Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 5750:1993 về thức ăn chăn nuôi - Phương pháp xác định nấm men và nấm mốc

- Cách pha:

Đun sôi để hòa tan thành phần trên trong nước cất, để nguội tới 45 ± 1^oC trong nồi cách thủy, điều chỉnh để pH là 6,6 ± 0,1 ở 25^oC, chứa từng lượng 100 ml vào bình có dung tích phù hợp, hấp thanh trùng ở 121 ± 1^oC trong 15 phút. Trong trường hợp không có cloramphenicol, có thể thay bằng oxytetracylin (C₂₂H₃₀N₂O₁₁) và được chuẩn bị như sau:

Từ các lọ đã chứa 100 ml môi trường không có cloramphenicol, làm chảy môi trường và duy trì ở 45 ± 1^oC trong nồi chưng cách thuỷ.

Chuẩn bị dung dịch 0,1% oxytetracyclin bằng cách hoà tan 0,1g oxytetracyclin hydroclorua trong 100 ml nước cất, lọc thanh trùng. Cho 10 ml dung dịch 0,1% oxytetracyclin vào 100 ml môi trường đã nóng chảy, lắc để trộn đều.

5. Lấy mẫu và chuẩn bị mẫu

5.1. Lấy mẫu và chuẩn bị mẫu theo TCVN 4325-86

5.2. Tạo huyền phù ban đầu và pha loãng mẫu theo TCVN 4881-89 (ISO 6887-1983)

6. Tiến hành xác định

6.1. Nuôi cấy

...

...

...

6.1.2. Đổ khoảng 15 ml môi trường thạch YDC ở 45 ± 1^oC vào mỗi đĩa petri. Thời gian từ khi cho dung dịch mẫu vào đĩa đến khi đổ môi trường không được quá 15 phút.

Trộn cẩn thận dịch cấy và môi trường, để môi trường đông lại. Đổ một đĩa để kiểm tra độ vô trùng của môi trường cũng bằng 15 ml môi trường thạch YDC với thao tác tương tự như trên nhưng không có dịch cấy.

6.1.3. Lật úp các đĩa đã chuẩn bị đặt vào tủ ấm đã duy trì ở 25 ± 1^oC trong 3, 4 và 5 ngày.

6.2. Đọc kết quả

Đếm khuẩn lạc nấm men, nấm mốc sau 3, 4 và 5 ngày nuôi cấy, có thể sử dụng thiết bị đếm nếu cần và chỉ giữ lại để đếm các đĩa mọc ít hơn 150 khuẩn lạc. Đếm ở hai độ pha loãng liên tiếp mỗi độ pha loãng đếm 2 đĩa. Nếu sau 5 ngày, các khuẩn lạc phát triển mạnh bao trùm cả mặt đĩa gây khó đếm hoặc khó phân biệt thì có thể lấy các số đếm của ngày thứ 3 hoặc thứ 4 để tính kết quả và cần ghi rõ trong biên bản thử.

Nếu cần có thể dùng phương pháp kiểm tra hiển vi để phân biệt các khuẩn lạc của nấm men, nấm mốc với các khuẩn lạc của vi khuẩn dựa theo hình thái của chúng.

Trong trường hợp nghi có nấm gây bệnh ở phủ tạng của gia súc gia cầm, cần tiến hành các bước xác định tiếp theo quy định của thú y.

Dựa vào phần mô tả hình thái ở phụ lục để nhận dạng sự có mặt các loại nấm sinh độc tố có trong mẫu.

7. Tính kết quả

...

...

...

Trong đó:

S C - tổng số khuẩn lạc nấm men, nấm mốc đếm được trên 4 đĩa của hai độ pha loãng liên tiếp;

n₁ - số đĩa ở độ pha loãng đầu (n₁ = 2);

n₂- số đĩa ở độ pha loãng kế tiếp (n₂ = 2);

d- hệ số pha loãng ứng với độ pha loãng đầu.

Làm tròn kết quả tới hai số có nghĩa (chẳng hạn 28.640 làm tròn là 29.000) và biểu thị theo biểu thức:

a x 10ⁿ

Trong đó:

...

...

...

n- số mũ phù hợp của 10.

7.2. Ví dụ về cách tính

Số khuẩn lạc nấm men và nấm mốc đếm được ở 4 đĩa của hai độ pha loãng liên tiếp là:

- ở độ pha loãng d = 10^-2 : đếm được 83 và 97 khuẩn lạc;

- ở độ pha loãng d = 10^-3 : đếm được 33 và 28 khuẩn lạc ta có :

10.954 được làm tròn là 11.000

Kết quả: X = 11.000 = 1,1 x 10⁴ nấm men và nấm mốc/g mẫu.

7.3. Nếu không có khuẩn lạc nấm men, nấm mốc nào trên đĩa nuôi cấy của dịch huyền phù ban đầu (d=10^-1) thì kết quả là:

...

...

...

ĐẶC ĐIỂM HÌNH THÁI CHỦ YẾU CỦA MỘT SỐ LOÀI THUỘC GIỐNG ASPERGILLUS

1. Loài Aspergillus niger

- Khuẩn lạc phẳng, có màu đen như than, mặt trái không màu, gấp nếp hình nan quạt;

- Cơ quan sinh sản: thể hình hai tầng, cuống bào tử dài 4-5mm, bào tử dính, hình cầu khi trưởng thành, xù xì, không màu

2. Loài Aspergillus fumigatus

- Khuẩn lạc phẳng, mịn như nhung, có màu xanh lục nhạt, sau chuyển đậm và hơi ngả xám trắng;

- Cơ quan sinh sản: thể hình một tầng xếp song song, cuống bào tử dài khoảng 100 mm trơn, không màu. Bọng phình dạng cầu. Bào tử dính, to, có gai.

3. Loài Aspergillus nidulans

...

...

...

- Cơ quan sinh sản: thể bình hai tầng, xếp song song, cuống bào tử dài khoảng 60 mm, trơn, màu nâu. Bào tử dính, to, có gai