TIÊU CHUẨN QUỐC GIA
TCVN 9684:2013
ISO 11027:1993
HẠT TIÊU VÀ NHỰA DẦU HẠT TIÊU – XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG
PIPERIN – PHƯƠNG PHÁP SẮC KÍ LỎNG HIỆU NĂNG CAO
Pepper
and pepper oleoresins – Determination of piperine content – Method using
high-performance liquid chromatography
Lời nói đầu
TCVN 9684:2013 hoàn toàn tương
đương với ISO 11027:1993;
TCVN 9684:2013 do Ban kỹ thuật Tiêu
chuẩn quốc gia TCVN/TC/F4 Gia vị và phụ gia thực phẩm biên soạn, Tổng
cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng thẩm định, Bộ Khoa học và Công nghệ công bố.
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Pepper
and pepper oleoresins – Determination of piperine content – Method using
high-performance liquid chromatography
1. Phạm vi áp
dụng
Tiêu chuẩn này quy định phương pháp
xác định hàm lượng piperin của hạt tiêu (Piper nigrum Linnaeus), nguyên
hạt hoặc dạng bột cũng như dịch chiết của chúng (nhựa dầu hạt tiêu) bằng sắc kí
lỏng hiệu năng cao.
Phương pháp này có thể tách và xác
định được các alkaloid khác (isochavicin, isopiperin và piperittin) trong hạt
tiêu, nếu cần.
2. Tài liệu
viện dẫn
Các tài liệu viện dẫn sau rất cần
thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn này. Đối với các tài liệu viện dẫn ghi năm
công bố thì áp dụng phiên bản được nêu. Đối với các tài liệu viện dẫn không ghi
năm công bố thì áp dụng phiên bản mới nhất, bao gồm cả các sửa đổi, bổ sung
(nếu có).
TCVN 8960:2011 (ISO 2825:1981), Gia
vị - Chuẩn bị mẫu nghiền để phân tích.
TCVN 9683:2013 (ISO 5564:1982), Hạt
tiêu đen và hạt tiêu trắng nguyên hạt hoặc dạng bột – Xác định hàm lượng
piperin – Phương pháp đo quang phổ.
3. Nguyên tắc
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Chiết hồi lưu mẫu bằng etanol, sau
đó xác định piperin bằng sắc kí lỏng hiệu năng cao (HPLC), theo quy trình quy
định trong tiêu chuẩn này.
3.2. Hạt tiêu nguyên hạt
Chuẩn bị mẫu bằng cách nghiền nhỏ,
chiết bột thu được, sau đó xác định piperin bằng HPLC theo quy trình quy định
trong tiêu chuẩn này.
3.3. Nhựa dầu hạt tiêu
Pha loãng nhựa dầu hạt tiêu bằng
etanol, sau đó xác định piperin bằng HPLC theo quy trình quy định trong tiêu
chuẩn này.
4. Thuốc thử
Chỉ sử dụng các thuốc thử đạt chất
lượng phân tích hoặc nước cất hoặc nước đã khử khoáng hoặc nước có độ tinh
khiết tương đương.
4.1. Chất chuẩn
Piperin có độ tinh khiết ít nhất
98%, xác định được bằng phương pháp đo phổ được quy định trong TCVN 9683 (ISO
5564).
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
4.2. Dung môi
4.2.1. Etanol, 96% (thể
tích).
4.2.2. Axetonitril.
CẢNH BÁO – Sản phẩm này gây chảy
nước mắt, phải cẩn thận khi sử dụng.
4.2.3. Axit axetic, dung
dịch 1 % (thể tích).
4.3. Dung môi rửa giải.
Trộn 52 phần thể tích dung dịch
axit exetic (4.2.3) với 48 phần thể tích dung dịch axetonitril (4.2.2).
5. Thiết bị,
dụng cụ
Sử dụng các thiết bị, dụng cụ của
phòng thử nghiệm thông thường và cụ thể như sau:
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
5.2. Bình định mức, dung
tích 25 ml, 50 ml và 100 ml (bằng thủy tinh phản quang hoặc được bọc trong giấy
nhôm).
5.3. Màng lọc, không hấp phụ.
5.4. Hệ thống tách
5.4.1. Máy sắc kí lỏng hiệu năng
cao.
5.4.2. Hệ thống bơm, có thể
tạo và duy trì tốc độ dòng không đổi hoặc theo chương trình cài đặt ở áp lực
cao.
5.4.3. Hệ thống khử khí,
dùng cho dung môi.
5.4.4. Hệ thống detector thích
hợp, có thể điều chỉnh đến bước sóng 343 nm.
5.5. Máy ghi hoặc máy
tích phân, hoạt động tương thích với toàn bộ thiết bị.
5.6. Cột
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Chiều cao: từ 10 cm đến 25 cm
Đường kính trong: từ 0,4 cm đến 0,5
cm
Pha tĩnh: cột nhồi silica với nhóm
chức octadecyl, C18, cỡ hạt tối đa 5 μm.
5.7. Hệ thống bơm
Van bơm có vòng bơm 10 μl hoặc hệ
thống bơm khác có độ chính xác tương tự.
5.8. Sàng thử nghiệm, cỡ lỗ
500 μm.
6. Phương pháp
hiệu chuẩn
CẢNH BÁO – Trong suốt quá trình
vận hành, không để dung dịch tiếp xúc với ánh sáng (ví dụ bọc bình bằng giấy
nhôm) và sử dụng càng nhanh càng tốt vì dung dịch piperin không bền.
6.1. Dung dịch chuẩn
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
6.2. Đường chuẩn
Từ dung dịch chuẩn (6.1) chuẩn bị
ít nhất ba dung dịch chuẩn làm việc piperin có dải nồng độ trong khoảng từ 0,05
g/l đến 0,2 g/l. Bơm từng dung dịch vào máy sắc kí (5.4.1). Lặp lại phép xác
định ít nhất một lần. Đo diện tích pic và lặp lại phép thử nếu các kết quả
chênh lệch quá 5%.
Dựng đường chuẩn khối lượng piperin
được bơm theo diện tích pic.
Xác định độ dốc trung bình của
đường chuẩn.
6.3. Tính hệ số đáp ứng, K
Tính hệ số đáp ứng K theo công
thức:
K = m’/A
m’ = m x Pr
Trong đó:
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
A là diện tích pic của piperin,
tính bằng đơn vị diện tích;
Pr là độ tinh
khiết của piperin (4.1);
m' là khối lượng đã hiệu
chính của pepirin, tính bằng miligam (mg).
7. Lấy mẫu
Mẫu gửi đến phòng thử nghiệm phải
đúng là mẫu đại diện và không bị hư hỏng hoặc thay đổi trong suốt quá trình bảo
quản hoặc vận chuyển.
Việc lấy mẫu không quy định trong
tiêu chuẩn này. Nên lấy mẫu theo TCVN 4889 (ISO 948)1).
8. Chuẩn bị mẫu
thử
CẢNH BÁO – Các thao tác phải
được thực hiện trong điều kiện tránh ánh sáng vì dung dịch piperin không bền.
8.1. Hạt tiêu bột
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
8.1.2. Từ mẫu thử đã được
chuẩn bị trong 8.1.1, cân từ 0,5g đến 1 g mẫu, chính xác, đến 0,01 g và chuyển
vào bình cầu đáy tròn 100 ml (5.2) được nối với bộ sinh hàn. Thêm 50 ml etanol
(4.2.1) rồi đun sôi. Đun sôi hồi lưu trong 3 h.
Để nguội dung dịch. Lọc và thu lấy
dịch lọc vào bình định mức một vạch 100 ml (5.2). Rửa bình chiết và màng lọc
nhiều lần bằng etanol (4.2.1). Cho nước rửa vào bình định mức 100 ml và cho
etanol đến vạch.
8.2. Hạt tiêu nguyên hạt
8.2.1. Nghiền mẫu thử theo
TCVN 8960 (ISO 2825) cho đến khi bột nghiền thu được lọt hết qua sàng cỡ lỗ 500
μm (5.8).
8.2.2. Dùng mẫu đã nghiền
trong 8.2.1, tiến hành tiếp theo quy định trong 8.1.2.
8.3. Nhựa dầu hạt tiêu
Đồng hóa kỹ mẫu thử nhựa dầu hạt tiêu.
9. Cách tiến hành
9.1. Phần mẫu thử
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Dùng pipet (5.1) lấy 10 ml dịch chiết
thu được trong 8.1.2 hoặc 8.2.2 và chuyển vào bình định mức một vạch 25 ml
(5.2). Thêm dung môi rửa giải (4.3) đến vạch.
CHÚ THÍCH 1: Có thể thay đổi bước
pha loãng này, nếu cần, tùy thuộc vào lượng piperin dự kiến của mẫu và độ nhạy
của detector.
9.1.2. Nhựa dầu hạt tiêu
Cân 0,2 g nhựa dầu hạt tiêu (xem
8.3), chính xác đến 0,1 mg cho vào bình định mức một vạch 100 ml và thêm etanol
(4.2.1) đến vạch.
Dùng pipet lấy 10 ml hỗn hợp này
cho vào bình định mức một vạch 50 ml và thêm dung môi rửa giải (4.3) đến vạch.
CHÚ THÍCH 2: Có thể thay đổi bước pha
loãng này, nếu cần, tùy thuộc vào lượng piperin dự kiến của mẫu và độ nhạy của
detector.
9.2. Xác định
Dung dịch pha loãng cuối cùng phải
trong. Nếu không thì lọc dung dịch pha loãng cuối cùng trên màng lọc (5.3) rồi
bơm dung dịch mẫu thử vào máy sắc kí (5.4.1).
Trên sắc đồ thu được, đo pic của
piperin (xem sắc đồ điển hình trong Phụ lục A).
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
10. Tính kết
quả
10.1. Hạt tiêu nguyên hạt hoặc
dạng bột
Tính hàm lượng piperin bằng phần
trăm khối lượng, theo công thức:
Trong đó:
A là diện tích pic của piperin,
tính bằng đơn vị tích phân;
mx là khối lượng mẫu,
tính bằng miligam (mg);
K là hệ số đáp ứng xác định được
đối với chất chuẩn.
CHÚ THÍCH 3: Tỉ lệ 25/10 liên quan
đến dung dịch pha loãng trong 9.1.1 và cần được thay đổi cho phù hợp khi sử
dụng độ pha loãng khác.
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Tính hàm lượng piperin bằng phần
trăm khối lượng, theo công thức:
Trong đó A, mx và K có
ý nghĩa giống như trong 10.1.
CHÚ THÍCH 4: Tỉ lệ 50/10 liên quan
đến dung dịch pha loãng trong 9.1.2 và cần được thay đổi cho phù hợp khi sử
dụng độ pha loãng khác.
11. Độ lặp lại
Lấy kết quả hệ số đáp ứng K
và hàm lượng piperin là giá trị trung bình của vài lần xác định (ít nhất là ba
lần) được tiến hành trên cùng một mẫu thử. Chênh lệch của các giá trị này không
được vượt quá 5% giá trị trung bình.
12. Báo cáo
thử nghiệm
Báo cáo thử nghiệm phải ghi rõ các
thông tin sau:
a) viện dẫn tiêu chuẩn này;
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
c) đặc tính của cột (vật liệu, kích
thước, cột nhồi, pha tĩnh);
d) đặc tính của detector (tùy chọn)
và các điều kiện vận hành;
e) đặc tính của pha động (tốc độ
dòng và bản chất);
f) nhận biết mẫu thử (lượng bơm và
độ pha loãng cuối cùng);
g) kết quả thu được.
Phụ lục A
(Tham
khảo)
Sắc đồ điển hình
...
...
...
Bạn phải
đăng nhập hoặc
đăng ký Thành Viên
TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN.
Mọi chi tiết xin liên hệ:
ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66
Hình
A.1 – Sắc đồ điển hình của piperin chuẩn và nhựa dầu hạt tiêu
1) TCVN
4889:1989 (ISO 948:1980), Gia vị - Lấy mẫu