt các chỉ tiêu kiểm tra cảm quan, kiểm tra vô trùng, kiểm tra tính an toàn và kiểm tra hiệu lực.

Phụ lục A

...

...

...

Phương pháp chuẩn độ vi rút

A.1  Vật liệu thử

- Vắc xin cần kiểm tra

- Trứng gà sạch (5.3)

- Nước muối sinh lý (5.2)

A.2  Cách tiến hành

A.2.1  Vắc xin được pha loãng với nước muối sinh lý (5.2) theo cơ số 10 thành các nồng độ từ nồng độ 10^-1 đến nồng độ 10^-^6.

A.2.2  Tiêm huyễn dịch vắc xin đã pha loãng (A.2.2) vào màng CAM (Chorioallantoic Membrane) của trứng gà sạch (5.3), mỗi trứng tiêm 0,1 ml.

A.2.3  Ấp các trứng đã được tiêm (A.2.2) ở tủ ấm (6.1) trong 7 ngày, hàng ngày soi trứng và loại bỏ trứng chết phôi trước 24 h.

...

...

...

Log EID₅₀ = (Xo +d/2) - d x (Σri/n)

Trong đó:

Xo là log của bậc pha loãng virus cao nhất;

d là log của bậc pha loãng;

ri là số trứng không nhiễm vi rút ở mỗi bậc pha loãng;

n là số trứng được gây nhiễm ở mỗi bậc pha loãng.

Thư mục tài liệu tham khảo

[1] Asean Standard requirements for Fowl pox Vaccine (live)

...

...

...