Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 6761:2008 Dầu mỡ động thực vật - Xác định hàm lượng tocopherol

• Số hiệu: TCVN6761:2008
• Loại văn bản: Tiêu chuẩn Việt Nam
• Nơi ban hành: ***
• Người ký: ***
• Ngày ban hành: Năm 2008

Bước sóng nm	Tocopherol	Hệ số chia
292	α-tocopherol	0,0076
296	β-tocopherol	0,0089
298	γ-tocopherol	0,0091
298	δ-tocopherol	0,0087
CHÚ THÍCH Các hệ số nêu trên thu được từ giá trị E (1 %/1 cm) của tocopherol. Ví dụ, giá trị E (1 %/1 cm) α-tocopherol là 76 ở 292 nm (trong metanol); do đó 1 μg/ml dung dịch α-tocopherol sẽ có độ hấp thụ là 0,0076 ở 292 nm).

9.1.2 Dung dịch chuẩn

Dùng dung dịch chuẩn thích hợp được chuẩn bị theo độ nhạy của detector huỳnh quang được sử dụng.

Ví dụ chuẩn bị dung dịch làm việc: Trộn các thể tích thích hợp, ví dụ 1 ml, của các dung dịch chuẩn hiệu chuẩn gốc (9.1.1) để thu được dung dịch tocol chuẩn hỗn hợp và pha loãng bằng n-heptan để có dung dịch chứa khoảng 1 μg đến 5 μg từng loại chuẩn trên mililit.

Chuẩn bị dung dịch chuẩn mới cho mỗi ngày làm việc.

Bảo vệ tất cả các dung dịch tránh ánh sáng và nhiệt độ. Bảo quản ở nhiệt độ từ 0 ^0C đến 4 ^0C.

Các dung dịch chuẩn gốc có thể bảo quản trong bình thủy tinh màu nâu đến một tuần nếu được bảo quản lạnh. Các bình định mức có thể được bọc trong lá nhôm.

CHÚ THÍCH Nếu sử dụng detector UV có thể cần đến dung dịch đậm đặc hơn.

9.2 Tối ưu hóa các thông số làm việc

9.2.1 Nếu cột (6.2) còn mới chưa sử dụng hoặc chưa biết tiền sử của nó, hoặc vì một lý do bất kỳ nào khác thì cần phải luyện lại cột. Rửa bằng metanol và luyện lại cột trong khoảng 10 min, sau đó rửa bằng diclometan, tiếp đó bằng n-heptan ở tốc độ dòng khoảng 1ml/min.

...

...

...

CẢNH BÁO Metanol và diclometan nguy hiểm đối với con người và môi trường. Thận trọng khi sử dụng.

9.2.2 Bơm khoảng 10 μl hoặc 20 μl (theo độ nhạy của detector) dung dịch chuẩn (9.1.2) vào cột và nếu cần, điều chỉnh hàm lượng tetrahydrofuran của pha động và tốc độ dòng để đạt được các điều kiện sau:

a) thời gian lưu α-tocopherol trong khoảng 8 min đến 12 min;

b) hệ số phân giải RF để tách β- và γ-tocopherol không nhỏ hơn 1,0; nghĩa là hầu như tới đường nền, trong đó RF được tính theo công thức sau đây:

RF =  

trong đó

d_r(l) là thời gian lưu γ-tocopherol;

d_r(ll) là thời gian lưu β-tocopherol;

b(l) là độ rộng đáy của pic γ-tocopherol;

...

...

...

9.2.3 Chọn chế độ tối ưu cho detector và độ nhạy của bộ tích hợp. Bơm khoảng 10 μl hoặc 20 μl dung dịch chuẩn (9.1.2). Bơm lặp lại và kiểm tra các sắc đồ thu được.

9.3 Chuẩn bị dung dịch thử

Tùy theo nồng độ của tocol (9.1.2) cân khoảng 0,25 g ± 0,1 g mẫu thử (điều 8), chính xác đến 1 mg, cho vào bình định mức một vạch dung tích 25 ml. Thêm một lượng n-heptan (5.3), lắc để hòa tan phần mẫu thử và pha loãng đến vạch bằng cùng loại dung môi. Lọc dung dịch bằng màng lọc 0,45 μm của HPLC nếu dung dịch chưa trong.

Điều quan trọng là các dung dịch thử được bảo vệ khỏi ánh sáng trước khi phân tích và được phân tích trong ngày chuẩn bị.

CHÚ THÍCH Có thể chuẩn bị một dung dịch đậm đặc hơn hoặc pha loãng tiếp dung dịch này trước khi cho chạy sắc ký.

9.4 Phương pháp xác định

9.4.1 Bơm 10 μl hoặc 20 μl (tùy theo độ nhạy của detector) dung dịch chuẩn (9.1.2) cho vào cột và ghi lại diện tích pic.

9.4.2  Bơm 10 μl hoặc 20 μl (tùy theo độ nhạy của detector) dung dịch thử (9.3) cho vào cột và nhận biết sự có mặt của các tocol bằng cách so sánh với các sắc đồ hiệu chuẩn. Ghi lại diện tích của pic.

Lặp lại việc bơm dung dịch thử và đo. Kết quả là giá trị trung bình cộng của hai phép xác định.

...

...

...

Thời gian lưu tương đối đưa ra trong Bảng 2 đã được tìm thấy, điển hình như sau:

Bảng 2 - Ví dụ về thời gian lưu tương đối của các tocopherol và tocotrienol

Cột silica (-tocopherol chuẩn)

Cột diol (-tocopherol chuẩn)

α-tocopherol = 1,00

α-tocotrienol = 1,19

α-tocopherol = 1,00

α-tocotrienol = 1,24

β-tocopherol = 1,34

...

...

...

β-tocopherol = 1,59

β-tocotrienol = 2,03

γ-tocopherol = 1,63

γ-tocotrienol = 2,00

γ-tocopherol = 1,74

γ-tocotrienol = 2,22

δ-tocopherol = 2,24

δ-tocotrienol = 2,79

δ-tocopherol = 2,46

...

...

...

10 Biểu thị kết quả

Hàm lượng α-tocopherol của mẫu, w, được biểu thị bằng miligam trên kilogam (mg/kg), theo công thức sau đây:

w =

trong đó:

p là nồng độ của α-tocopherol trong dung dịch chuẩn (9.1.2), tính bằng microgam trên mililit;

là giá trị trung bình của các diện tích pic thu được đối với chuẩn α-tocopherol;

 là giá trị trung bình của các diện tích pic thu được đối với α-tocopherol có trong mẫu thử;

V là thể tích dung dịch thử được chuẩn bị (= 25 ml).

Tính hàm lượng tocol còn lại trong mẫu thử theo cùng cách, sử dụng số liệu thu được từ chuẩn tương ứng.

...

...

...

CHÚ THÍCH Cường độ huỳnh quang của tocotrienol cũng giống như của tocopherol tương ứng và các độ hấp thụ UV cũng tương tự.

Hàm lượng được biểu thị bằng miligam trên kilôgam là một số nguyên.

11 Độ chụm

11.1 Phép thử liên phòng thử nghiệm

Chi tiết phép thử liên phòng thử nghiệm về độ chụm của phương pháp được thống kê trong Phụ lục C. Các giá trị thu được từ phép thử này có thể không áp dụng được đối với các dải nồng độ và các chất nền khác với dải nồng độ và các chất nền đã đưa ra.

11.2 Độ lặp lại

Chênh lệch tuyệt đối giữa hai kết quả thử độc lập, riêng rẽ, thu được khi sử dụng cùng một phương pháp, trên vật liệu thử giống hệt nhau, trong cùng một phòng thử nghiệm, do cùng một người thực hiện, sử dụng cùng thiết bị, trong một thời gian ngắn, không vượt quá 5 % các trường hợp lớn hơn giá trị r đưa ra trong Bảng 3.

11.3 Độ tái lập

Chênh lệch tuyệt đối giữa hai kết quả thử riêng rẽ, thu được khi sử dụng cùng một phương pháp, trên vật liệu thử giống hệt nhau, trong các phòng thử nghiệm khác nhau, do những người khác nhau thực hiện, sử dụng các thiết bị khác nhau, không vượt quá 5 % các trường hợp và lớn hơn giá trị R nêu trong Bảng 3.

...

...

...

Hàm lượng tocol

mg/kg

Dải nồng độ mg/kg

r

mg/kg

R

mg/kg

T₁ = giá trị trung bình của hàm lượng tocopherol độc lập

0 đến 2220

...

...

...

0,2094 T₁

T₂ = giá trị trung bình của hàm lượng tocotrienol độc lập

10 đến 210

0,0900 T₂

0,2552 T₂

T₃ = giá trị trung bình của hàm lượng tổng (tocopherol + tocotrienol)

200 đến 3250

0,0718 T₃

0,2557 T₃

...

...

...

Báo cáo thử nghiệm phải chỉ rõ:

a) tất cả các thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ về mẫu thử;

b) phương pháp lấy mẫu được sử dụng, nếu biết;

c) phương pháp thử đã sử dụng, cùng với viện dẫn tiêu chuẩn này;

d) tất cả các chi tiết thao tác không qui định trong tiêu chuẩn này hoặc được coi là tùy ý cũng như bất kỳ yếu tố nào khác có thể ảnh hưởng đến kết quả;

e) kết quả thử thu được;

f) nếu đáp ứng yêu cầu về độ lặp lại, thì nêu kết quả cuối cùng thu được.

Phụ lục A

...

...

...

Ví dụ về sắc ký đồ

a) Tỷ lệ diol

b) Cột silica

Nhận dạng pic

1 α-tocopherol              5 α-tocotrienol

2 β-tocopherol              6 β-tocotrienol

3 γ-tocopherol               7 γ-tocotrienol

...

...

...

Các điều kiện

Pha động: 3,8 % (theo thể tích) THF trong n-heptan

Tốc độ dòng: 1 ml/min

Detector: huỳnh quang

Hình A.1 - Hỗn hợp dầu thực vật (đậu tương, hạt nho, phôi lúa mì, dầu cọ) được bổ sung α-tocopherol axetat

Phụ lục B

(tham khảo)

Xà phòng hóa

...

...

...

Khi phân tích các sản phẩm được chế biến có bổ sung các este của tocopherol hoặc este của tocotrienol, thì trước khi chạy sắc ký nên tiến hành qui trình xà phòng hóa nguội. Cần phân tích đồng thời các mẫu chứa lượng este đã biết trước ở cùng một thời điểm.

B.2 Thuốc thử

Chỉ sử dụng các thuốc thử thuộc loại tinh khiết phân tích.

B.2.1 Etanol, w = 94 g/100 g đến 96 g/100 g.

B.2.2 Etanol, nguyên chất, w ≥ 99,7 g/100 g.

B.2.3 Pyrogallol.

B.2.4 Kali hydroxit, dung dịch lỏng w = 60 g/100 g.

B.2.5 Dietyl ete, không chứa peroxit, chứa pyrogallol 0,1 %.

B.2.6 Axit clohydric, c(HCl) = 0,01 mol/l.

...

...

...

B.2.8 Nước, phù hợp với các yêu cầu của loại 3 của TCVN 4851 (ISO 3696).

B.3 Cách tiến hành

CẢNH BÁO Phải đặc biệt chú ý đến nhiệt độ và thời gian xà phòng hóa, nếu không sự thu hồi este có thể cho kết quả thấp.

Cân chính xác 2 g mẫu đã trộn kỹ cho vào bình định mức đáy phẳng dung tích 100 ml và phân tán phần mẫu thử đã nóng chảy trong khoảng 8 ml etanol (B.2.1) bằng cách xoay nhẹ bình. Thêm 100 mg pyrogallol (B.2.3) và lắc cho tan.

Làm sạch bình định mức bằng nitơ, thêm 4 ml dung dịch kali hydroxit (B.2.4), làm sạch lại bằng nitơ và đậy bình bằng nắp thủy tinh. Đặt bình vào nồi cách thủy ở 26 ^0C và lắc mạnh trong 10 min hoặc cho đến khi xà phòng hóa hoàn toàn. Thực hiện tất cả các thao tác tránh ánh sáng mặt trời, sử dụng bình thủy tinh màu nâu hoặc được bọc trong giấy nhôm.

Thêm 50 ml nước (B.2.8) vào bình định mức và chuyển lượng chứa trong bình sang phễu chiết dung tích 250 ml. Rửa bình bằng 50 ml dietyl ete (B.2.5) và chuyển sang phễu. Lắc mạnh phễu chiết trong 1 min, thỉnh thoảng nới lỏng nút để giảm áp suất. Để yên cho tách lớp và tháo bỏ lớp nước bên dưới. Chiết tiếp lớp chất lỏng bốn lần, mỗi lần với 30 ml dietyl ete và kết hợp với chiết xuất ete.

Rửa các dịch chiết dietyl ete đã kết hợp bằng 50 ml nước (lắc cẩn thận để tránh tạo thể nhũ) và sau đó rửa tiếp bằng 30 ml axit clohydric loãng (B.2.6). Thêm khoảng 3 g natri sunfat khan (B.2.7) và trộn nhẹ để hấp thụ nước. Lọc chất chiết ete qua giấy lọc và thu lấy chất lọc vào bình bay hơi dạng quay, màu nâu, đáy tròn. Loại bỏ ete dưới áp suất thấp ở nhiệt độ không vượt quá 40 ^0C. Nếu chất lỏng còn sót lại trong bình, thêm etanol (B.2.2) và cho bay hơi đến khô.

Rửa bình định mức bằng n-heptan (5.3) và chuyển sang bình định mức một vạch dung tích 50 ml và pha loãng đến vạch bằng n-heptan. Tạo độ pha loãng thích hợp của dung dịch thử (theo mô tả trong 9.3) và tiếp tục tiến hành theo 9.4.

...

...

...

(tham khảo)

Kết quả thử nghiệm liên phòng thử nghiệm

Độ chụm của phương pháp đã thiết lập bởi thử nghiệm của liên phòng thử nghiệm quốc tế IUPAC được tổ chức vào năm 2003 bởi Trung tâm nghiên cứu Dinh dưỡng và Thực phẩm thuộc Viện nghiên cứu Lipit (Munster - Đức) và tiến hành phù hợp với TCVN 6910-1:2001 (ISO 5725-1) và TCVN 6910-2:2001 (ISO 5725-2). Trong thử nghiệm này có 12 phòng thử nghiệm của bốn nước (1 Hungari, 1 Canada, 4 Pháp, 6 Đức) tham gia và nghiên cứu trên tám loại mẫu chất béo khác nhau đã được kiểm tra (xem Bảng C.1). Thống kê của các kết quả đưa ra trong Bảng C.2.

Các loại HPLC pha động khác nhau sử dụng trong phép thử này liệt kê trong Bảng C.3

Bảng C.1 - Mô tả mẫu

Mẫu A

Dầu phôi hạt lúa mì

Mẫu B

50 % dầu phôi lúa mì + 50 % dầu ngô

...

...

...

25 % dầu phôi lúa mì + 75 % dầu ngô

Mẫu D

25 % dầu phôi lúa mì + 75 % dầu đậu tương

Mẫu E

10 % dầu phôi lúa mì + 90 % dầu cọ

Mẫu F

25 % dầu phôi lúa mì + 75 % dầu cọ

Mẫu G

Dầu cọ

...

...

...

Dầu ôliu nguyên chất

Bảng C.2 - Kết quả thống kê

α-Tocopherol

A

B

C

D

E

F

...

...

...

H

Số phòng thử nghiệm tham gia

12

12

12

12

12

12

12

...

...

...

Số phòng thử nghiệm còn lại sau khi trừ ngoại lệ

12

12

12

12

12

12

11

11

...

...

...

24,0

24,0

24,0

24,0

24,0

24,0

22,0

22,0

Giá trị trung bình, mg/kg

...

...

...

1284,8

813,7

662,8

311,5

625,0

106,5

193,1

Độ lệch chuẩn lặp lại (s_r), mg/kg

68,3

...

...

...

24,3

18,4

10,4

25,4

5,0

7,8

Độ lệch chuẩn tương đối lặp lại, %

3,1

2,7

...

...

...

2,8

3,3

4,1

4,7

4,0

Giới hạn lặp lại, (r) mg/kg

191,3

97,7

68,1

...

...

...

29,1

71,1

13,9

21,7

Độ lệch chuẩn tái lập, (s_R), mg/kg

173,1

87,9

56,4

48,5

...

...

...

38,1

7,1

11,4

Độ lệch chuẩn tương đối tái lập, %

7,8

6,8

6,9

7,3

6,7

...

...

...

6,6

5,9

Giới hạn tái lập, (R) mg/kg

484,7

246,1

157,8

135,9

58,4

106,6

...

...

...

31,8

β-Tocopherol

A

B

C

D

E

F

...

...

...

H

Số phòng thử nghiệm tham gia

12

12

12

12

12

12

7

...

...

...

Số phòng thử nghiệm còn lại sau khi trừ ngoại lệ

12

12

12

12

12

12

7

9

...

...

...

24,0

24,0

24,0

24,0

24,0

24,0

14,0

18,0

Giá trị trung bình, mg/kg

...

...

...

417,8

212,5

214,5

79,1

202,6

0,7

2,2

Độ lệch chuẩn lặp lại (s_r), mg/kg

22,6

...

...

...

5,1

6,1

2,8

7,6

0,0

0,3

Độ lệch chuẩn tương đối lặp lại, %

2,7

1,6

...

...

...

2,8

3,5

3,7

0,0

15,0

Giới hạn lặp lại, (r) mg/kg

63,4

19,0

14,3

...

...

...

7,8

21,2

0,0

0,9

Độ lệch chuẩn tái lập, (s_R), mg/kg

108,3

55,7

24,7

26,3

...

...

...

25,9

1,1

0,7

Độ lệch chuẩn tương đối tái lập, %

12,9

13,3

11,6

12,3

12,9

...

...

...

155,8

29,8

Giới hạn tái lập, (R) mg/kg

303,1

156,0

69,1

73,8

28,7

72,4

...

...

...

1,9

γ-Tocopherol

A

B

C

D

E

F

...

...

...

H

Số phòng thử nghiệm tham gia

10

12

12

12

8

...

...

...

Số phòng thử nghiệm còn lại sau khi trừ ngoại lệ

6

11

7

9

8

12

...

...

...

12,0

22,0

14,0

18,0

16,0

24,0

Giá trị trung bình, mg/kg

...

...

...

403,8

546,6

325,4

3,6

13,8

Độ lệch chuẩn lặp lại (s_r), mg/kg

1,4

...

...

...

11,7

10,5

0,4

1,1

Độ lệch chuẩn tương đối lặp lại, %

7,3

1,9

...

...

...

3,2

9,8

8,1

Giới hạn lặp lại, (r) mg/kg

4,0

21,0

32,7

...

...

...

1,0

3,1

Độ lệch chuẩn tái lập, (s_R), mg/kg

2,4

62,9

12,3

19,2

...

...

...

2,2

4,2

Độ lệch chuẩn tương đối tái lập, %

12,5

15,6

2,3

5,9

...

...

...

30

Giới hạn tái lập, (R) mg/kg

6,8

176,0

34,5

53,8

6,1

...

...

...

11,6

δ-Tocopherol

A

B

C

D

E

F

...

...

...

H

Số phòng thử nghiệm tham gia

12

12

12

...

...

...

Số phòng thử nghiệm còn lại sau khi trừ ngoại lệ

10

12

12

...

...

...

20,0

24,0

24,0

Giá trị trung bình, mg/kg

...

...

...

13,0

20,0

71,0

Độ lệch chuẩn lặp lại (s_r), mg/kg

...

...

...

1,7

2,5

Độ lệch chuẩn tương đối lặp lại, %

4,9

...

...

...

3,5

Giới hạn lặp lại, (r) mg/kg

1,8

4,7

...

...

...

Độ lệch chuẩn tái lập, (s_R), mg/kg

2,7

3,9

8,3

...

...

...

Độ lệch chuẩn tương đối tái lập, %

20,8

19,3

11,6

...

...

...

Giới hạn tái lập, (R) mg/kg

7,6

10,8

23,1

...

...

...

α-Tocotrienol

A

B

C

D

E

F

...

...

...

H

Số phòng thử nghiệm tham gia

9

9

8

7

9

9

9

...

...

...

Số phòng thử nghiệm còn lại sau khi trừ ngoại lệ

7

7

7

7

8

8

8

...

...

...

14,0

14,0

14,0

14,0

16,0

16,0

16,0

Giá trị trung bình, mg/kg

...

...

...

25,1

18,1

10,1

149,7

138,1

162,5

Độ lệch chuẩn lặp lại (s_r), mg/kg

1,1

...

...

...

0,8

0,9

5,3

7,4

5,0

Độ lệch chuẩn tương đối lặp lại, %

2,5

4,9

...

...

...

8,8

3,6

5,4

3,1

Giới hạn lặp lại, (r) mg/kg

3,0

3,4

2,4

...

...

...

14,9

20,8

14,0

Độ lệch chuẩn tái lập, (s_R), mg/kg

24,7

12,0

6,3

6,7

...

...

...

26,3

11,0

Độ lệch chuẩn tương đối tái lập, %

58,7

47,8

34,6

66,2

8,4

...

...

...

6,7

Giới hạn tái lập, (R) mg/kg

69,0

33,6

17,6

18,7

35,3

73,7

...

...

...

β-Tocotrienol

A

B

C

D

E

F

...

...

...

H

Số phòng thử nghiệm tham gia

7

7

7

7

9

9

8

...

...

...

Số phòng thử nghiệm còn lại sau khi trừ ngoại lệ

6

7

6

6

8

9

7

...

...

...

12,0

14,0

12,0

12,0

16,0

18,0

14,0

Giá trị trung bình, mg/kg

...

...

...

63,7

34,3

28,6

23,9

37,7

15,8

Độ lệch chuẩn lặp lại (s_r), mg/kg

3,0

...

...

...

0,9

1,0

2,0

2,9

2,1

Độ lệch chuẩn tương đối lặp lại, %

2,6

4,0

...

...

...

3,3

8,2

7,6

13,4

Giới hạn lặp lại, (r) mg/kg

8,3

7,1

2,4

...

...

...

5,5

8,1

5,9

Độ lệch chuẩn tái lập, (s_R), mg/kg

54,8

34,3

26,0

20,4

...

...

...

14,1

3,7

Độ lệch chuẩn tương đối tái lập, %

48,3

53,8

75,9

71,4

34,6

...

...

...

23,7

Giới hạn tái lập, (R) mg/kg

153,6

96,1

72,8

57,1

23,2

39,4

...

...

...

γ-Tocotrienol

A

B

C

D

E

F

...

...

...

H

Số phòng thử nghiệm tham gia

8

9

9

9

...

...

...

Số phòng thử nghiệm còn lại sau khi trừ ngoại lệ

6

6

6

...

...

...

14,0

12,0

12,0

12,0

Giá trị trung bình, mg/kg

...

...

...

3,6

185,3

152,1

205,2

Độ lệch chuẩn lặp lại (s_r), mg/kg

...

...

...

0,7

3,4

4,9

6,3

Độ lệch chuẩn tương đối lặp lại, %

...

...

...

1,9

3,2

3,1

Giới hạn lặp lại, (r) mg/kg

2,0

...

...

...

9,6

13,6

17,6

Độ lệch chuẩn tái lập, (s_R), mg/kg

1,9

...

...

...

6,9

8,5

Độ lệch chuẩn tương đối tái lập, %

53,0

4,4

...

...

...

4,2

Giới hạn tái lập, (R) mg/kg

5,4

22,8

19,3

...

...

...

δ-Tocotrienol

A

B

C

D

E

F

...

...

...

H

Số phòng thử nghiệm tham gia

10

9

8

...

...

...

Số phòng thử nghiệm còn lại sau khi trừ ngoại lệ

9

8

9

...

...

...

18,0

16,0

18,0

Giá trị trung bình, mg/kg

...

...

...

40,8

35,3

47,7

Độ lệch chuẩn lặp lại (s_r), mg/kg

...

...

...

2,1

1,6

1,4

Độ lệch chuẩn tương đối lặp lại, %

...

...

...

5,0

4,6

2,9

Giới hạn lặp lại, (r) mg/kg

...

...

...

5,8

4,6

3,9

Độ lệch chuẩn tái lập, (s_R), mg/kg

...

...

...

4,1

6,6

Độ lệch chuẩn tương đối tái lập, %

10,8

...

...

...

13,8

Giới hạn tái lập, (R) mg/kg

12,4

11,6

...

...

...

Tổng hàm lượng

A

B

C

D

E

F

...

...

...

H

Số phòng thử nghiệm tham gia

12

12

12

12

12

12

12

...

...

...

Số phòng thử nghiệm còn lại sau khi trừ ngoại lệ

9

9

9

8

8

8

6

11

...

...

...

18,0

18,0

18,0

16,0

16,0

16,0

12,0

22,0

Giá trị trung bình, mg/kg

...

...

...

2209,4

1708,7

1290,4

813,7

1192,1

522,5

210,6

Độ lệch chuẩn lặp lại (s_r), mg/kg

91,1

...

...

...

33,6

39,8

22,4

32,5

14,8

8,8

Độ lệch chuẩn tương đối lặp lại, %

2,8

2,1

...

...

...

3,1

2,7

2,7

2,8

4,2

Giới hạn lặp lại, (r) mg/kg

255,1

132,6

94,0

...

...

...

62,7

90,9

41,5

24,6

Độ lệch chuẩn tái lập, (s_R), mg/kg

292,3

217,5

161,2

62,3

...

...

...

85,2

17,1

14,9

Độ lệch chuẩn tương đối tái lập, %

9,0

9,8

9,4

4,8

12,0

...

...

...

3,3

7,1

Giới hạn tái lập, (R) mg/kg

818,4

609,1

451,3

174,4

274,8

238,5

...

...

...

41,6

CHÚ THÍCH Nồng độ trung bình, giới hạn lặp lại và tái lặp được biểu thị bằng mg/kg.

Bảng C.3 - Ví dụ về pha động của HPLC đã sử dụng trong phép thử liên phòng thử nghiệm năm 2003

Hỗn hợp rửa giải

Số lượng phòng thử nghiệm sử dụng chất rửa giải này

3,85 % (theo thể tích) tetrahydrofuran trong n-heptan

2

Tetrahydrofuran/n-heptan (1:99)

...

...

...

Tetrahydrofuran/n-hexan (2:98)

1

t-butyl metyl ete/n-hexan (4:96)

1

5 % t-butyl metyl ete trong n-hexan

1

6 % t-butyl metyl ete trong isohexan

1

t-butyl metyl ete/n-heptan (5:95)

...

...

...

t-butyl metyl ete/isooctan (4:96)

1

2,8 % dioxan trong n-hexan

1

Dioxin/isooctan (3:97)

1

isopropanol/n-heptan (0,5:99,5)

1

...

...

...

[1] ISO 3696, Water foranalytical laboratory use - Specification and test methods [Nước sử dụng trong phòng thử nghiệm phân tích - Yêu cầu kỹ thuật và các phương pháp thử]

[2] TCVN 2625 : 2007 (ISO 5555:2001), Dầu mỡ động vật và thực vật - Lấy mẫu.

[3] TCVN 6910-1:2001 (ISO 5725-1:1994) Độ chính xác (độ đúng và độ chụm) của phương pháp đo và kết quả đo. Phần 1: Nguyên tắc và định nghĩa  chung.

[4] TCVN 6910-2:2001 (ISO 5725-2:1994), Độ chính xác (độ đúng và độ chụm) của phương pháp đo và kết quả đo. Phần 2: Phương pháp cơ bản xác định độ lặp lại và độ tái lập của phương pháp đo tiêu chuẩn.

1) Tocopherol 613424 của hãng Merck thuộc Công ty Calbiochem (www.calbiochem.com) thường có bán sẵn. Mỗi lọ nhỏ chứa 50 mg DL-α-tocopherol, D-β-tocopherol, D-γ-tocopherol và D-δ-tocopherol có độ tinh khiết 95 % bằng phép phân tích sắc ký (đối với mỗi phần). Bộ tocotrienol 613424 của hãng Merck thuộc Công ty Calbiochem cũng có bán sẵn. Mỗi bộ chứa một lọ nhỏ 50 mg α-tocotrienol, β-tocotrienol, γ-tocotrienol và δ-tocotrienol có độ tinh khiết 95 % cho phép phân tích sắc ký (đối với γ -tocotrienol độ tinh khiết là 75 %).

Thông tin này đưa ra tạo thuận lợi cho người sử dụng tiêu chuẩn này và ISO không ấn định phải sử dụng sản phẩm đó.